黃文勇 童 娟 汪亮亮

(九江學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院/附屬醫(yī)院 江西九江 332000)

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是宮頸癌的前期病變，包括CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)和CINⅢ級(jí)。宮頸癌是由子宮頸上皮內(nèi)瘤變逐步發(fā)展形成的， 其發(fā)病過(guò)程經(jīng)歷了CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、早期浸潤(rùn)癌、浸潤(rùn)癌幾個(gè)階段；有研究證實(shí)近年來(lái)我國(guó)宮頸癌的發(fā)生有明顯上升和年輕化趨勢(shì)， 發(fā)病以每年2%-3%的速度增長(zhǎng)，因此，早期診治宮頸上皮內(nèi)瘤變是降低宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵[1-2]。一直以來(lái)，宮頸組織活檢+免疫組織化學(xué)染色是確診宮頸上皮內(nèi)瘤變的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但這是一項(xiàng)侵入性檢查，患者不易耐受；而目前廣泛應(yīng)用的液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)(TCT)，方法簡(jiǎn)便無(wú)創(chuàng)，診斷特異性可達(dá)60%- 80%左右，但其敏感性偏低，尤其對(duì)于早期及低級(jí)別的腫瘤敏感性約為40%-60%；且受觀察者主觀影響較大。

近年來(lái)，隨著對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染是發(fā)生宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)的主要病因[2]，HPV感染具有極高的預(yù)測(cè)價(jià)值[3]。第二代雜交捕獲檢測(cè)技術(shù)(HC2)可通過(guò)檢測(cè)宮頸采集樣本中的脫落細(xì)胞有無(wú)上述變化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變的早期篩查[4]；目前，該技術(shù)已在歐美國(guó)家中廣泛應(yīng)用于宮頸癌早期篩查的臨床檢測(cè)中[5-7]。而分子原位雜交技術(shù)可同時(shí)進(jìn)行高危及低危HPV檢測(cè)，可與HC2技術(shù)進(jìn)行互補(bǔ)。 該研究使用第二代雜交捕獲技術(shù)(HC2)檢測(cè)被WHO確認(rèn)的13種高危HPV亞型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。同時(shí)對(duì)該活檢標(biāo)本進(jìn)行原位分子雜交HPV檢測(cè)，探討兩種方法在宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)診斷中的特異性及敏感性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2015年4月-2017年4月九江學(xué)院附屬醫(yī)院1 500例婦產(chǎn)科就診和健康體檢患者，年齡21-80歲，所有患者在該次篩查前均未見宮頸上皮內(nèi)瘤變病史。

1.2 檢測(cè)方法

使用窺器暴露宮頸， 用專用的HPV 采樣刷置于宮頸口，逆時(shí)針方向轉(zhuǎn)3 圈，并停留10 s。把采樣刷放入專用的標(biāo)本儲(chǔ)存瓶里， 折斷采樣刷多余的部份，將采樣刷留在標(biāo)本儲(chǔ)存瓶里，以保留足夠量標(biāo)本。蓋好蓋子，作好標(biāo)記進(jìn)行HC2檢測(cè)。對(duì)HPV DNA檢測(cè)為高危型感染者行陰道鏡檢查，醋酸實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性或碘實(shí)驗(yàn)陰性患者進(jìn)行多點(diǎn)活檢，并進(jìn)行原位雜交分子檢測(cè)，病理結(jié)果由3位資深病理醫(yī)生閱片后診斷。宮頸病理組織學(xué)診斷≥CINⅠ級(jí)判定為陽(yáng)性。判斷HC2檢測(cè)技術(shù)和原位雜交技術(shù)對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變的敏感性和特異性，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷、尤其是早期診斷。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)算HC2與原位雜交技術(shù)檢測(cè)CIN的靈敏度與特異度。

2 結(jié)果

2.1 HPV檢測(cè)結(jié)果

HC2陽(yáng)性患者中HPV的感染率為54.5%(12/22)，HC2陰性者中HPV的感染率為13.6%(3/22)，詳見表1。HPV檢測(cè)CIN的靈敏度和特異度分別為54.5%和86.4%。

表1 1500例篩查者中HC2和HPV檢測(cè)結(jié)果

2.2 HC2檢測(cè)結(jié)果

1 500例被篩查對(duì)象中檢測(cè)HC2陽(yáng)性比例為15.5%(233/1 500)，HC2陰性比例為84.5%(1 267/1 500)。在233例HC2陽(yáng)性患者中，101例患者進(jìn)行了宮頸活檢病理組織學(xué)診斷，檢出CIN患者共67例，比率為66.3%(67/101)。HC2篩查陰性者當(dāng)中，有117例進(jìn)行了宮頸活檢病理組織學(xué)診斷，檢出CIN患者7例，比率為5.9%(7/117)，見表1。根據(jù)HC2檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算得出HC2檢測(cè)CIN的靈敏度和特異度分別為89.3%和76.2%。

3 討論

雜交捕獲2代技術(shù)(HC2)原理是基于信號(hào)放大的酶標(biāo)板技術(shù)和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法的核酸雜交檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。含有目標(biāo)DNA的標(biāo)本與一種特殊的HPV RNA 探針雞尾酒雜交，反應(yīng)形成的RNA、DNA雜交體被捕獲到包被有RNA、DNA雜交體對(duì)應(yīng)特異抗體的酶標(biāo)板小孔杯的表面上。被固定好的雜交體然后與結(jié)合了RNA、DNA雜交體對(duì)應(yīng)特異抗體的堿性磷酸酯酶反應(yīng)，然后再用化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行檢測(cè)。幾個(gè)堿性磷酸酯酶分子與每一個(gè)抗體結(jié)合，多個(gè)結(jié)合抗體結(jié)合到每個(gè)被捕獲的雜交體上，這些雜合體導(dǎo)致了真正的信號(hào)放大作用。由于底物附著有結(jié)合堿性磷酸酯酶，光發(fā)射出來(lái)可以用照度計(jì)測(cè)量其相對(duì)光單位，發(fā)出光的強(qiáng)度指出了標(biāo)本中存在或不存在目標(biāo)DNA。HC2技術(shù)主要用于同時(shí)檢測(cè)被WHO確認(rèn)的13種高危HPV亞型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68的研究，這些高危亞型可以反映腫瘤在基因組水平的改變，研究這些高危HPV亞型的DNA組成將有助于腫瘤發(fā)病機(jī)制的闡明[8-10]。

依據(jù)HPV與腫瘤的關(guān)系，不同類別的HPV感染可導(dǎo)致不同的臨床病變，因此HC2技術(shù)成為精確診斷和分型的指標(biāo)。另一方面，同時(shí)對(duì)該患者活檢標(biāo)本進(jìn)行原位雜交分子檢測(cè)，可彌補(bǔ)HC2檢測(cè)技術(shù)的不足。基于此，該研究采用HC2和原位雜交分子檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，探討其在CIN診斷中的靈敏度和特異度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，1 500例被篩查者中HC2陽(yáng)性檢出率為15.5%(233/1 500)，101例HC2陽(yáng)性患者當(dāng)中CIN患者67例(陽(yáng)性率為66.3%)，117例HC2陰性患者當(dāng)中CIN患者7例(陽(yáng)性率為5.9%)。HC2陽(yáng)性者中伴HPV感染比例為54.5%(12/22)，HC2陰性者中伴HPV感染比例為13.6%(3/22)。HC2檢測(cè)CIN的靈敏度與特異度分別為89.3%和76.2%， HPV檢測(cè)CIN的靈敏度和特異度分別為54.5%和86.4%。

與傳統(tǒng)檢測(cè)手段相比較，HC2聯(lián)合原位雜交檢測(cè)技術(shù)能夠顯著提高CIN檢測(cè)的敏感性和特異性，在CIN的早期診斷中具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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