汪亮亮 曹 芳 魏淑飛 李 婷 徐 曉 鄭美蓉

(1九江學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院/附屬醫(yī)院病理科；2九江學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室 江西九江 332000)

胃癌現(xiàn)在是中國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，每年新發(fā)的病例達(dá)到40多萬(wàn)人，發(fā)病率在惡性腫瘤排第一位，在惡性腫瘤的死亡率中排名第二位。目前國(guó)內(nèi)診斷的胃癌多數(shù)是中晚期胃癌，只是手術(shù)治療為主，輔以放化療，但對(duì)一些晚期胃癌的患者治療效果不明顯。目前新輔助治療為晚期胃癌的患者提供了新的選擇，因此胃癌分子生物學(xué)方面的研究和靶向藥物治療方面的研究十分多，成為腫瘤治療的熱點(diǎn)之一。HER2和EGFR(又稱HER1)同屬于表皮生長(zhǎng)因子受體家族，有文獻(xiàn)報(bào)道這兩種基因在胃癌的表達(dá)會(huì)升高。該實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用免疫組化(IHC)的方法對(duì)HER2、EGFR(HER1)蛋白在胃癌中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)HER2免疫組化表達(dá)2+的進(jìn)行分子檢測(cè)(FISH)，分析它們與腫瘤發(fā)生的性別、年齡、組織學(xué)、浸潤(rùn)深度、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及病理分期的相關(guān)性，以期為晚期胃癌的治療、預(yù)后提供相關(guān)的參考依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2014年-2017年10月期間在九江學(xué)院附屬醫(yī)院外科住院并進(jìn)行手術(shù)治療的胃癌病人129例，其中男85例，女44例；年齡38-86歲，平均年齡62.03±6.78歲；≥60歲81例，<60歲44例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療，病理術(shù)后均診斷為腺癌。

1.2 方法

1.2.1 常規(guī)病理 所有手術(shù)標(biāo)本均在切除30min內(nèi)加入10%中性福爾馬林固定24h，取材、脫水、石蠟包埋，4微米厚切片，HE染色后，由2名病理醫(yī)生診斷。

1.2.2 免疫組化 免疫組化采用MaxEnVision法，3 μm厚切片，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。所用抗體HER2、EGFR均購(gòu)自福州邁新公司，所有抗體均按照說(shuō)明書操作。

1.2.3 HER2熒光原位雜交 原位雜交儀為德國(guó)DAKO公司，HER2熒光原位雜交試劑盒購(gòu)自廣東安必平公司，按說(shuō)明書操作。

1.3 結(jié)果判讀

1.3.1 HE結(jié)果判斷 采用美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)癌癥分期手冊(cè)(第六版)修訂的胃癌 TNM 病理分期標(biāo)準(zhǔn)。組織學(xué)分型按 Lauren 分型[1]標(biāo)準(zhǔn)分為高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌(包括印戒細(xì)胞癌或黏液腺癌)。

1.3.2 HER-2免疫組化過(guò)表達(dá)結(jié)果判斷 所有免疫組化切片均由 2名資深病理科醫(yī)生雙盲獨(dú)立觀察評(píng)估。HER2陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒，位于細(xì)胞膜，其結(jié)果判定采用Herceptest進(jìn)行IHC檢測(cè)分析并根據(jù)修訂的評(píng)分系統(tǒng)[2]進(jìn)行評(píng)分。無(wú)著色/少于10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色(0/陰性)(見(jiàn)圖1)；大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱、不完整的細(xì)胞膜著色(1+/陰性)(見(jiàn)圖2)；大于 10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的細(xì)胞膜著色(2+/可疑陽(yáng)性)(見(jiàn)圖3)；大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的、完整的細(xì)胞膜著色(3+/陽(yáng)性)(見(jiàn)圖4)。此評(píng)分系統(tǒng)中，將0及+歸為陰性，2+歸為可疑陽(yáng)性，做FISH檢測(cè)明確是否陽(yáng)性，3+歸為陽(yáng)性。

1.3.3 EGFR 過(guò)表達(dá)結(jié)果判斷 陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞膜。腫瘤細(xì)胞不著色/<10%的腫瘤細(xì)胞著色為陰性(-)(見(jiàn)圖5)，≥10%的腫瘤細(xì)胞著色為陽(yáng)性，并根據(jù)腫瘤陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例分為：10～25%(+)，26～50%(++)，50～75%(+++)，>75%(+++)。++以上認(rèn)為陽(yáng)性(見(jiàn)圖6和圖7)。

1.3.4 HER-2熒光原位雜交(FISH)結(jié)果判讀 計(jì)數(shù)30個(gè)細(xì)胞核內(nèi)橘紅色的Her2基因熒光信號(hào)和17號(hào)染色體的綠色熒光信號(hào)，統(tǒng)計(jì)其比例(30個(gè)細(xì)胞核中紅信號(hào)總數(shù)/30個(gè)細(xì)胞核中綠信號(hào)總數(shù))。Her-2陽(yáng)性定義為為Fish陽(yáng)性(Her2基因熒光信號(hào)/17號(hào)染色體的綠色熒光信號(hào)>2) (見(jiàn)圖8)。

圖1 HER-2(0)

圖2 HER-2(+)

圖3 HER-2(2+)

圖4 HER-2(3+)

圖5 EGFR(-)

圖6 EGFR(+)

圖7 EGFR(+)

圖8 熒光原位雜交(FISH)檢測(cè)Her-2陽(yáng)性，呈簇狀分布。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

原始數(shù)據(jù)采用EXCEL建立表格，經(jīng)整理核對(duì)后導(dǎo)入SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，統(tǒng)計(jì)分析方法采用二分類Logistic多因素回歸分析，對(duì)胃癌患者的性別、年齡、組織學(xué)、浸潤(rùn)、脈管、淋巴結(jié)情況及病理分期與因變量HER2、EGFR表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行分析。同時(shí)采用spearman等級(jí)相關(guān)分析對(duì)HER2、EGFR表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行檢驗(yàn)，以p<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HER2蛋白在胃癌中的表達(dá)情況

129例患者中HER2(3+)的病例和HER2(2+)經(jīng)FISH證實(shí)有擴(kuò)增的病例共13例，陽(yáng)性率10.78%(13/129)；HER2的陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、病理分期有相關(guān)性(p<0.05)，而與性別、年齡、浸潤(rùn)深度、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性(p<0.05),詳見(jiàn)表1。

表1 HER2蛋白在胃癌中的表達(dá)情況

2.2 EGFR蛋白在胃癌中的表達(dá)情況

EGFR蛋白陽(yáng)性率20.93%(27/129)，陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、病理分期有相關(guān)性(p<0.05)，而與性別、年齡、浸潤(rùn)深度、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性(p>0.05)，詳見(jiàn)表2。

表2 EGFR蛋白在胃癌中的表達(dá)情況

2.3 HER2、EGFR表達(dá)的相關(guān)性

spearman等級(jí)相關(guān)分析對(duì)HER2、EGFR表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，兩者表達(dá)無(wú)相關(guān)性(p=0.094)。

3 討論

HER2是表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員，表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員一共有4個(gè)，分別是HER1(EGFR)、HER2、HER3、HER4。它們影響著腫瘤細(xì)胞的分子生物學(xué)結(jié)構(gòu)，包括腫瘤細(xì)胞的增增殖、凋亡、黏附性和腫瘤的分化[1]。當(dāng)人體內(nèi)和HER2大量擴(kuò)增是，會(huì)激活多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑，從而引起細(xì)胞的不規(guī)律增殖和不凋亡，從而引起癌變[4]。

研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤中HER2會(huì)出現(xiàn)蛋白的過(guò)表達(dá)和基因的擴(kuò)增。 20%-30%的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的 HER2會(huì)出現(xiàn)蛋白的過(guò)表達(dá)和基因的擴(kuò)增[5-7]。表達(dá)越高，預(yù)后就越差[8]。一些文獻(xiàn)報(bào)到胃癌HER2的過(guò)表達(dá)率和基因擴(kuò)增率為9-38%[9-10], 該研究HER2的陽(yáng)性表達(dá)率為10.78%(13/129), 與以前的研究結(jié)果一致。

國(guó)外的一些研究報(bào)道HER2的過(guò)表達(dá)與腫瘤的大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移和病理分期有關(guān)[11]，一些研究報(bào)道說(shuō)與組織學(xué)類型有關(guān)[12]。該研究發(fā)現(xiàn)HER2的過(guò)表達(dá)與腫瘤的分化程度、病理分期有相關(guān)性(p<0.05)，而與性別、年齡、脈管浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性(p>0.05)。由此可證明HER2的過(guò)表達(dá)與胃癌的預(yù)后差有關(guān)。

EGFR是原癌基因CerBb-1的產(chǎn)物，與配體結(jié)合以后激活PTK蛋白，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，血管增生，侵襲和轉(zhuǎn)移，而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。已證實(shí)在食管癌、乳腺癌、胃癌、腸癌等多種腫瘤中有EGFR蛋白表達(dá)；但文獻(xiàn)報(bào)道在胃癌中EGFR蛋白表達(dá)率從9%-62.7%，差異性較大。該研究EGFR表達(dá)率20.93%(27/129)，與文獻(xiàn)報(bào)道的相一致。

文獻(xiàn)報(bào)道的胃癌臨床病理指標(biāo)與EGFR蛋白表達(dá)關(guān)系存在不一致。一些研究認(rèn)為 EGFR 的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、 病理分期、 Lauren 分型、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等有相關(guān)性，與性別、年齡、腫瘤發(fā)生部位無(wú)相關(guān)性。 一些研究證實(shí) EGFR 的高表達(dá)與年齡、腫瘤分化程度相關(guān)。研究證實(shí) EGFR 高表達(dá)的胃癌患者預(yù)后較不表達(dá)者差，多因素分析提示 EGFR 的高表達(dá)可能為一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良的標(biāo)志。該研究發(fā)現(xiàn)EGFR蛋白表達(dá)陽(yáng)性與分化程度、病理分期有相關(guān)性(p<0.05)，而與性別、年齡、浸潤(rùn)深度、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性(p>0.05)。

HER2與EGFR同屬于表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員，兩者在胃癌中均有高表達(dá)，且臨床參數(shù)關(guān)系密切，兩者的表達(dá)是否有關(guān)聯(lián)性文獻(xiàn)報(bào)告也不一致。該研究通過(guò)spearman等級(jí)相關(guān)分析對(duì)HER2、EGFR表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，兩者表達(dá)無(wú)相關(guān)性(p=0.094)，說(shuō)明HER2和EGFR可以分別作為獨(dú)立的預(yù)后因素。

綜上所述，HER2、EGFR在正常胃粘膜中不表達(dá)，在胃癌中均有高表達(dá)，均是與腫瘤的分化程度、病理分期有相關(guān)性(p<0.05)，而與性別、年齡、浸潤(rùn)深度、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性(p>0.05)。文章研究的結(jié)果，為臨床晚期胃癌患者的治療方式的選擇、靶向藥物的選擇、預(yù)后評(píng)估提供理論依據(jù)。

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