曲 萍，宋曉暉，董 浩，胡冬梅，趙柏林，孫 雨，張 倩，王曉英，楊 林

(中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 102618)

牛傳染性鼻氣管炎( Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)又稱牛皰疹病毒Ⅰ型感染或牛傳染性壞死性鼻炎，是由牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)，又稱牛皰疹病毒Ⅰ型(Bovine herpesvirus 1,BHV-1)引起牛的一種接觸性傳染病[1]。臨床上表現(xiàn)多種病型，如上呼吸道黏膜炎癥、結(jié)膜炎、乳房炎、膿皰性外陰陰道炎或龜頭包皮炎、幼牛腦膜腦炎和流產(chǎn)等，可以認(rèn)為是由同一種病原引起多種病癥的疫病[2-3]。該病又被稱為“壞死性鼻炎”、“紅鼻子病”或牛媾疫[4]。感染該病后育肥牛群增重減緩，奶牛產(chǎn)奶量較少甚至停乳，給養(yǎng)牛業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[5]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將該病列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國農(nóng)業(yè)部2008年修訂的《一、二、三類動(dòng)物疫病病種名錄》將其列為二類動(dòng)物疫病，該病也是《中華人民共和國進(jìn)境動(dòng)植物檢疫法》規(guī)定的進(jìn)境動(dòng)物二類傳染病[6]。本病1955年首先發(fā)生于美國[7]，現(xiàn)已廣泛分布于全世界。我國于1980年從新西蘭進(jìn)口牛中首次分離到該病毒[8]，此后，該病流行一直呈上升趨勢。近年來，隨著養(yǎng)牛數(shù)量和規(guī)模的增加，BHV-1的感染情況更加嚴(yán)重。為了更全面、準(zhǔn)確掌握我國牧區(qū)半牧區(qū)省份牛傳染性鼻氣管炎的流行和分布情況，并進(jìn)行相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)分析和科學(xué)防控，本研究對我國11個(gè)牧區(qū)半牧區(qū)省區(qū)近3年的牛傳染性鼻氣管炎的流行情況進(jìn)行了調(diào)查分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 牛皰疹病毒I型特異性抗體gB阻斷ELISA試劑盒，西班牙HIPRA公司產(chǎn)品。

1.1.2 血清樣品 采集河北、陜西、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、四川、青海、甘肅、寧夏和新疆等11個(gè)牧區(qū)半牧區(qū)省份的牛血清樣品共計(jì)9 668份。按照采樣年份分，其中2014年3 537份，2015年2 955份，2016年3 176份。按照生產(chǎn)模式分，規(guī)模化養(yǎng)殖場6 787份，散養(yǎng)戶1 891份，屠宰場990份。按照生產(chǎn)用途分，乳用牛3 692份，肉用牛2 767份，乳肉兼用牛1 952份，種用牛293份，不詳964份。

1.2 方法

1.2.1 牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體檢測 將待檢血清用樣品稀釋液10倍稀釋混勻后，加入已用BHV-1滅活抗原包被好的ELISA反應(yīng)板中，加入量為100 μL/孔，在2℃～8℃過夜作用15 h～24 h。棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌3次后拍干，加入酶標(biāo)復(fù)合物100 μL/孔，置37℃作用30 min。棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌3次后拍干，加底物100 μL/孔，輕搖板2 s，置于室溫避光作用10 min。加終止液100 μL/孔，輕敲平板混勻，在450 nm下讀數(shù)并記錄結(jié)果，檢測每批血樣均設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽性對照。具體操作見牛皰疹病毒I型特異性抗體gB阻斷ELISA試劑盒說明書。

1.2.2 結(jié)果判定 陰性對照OD值(OD值陰性)>0.6；陽性對照阻斷率(陽性%IN)>70%的條件下檢測結(jié)果有效，否則試驗(yàn)不成立，需重新做。

按照以下%IN判定每個(gè)樣品的結(jié)果：%IN=((OD值陰性-OD值樣品)/OD值陰性)×100%；當(dāng)%IN≥29%時(shí)結(jié)果判為陽性；%IN<29%時(shí)結(jié)果判為陰性。

2 結(jié)果

2.1 2014年-2016年我國牧區(qū)半牧區(qū)省份牛傳染性鼻氣管炎血清抗體監(jiān)測情況變化

本次共調(diào)查牛血清樣品9 668份，檢出牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體陽性樣品共5 102份，平均陽性率為52.77%。2014年-2016年3年間抗體陽性率總體保持平穩(wěn)，在50%～60%之間波動(dòng)，其中2015年個(gè)體陽性率最高，為57.16%，2016年個(gè)體陽性率最低，為50.16%。群體陽性率總體趨勢同個(gè)體陽性率，但均處在高位水平，特別是2015年-2016年，每年的群體陽性率均達(dá)到90%以上(圖1)。

圖1 2014年-2016年我國牧區(qū)半牧區(qū)省份牛傳染性鼻氣管炎抗體檢測結(jié)果Fig.1 The detection results of BHV antibodies in pastoral and semipastoral provinces of China from 2014 to 2016

2.2 不同省份牛傳染性鼻氣管炎血清抗體監(jiān)測情況變化

從區(qū)域分布看，大體趨勢是省份之間抗體陽性率的差異逐年縮小。2014年不同省份間差異最大，個(gè)體陽性率從30.33%～84.96%不等；2015年差異有所縮小，2016年較為集中的分布在32.33%～60.67%之間。

2.3 不同來源牛傳染性鼻氣管炎血清抗體監(jiān)測情況變化

規(guī)模場、散養(yǎng)戶和屠宰場的群體陽性率均呈先上升后緩慢下降的趨勢，2014年三者差異不顯著，后差異逐漸拉開，至2016年，規(guī)模場的群體陽性率最高，達(dá)96.97%。對不同來源的個(gè)體陽性率進(jìn)行比較，2014年三者差異亦不顯著，維持在50%～30%之間，2015年-2016年，屠宰場的個(gè)體陽率均為三者最高，分別為79.93%和65.29%(圖2)。

2.4 不同生產(chǎn)用途牛傳染性鼻氣管炎血清抗體監(jiān)測情況變化

將不同生產(chǎn)用途牛群的牛傳染性鼻氣管炎感染情況進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)歷年乳用牛的個(gè)體陽性率均高于肉用牛及乳肉兼用牛(圖3)，而由于種用牛的檢測數(shù)量(僅293份)顯著低于其他用途牛，其歷年抗體陽性率變化較大，若想摸清感染規(guī)律，還需進(jìn)一步加大相關(guān)檢測樣品數(shù)量予以證實(shí)。

2.5 與牛病毒性腹瀉病毒混合感染情況

同時(shí)對全部9 668份牛血清樣品進(jìn)行牛病毒性腹瀉抗體檢測，結(jié)果顯示牛群中牛傳染性鼻氣管炎和牛病毒性腹瀉混合感染的情況較普遍，2014年混合感染率為38.31%，到2015年上升至43.59%，2016年緩慢下降至42.25%(圖4)。

圖2 不同來源牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體檢測結(jié)果Fig.2 The detection results of BHV antibodies from different sources

圖3 不同品種牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體檢測結(jié)果Fig.3 The detection results of BHV antibodies from different breedings

圖4 牛傳染性鼻氣管炎與牛病毒性腹瀉混合感染陽性率Fig.4 The positive rate of mixed infections with BHV and BVDV

3 討論

潛伏感染和間歇排毒是BHV-1型感染后的主要特點(diǎn)。該病毒感染牛后可潛伏在三叉神經(jīng)，使病牛長期攜帶病毒，并在一定條件下(如運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激因素導(dǎo)致免疫力下降)激活，通過呼吸道排毒，導(dǎo)致大范圍感染[9]。該病毒初次感染牛后潛伏在三叉神經(jīng)節(jié)中，應(yīng)激因素可激活潛伏感染病毒，重新發(fā)生感染并排出病毒。因此，除從初乳中獲得母源抗體的犢牛以及注射過滅活疫苗的非感染牛外，任何攜帶病毒抗體的動(dòng)物，都應(yīng)視為攜帶者和潛在的間歇排毒者[1，10]。在本次采樣工作實(shí)施前，我國尚無商品化牛傳染性鼻氣管炎病毒出售，且對樣品進(jìn)行免疫背景調(diào)查也均未實(shí)施過該病的免疫，因此血清抗體的檢測情況可以一定程度反映出我國牧區(qū)半牧區(qū)省份該病的流行與分布情況。

從年度分布看，每年的群體陽性率都在80%以上，2015年甚至達(dá)到97.83%，說明在我國牧區(qū)半牧區(qū)省份，牛傳染性鼻氣管炎的感染已十分普遍，波及到大部分的牛場/牛群。而不同省份之間感染情況逐年趨于相近，推測與近年活體動(dòng)物在全國范圍內(nèi)的大流通存在一定關(guān)系。按照樣品來源分，雖然規(guī)模場的個(gè)體陽性率均不是歷年最高，但其群體陽性率卻高于散養(yǎng)戶和屠宰場，說明牛傳染性鼻氣管炎在規(guī)模場的感染已成為十分普遍的現(xiàn)象。由于潛伏感染是牛傳染性鼻氣管炎的特點(diǎn)之一，免疫力下降時(shí)通過呼吸系統(tǒng)大量排毒感染牛群，因此應(yīng)格外重視規(guī)?；B(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理工作。本次調(diào)查還對不同生產(chǎn)用途牛的血清抗體陽性率進(jìn)行了比較分析，結(jié)果顯示歷年乳用牛的個(gè)體陽性率均高于肉用牛及乳肉兼用牛。究其原因，可能與肉牛飼喂周期相對較短、奶牛飼喂周期較長有關(guān)。較長的飼喂周期可導(dǎo)致牛群感染的幾率顯著增加，因此奶?？贵w陽性率普遍較高。牛病毒性腹瀉病毒和牛傳染性鼻氣管炎病毒是牛呼吸道疾病綜合征的主要誘發(fā)病毒，二者均可引起免疫抑制造成牛群對疫苗的免疫反應(yīng)能力降低，從而影響疫苗的免疫效果。此外，當(dāng)感染這兩種病毒時(shí)，還容易繼發(fā)細(xì)菌感染導(dǎo)致牛群的發(fā)病率和死亡率增加。3年的混合感染率在38%～43%之間，說明兩病的混合感染現(xiàn)象已十分普遍，提示我們應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對混合感染牛群的飼養(yǎng)管理和疫病防控工作。

牛傳染性鼻氣管炎自20世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)至今，給世界養(yǎng)牛業(yè)帶來了巨大損失，是牛呼吸道疾病綜合征(BRDC)的主要誘發(fā)病毒之一[11]。目前，只有歐洲部分國家啟動(dòng)了根除計(jì)劃，其中奧地利、丹麥、芬蘭、瑞典、瑞士、挪威、意大利的波爾查諾省以及德國巴伐利亞自由州的部分地區(qū)實(shí)現(xiàn)了根除[12]。但由于撲殺陽性牛耗資巨大，對擁有大量牛群的發(fā)展中國家并不現(xiàn)實(shí)。從本次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果看，牛傳染性鼻氣管炎在我國牧區(qū)半牧區(qū)省份的流行已成為十分普遍的現(xiàn)象，應(yīng)當(dāng)予以重視。建議針對我國國情，采取加強(qiáng)宣傳，嚴(yán)格檢疫制度、提高牛場飼養(yǎng)管理水平、實(shí)時(shí)監(jiān)測疫情動(dòng)態(tài)、定期接種疫苗等綜合防控措施,加大對該病的防控力度，促進(jìn)我國養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn):

[1] 農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局.一二三類動(dòng)物疫病釋義[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.

[2] 薛 飛，朱遠(yuǎn)茂，馬 磊.我國牛傳染性鼻氣管炎研究現(xiàn)狀及防控展望[J].中國奶牛，2016(6):39-43.

[3] Hou Peili, Wang Hongmei, Zhao Guimin . Rapid detection of infectious bovine Rhinotracheitis virus using recombinase polymerase amplification assays[J]. BMC Vet Res,2017,13:386.

[4] 張 芳，劉瑞寧，陳穎鈺等. 牛傳染性鼻氣管炎診斷方法研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，38(4):93-97.

[5] 田克恭，李 明.動(dòng)物疫病診斷技術(shù)理論與應(yīng)用[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2014.

[6] 陳國強(qiáng)，張 睿，陳 雷，等.對從大洋洲進(jìn)口牛的皰疹病毒I型五種檢疫方案的評估[J].中國動(dòng)物檢疫，2016,31(12)：61-64.

[7] Madin S H,York C J,Mchercher D G.Isolation of the infectious bovine rhinotracheitis virus[J].Science,1956,124(3225)：721-722.

[8] 周泰沖，葉章明，黎少權(quán)，等.從新西蘭進(jìn)口奶牛中分離傳染性牛鼻道氣管炎病毒[J].獸醫(yī)科技雜志，1981(1)：6-9.

[9] 劉瑞寧，鄧明亮，劉玉輝，等.牛傳染性鼻氣管炎疫苗研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，37(2):85-90.

[10] Saravanajayam M, Kumanan K,Balasubramaniam A.Seroepidemiology of infectious bovine rhinotracheitis infection in unvaccinated cattle[J], Vet World, 2015,8(12):1416-1419.

[11] Gershwin L J, Van Eenennaam A L, Anderson M L, et al.Single pathogen challenge with agents of the bovine respiratory disease complex[J], PloS One,2015,10(11):e0142479.

[12] Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals(2017) chapter 2.4.12. [EB/OL]. (2017-05)[2017-12-14]. http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health-standards/tahm/2.04.12-IBR-IPV.