李玉俠，舒丹平，張曉杰，劉化偉，朱海洋

（ 1.哈爾濱遠(yuǎn)大牧業(yè)有限公司，哈爾濱 150060；2.深圳市金新農(nóng)科技股份有限公司，深圳 518106；3.長春金新農(nóng)飼料有限公司，長春 130102）

近年來抗生素濫用現(xiàn)象越來越嚴(yán)重，國家對(duì)飼料行業(yè)的抗生素使用的管理也逐年嚴(yán)格。2017年4月硫酸粘桿菌素禁止在豬飼料中使用，標(biāo)志著以促生長功能添加，無抗時(shí)代正在來臨，對(duì)于可替代抗生素產(chǎn)品的研究迫在眉睫。發(fā)酵飼料作為抗生素的替代品在豬飼養(yǎng)應(yīng)用研究較少，但相關(guān)研究均表明其替代抗生素是可行的，本文旨在通過發(fā)酵飼料替代抗生素在斷奶仔豬日糧中的應(yīng)用以研究其替代抗生素的具體方式，從而指導(dǎo)生產(chǎn)，為抗生素替代品的研發(fā)提供一種新的嘗試。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)菌種：糞腸球菌（濰坊康地恩生物科技有限公司），枯草芽孢桿菌（廣州市華元生物科技有限公司），啤酒酵母菌（東方獸藥有限公司）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將150頭體重約7 kg斷奶仔豬（杜×長×大三元雜交豬）按體重大小隨機(jī)分為15欄，每欄10頭。分成3個(gè)處理組，每個(gè)處理組5個(gè)重復(fù)，每欄為一個(gè)重復(fù)，分別為發(fā)酵飼料組、抗生素組及對(duì)照組，飼養(yǎng)45 d。對(duì)照組：基礎(chǔ)日糧；發(fā)酵飼料組：20%取代玉米豆粕（干物質(zhì)計(jì)）；抗生素組：恩拉霉素20 mg·kg-1飼料。

1.3 試驗(yàn)飼糧

對(duì)照組飼糧營養(yǎng)水平參考NRC（2012）仔豬營養(yǎng)需要配制，對(duì)照組飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。按照對(duì)照組的玉米-豆粕型日糧按比例粉碎混合均勻，取100 kg，料水比1：1，芽孢桿菌和酵母菌的接種量為3%，乳酸菌接種量為2%，同玉米-豆粕型日糧混合均勻，填入到塑料桶中，表層用塑料薄膜密封，發(fā)酵溫度為37℃，發(fā)酵時(shí)間為72 h，之后即可作為發(fā)酵飼料添加使用[1]。發(fā)酵飼料組營養(yǎng)為對(duì)照組飼糧中的20%玉米、豆粕進(jìn)行發(fā)酵后替代相應(yīng)比例原料，抗生素組營養(yǎng)為基礎(chǔ)飼糧中添加（有效成分計(jì)）恩拉霉素20 mg·kg-1[2-3]。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在哈爾濱遠(yuǎn)大種豬場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)前豬舍清洗消毒。按照仔豬常規(guī)管理辦法進(jìn)行管理，試驗(yàn)豬只斷奶后飼養(yǎng)45 d試驗(yàn)結(jié)束。每日飼喂4次，自由采食、飲水。所有試驗(yàn)豬均飼養(yǎng)于同一棟豬舍內(nèi)，各組之間相互隔開，并保證向陽面與背陽面每組欄數(shù)相等，以控制環(huán)境因素一致。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.5.1 平均日增重

在試驗(yàn)開始前和試驗(yàn)結(jié)束后早上逐欄進(jìn)行空腹稱重，記錄總重和均重，計(jì)算公式見式1～3。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平DM

1.5.2 平均日采食量

準(zhǔn)確記錄每欄豬每天投喂量，計(jì)算公式見式4。

1.5.3 料肉比

料肉比計(jì)算公式見式5。

1.5.4 腹瀉率和發(fā)病率

腹瀉率和發(fā)病率計(jì)算公式見式6～7。腹泄判斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)為拉稀不成形狀判斷為腹瀉。發(fā)病判斷標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)為發(fā)病情況嚴(yán)重，有明顯癥狀，需要打針用藥等處理。

1.5.5 血液采集及分析

試驗(yàn)結(jié)束后每欄隨機(jī)選3頭，用真空促凝管進(jìn)行前腔靜脈采血獲取血清后，立即置于冰盒中，5 000 r·min-1離心，取上清于新的1.5 mL離心管中，冷凍保藏，用于測(cè)定血清各指標(biāo)。血清生理生化指標(biāo)及免疫指標(biāo)委托哈爾濱醫(yī)大第一附屬醫(yī)院進(jìn)行檢測(cè)。

1.5.6 糞便采集

試驗(yàn)結(jié)束前，每日9:00在豬進(jìn)食后2 h采集新鮮糞便放入編號(hào)的自封袋中，并加入10%鹽酸，置于-20℃冷凍保藏，用以測(cè)定表觀消化率。

1.5.7 飼料樣品采集

取試驗(yàn)組和對(duì)照組飼料，放置于無菌封口袋中，置于-20℃保存，用于測(cè)定飼料中的pH、水分、粗蛋白質(zhì)、鉻含量、菌數(shù)等指標(biāo)。

1.5.8 飼料中鉻含量的測(cè)定方法

飼料中鉻含量的測(cè)定采用二苯碳酰二肼比色法進(jìn)行測(cè)定。

準(zhǔn)確稱取經(jīng)過烘干、研磨的蛋白質(zhì)0.1～0.2 g于250 mL三角瓶中，加入10 mL濃硝酸，放置過夜；電熱板120℃加熱至近干，取下冷卻；分兩次加入30%的雙氧水5 mL，在電熱板上加熱至溶液無色，蒸干；取下加入水與三角瓶，用氨水（1/1）和濃硫酸（1/3）將pH調(diào)至中性；加0.5 mL硫酸（1/3）和0.5 mL磷酸（1/3）溶液，搖勻，加入一滴高錳酸鉀（2%）溶液，然后煮沸10 min，如果紫紅色退去，立即補(bǔ)加高錳酸鉀溶液使其保持紫紅色；取下加入20%尿素溶液1 mL，搖勻，滴加2%的亞硝酸鈉溶液，至紫色剛好褪去；待氣泡逸盡，過濾后轉(zhuǎn)移到比色管，稀釋至25 mL，加入1 mL顯色劑立即搖勻，10 min后于540 nm處比色；標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，鉻儲(chǔ)備液（1 mg·mL-1）的配制：稱取2.8 289 g預(yù)先經(jīng)150℃烘干1 h的重鉻酸鉀于250 mL燒杯中充分溶解后移入1 L容量瓶中，加水至刻度后混勻。

鉻標(biāo)準(zhǔn)液（10.0 μg·mL-1）的配制：移取10 mL鉻儲(chǔ)備液于1 L容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。此溶液1 mL含10 μg鉻。

分別于一組25 mL的比色管中分別加入三氧化二 鉻 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 0、 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、9 mL，加硫酸 0.5 mL（1/3），磷酸 0.5 mL（1/3）稀釋至25 mL，加入顯色劑立即搖勻，10 min后于540 nm處以水為參比進(jìn)行比色，以吸光度為縱坐標(biāo)，Cr2O3含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 生長性能

發(fā)酵飼料對(duì)豬生長性能的影響見表2。

由表2可知，各試驗(yàn)組豬初始體重、平均日采食量無顯著差異?？股亟M各項(xiàng)生長指標(biāo)與對(duì)照組相比無顯著差異。發(fā)酵飼料組的結(jié)束體重和平均日增重顯著高于對(duì)照組，料肉比顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，腹瀉率明顯減少，其中發(fā)酵飼料組腹泄率降低了52.7%，抗生素組降低了36.4%，但對(duì)于豬的發(fā)病率影響作用不大。

表2 發(fā)酵飼料對(duì)豬生長性能的影響

2.2 血清生化指標(biāo)

發(fā)酵飼料對(duì)豬血清生化及免疫指標(biāo)的影響見表3。

血液指標(biāo)可以反映出動(dòng)物體的健康狀況和營養(yǎng)代謝狀況。由表3可知試驗(yàn)組豬的IgG和IgM均高于對(duì)照組，但差異不顯著（P＜0.05），抗生素組血糖含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），發(fā)酵飼料組血清球蛋白、尿素氮顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.3 粗蛋白質(zhì)表觀消化率

發(fā)酵飼料對(duì)豬粗蛋白質(zhì)表觀消化率的影響見表4。

通過飼料中粗蛋白質(zhì)含量的分析，可知飼喂發(fā)酵飼料可略微提高飼料的粗蛋白質(zhì)含量。由表4可見，發(fā)酵飼料組和抗生素組的粗蛋白表觀消化率均比對(duì)照組高，分別提高3.7%和2.58%，但差異不顯著（P＞0.05），發(fā)酵飼料組比抗生素組提高更多。

表3 各處理組對(duì)試驗(yàn)豬血清生化及免疫指標(biāo)的影響

表4 各處理組對(duì)試驗(yàn)豬粗蛋白表觀消化率的影響%

3 討論

從試驗(yàn)結(jié)果可知，無論是生長性能、日采食量、腹瀉率還是表觀消化率，發(fā)酵飼料組都優(yōu)于抗生素組。這可能與飼料中的益生菌數(shù)量有關(guān)[4-5]。

球蛋白可以反映機(jī)體的抵抗力水平[6]。從血清生化指標(biāo)結(jié)果可知，發(fā)酵飼料組的豬血清中球蛋白和抗體（IgG和IgM）的含量均高于對(duì)照組，表明飼喂發(fā)酵飼料在一定程度上可以提高豬的免疫能力[7]。

血清中的尿素氮濃度可以比較準(zhǔn)確地反映動(dòng)物體內(nèi)氨基酸和蛋白質(zhì)代謝之間的平衡狀況[8]。研究表明，日糧中的含氮物質(zhì)增加，機(jī)體的氨基酸代謝隨之加強(qiáng)，血清中的尿素?zé)o法排出時(shí)則血清尿素氮濃度增高[9]。血清中尿素氮含量升高表明蛋白質(zhì)分解代謝增強(qiáng)[10]。試驗(yàn)可知發(fā)酵飼料組血清尿素氮顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），表明發(fā)酵飼料組豬的分解代謝增強(qiáng)。

血糖為血液中的糖分，絕大多數(shù)情況下都是葡萄糖，血糖含量降低（在生理正常值范圍內(nèi)）則表示腸道對(duì)于葡萄糖的消化吸收能力有所減弱[11]。由試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知抗生素組豬血糖含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），表明飼喂抗生素會(huì)影響豬對(duì)于葡萄糖的吸收。

4 結(jié)論

飼喂發(fā)酵飼料可以提高斷奶仔豬的生長性能和消化能力，降低豬的腹瀉率和料肉比，增強(qiáng)豬健康狀況。本試驗(yàn)研究表明，發(fā)酵飼料組血清尿素氮顯著高于對(duì)照組，表明豬的分解代謝增強(qiáng)。發(fā)酵飼料組的血清中的IgG、IgM、球蛋白的含量高于對(duì)照組，表明發(fā)酵飼料在一定程度上可以提高豬的免疫能力。

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