李海歐 ，陳 琪 ，林英華 ，雷雯樸 ，孫 耀 ，段鵬飛 ，陳治宇 ，盛 華 ，金 蓉 ，賽 那

（1.內蒙古醫(yī)科大學藥學院，內蒙古 呼和浩特 010110；2.內蒙古醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，內蒙古 呼和浩特 010110）

黃芪（Astragalus membranaceus）為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，是豆科植物中最為常用的中草藥［1］。其含有多種對人體有益的生物成分，例如黃芪皂苷、胡蘿卜素、丁酸、葉酸、苦味素、香豆素、膽堿、甜菜堿、亞油酸、亞麻酸等［2］。傳統(tǒng)中醫(yī)藥學研究表明，黃芪具有補氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌、利水消腫之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，黃芪能增強機體免疫功能、促進細胞代謝、調節(jié)細胞DNA及RNA復制，具有固腎降壓、保肝抗炎的功能［3］。

黃芪多糖 （Astragalus polysaecharide，APS）是黃芪的主要成分。近年來研究發(fā)現(xiàn)，其具有免疫調節(jié)、抗氧化、保護心肌、促進骨髓造血干細胞增殖和調節(jié)血糖等多方面的藥理作用［4］，是極具價值的免疫增強劑。黃芪多糖可對抗心律失常，對病毒性心肌炎療效獨特；還可對抗化療毒副反應，加快恢復患者的肝損傷。多糖是由多個單糖連接而成的多聚糖?？茖W家研究發(fā)現(xiàn)，多糖及糖復合物參與和介導了細胞各種生命現(xiàn)象的調節(jié)，特別是免疫功能的調節(jié)［5］。中草藥中含有多種多糖類成分，除了營養(yǎng)作用外，還具有顯著而特殊的藥理學特征。因此，人們逐漸開始關注中草藥多糖成分的藥理作用及其應用價值。中藥多糖具有增強機體免疫功能及抗腫瘤等藥用價值且?guī)缀鯖]有毒性，因而成為當前研究的熱點。黃芪多糖的藥理作用也引起了學術界的普遍關注［6-7］。近年來，黃芪多糖顯著的抗癌作用更加受到關注［8-9］，因此，黃芪多糖提取過程的控制與優(yōu)化對于深入探究其藥理學作用具有重要意義。

目前，黃芪多糖提取工藝主要有醇除水提法、堿醇提取法、堿水提取法、酶提取法、超聲波提取法、溫水提醇沉法、微波提取法、水回流提取法、傳統(tǒng)水煎煮法等［10］。該研究選取操作相對簡單的水回流提取法，參照有關文獻選取料液比、提取時間、提取次數(shù)、浸泡時間4個因素，采用正交設計對黃芪多糖的水回流提取過程工藝條件進行研究，以期確定該方法下最佳的提取條件，為黃芪多糖提取工藝的優(yōu)化提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

黃芪購自呼和浩特市惠豐堂大藥房 （內蒙古蒙藥股份有限公司，國藥準字Z20026052）。葡萄糖（天津市凱通化學試劑有限公司，分析純），無水乙醇及濃硫酸（天津市津東天正精細化學試劑廠，分析純）。

TU-1901雙光束紫外可見分光光度計 （北京普析通用有限責任公司），R-1001N旋轉蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會社），HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠），SHZ-D型循環(huán)水式多用真空泵（上海豫康科教儀器設備有限公司），DGH80-B恒溫干燥箱（北京中西遠大科技有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制：精密量取0.04 g/L葡萄糖對照品溶液 0、0.25、0.5、1.0、1.5、2.0 mL 置于 10 mL具塞管中，加5%苯酚1.0 mL，冷水中加入濃硫酸5 mL，在冷水中放置5 min，搖勻，置沸水浴中15 min，再置冷水中5 min，在490 nm處測定各樣品吸光度值。以吸光度值為縱坐標，以葡萄糖含量為橫坐標繪制標準曲線。

1.2.2 黃芪多糖提取條件的優(yōu)化

1.2.2.1 提取方法：稱取10 g黃芪，置于圓底燒瓶中，按正交試驗設計安排加入蒸餾水，在80℃左右回流加熱提取，以活性炭脫色，將得到的溶液用旋蒸儀濃縮至10 mL左右，加入5倍體積的95%乙醇，放入冰箱靜置24 h。對醇沉得到的白色絮狀多糖沉淀離心，得到沉淀。將得到的沉淀用無水乙醇和三氯甲烷清洗后放在小燒杯中，在水浴鍋中蒸干，之后在80℃烘箱中烘干即得多糖粗品，稱重，按照方法1.2.1中繪制的標準曲線測定粗多糖樣品中的多糖含量，即可得到原藥材中的多糖含量。

1.2.2.2 正交試驗設計：采用水回流提取法，以料液比（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）、浸泡時間（D）為試驗因素，每個因素下設計3個水平，根據(jù)L9（34）正交表安排試驗，以黃芪多糖含量為指標，優(yōu)選黃芪多糖的水回流提取工藝。正交試驗因素水平見表1。

表1 正交試驗因素水平

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

以葡萄糖對照品溶液中的葡萄糖含量為橫坐標，以各濃度葡萄糖對照品溶液在490 nm處的吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。獲得的標準曲線見圖1，得到的回歸方程為：Y=0.0053X+0.0008，R=0.9998。

圖1 葡萄糖對照品溶液標準曲線

2.2 正交試驗

由表2可知，4個因素對黃芪多糖浸提效果的影響順序大小為：提取次數(shù)（C）>提取時間（B）>浸泡時間（D）>料液比（A），即提取次數(shù)對黃芪多糖的提取效果影響最大；以粗多糖含糖量和原藥材多糖含糖量為考察指標，4因素3水平最佳提取組合為：A3B1C3D2，即利用水回流提取法提取黃芪多糖，當料液比為1∶12、提取時間為1.0 h、浸泡時間為1.0 h、提取次數(shù)為3次時，其提取效果最佳。

2.3 最優(yōu)提取條件的驗證

取3份黃芪藥材，每份10 g，根據(jù)篩選得到的最佳提取條件組合A3B1C3D2進行正交驗證試驗，測得3份黃芪藥材中黃芪多糖含量占多糖粗品的百分比分別為58.14%、58.33%、58.22%，平均值為58.23%，其中多糖含量占原藥材的6.4%，RSD＝1.86%（n＝3）。結果表明，篩選的最佳提取條件基本穩(wěn)定，有較好的重復性。

表2 正交試驗結果

3 結論

該研究采用正交設計優(yōu)化了黃芪多糖的提取工藝，利用優(yōu)化后的工藝進行黃芪多糖提取，具有操作簡便、快速，重復性、穩(wěn)定性良好等優(yōu)點，適用于黃芪多糖的規(guī)?；崛?。

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［1］張文，周延升.黃芪中多糖的提取及含量分析［J］.微量元素與健康研究，2004，21（2）：21-22.

［2］賈淑琴.黃芪的化學成分、藥理和臨床研究［J］.天津藥學，1994，6（4）：24-27.

［3］祝曉玲.黃芪的藥理學研究進展［J］.四川生理科學雜志，1998，20（1）：26-28.

［4］周金黃，王筠默.中藥藥理學［M］.上海：上海科技出版社，1986.

［5］儲茂泉，劉國杰.中藥提取過程的動力學［J］.藥學學報，2002，37（7）：559-562.

［6］耿炤.中藥提取物固體顆?；芯浚跠］.上海：上海中醫(yī)藥大學，2004.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 ［M］.2005年版.北京：化學工業(yè)出版社，2005.

［8］李玉芳，徐芹偉，張麗，等.中草藥肉蓯蓉和黃芪對豬早期胚胎體外發(fā)育的影響 ［J］.江西農業(yè)大學學報，2007，29（5）：805-808.

［9］徐旭，湯立達.黃芪的心血管藥理作用研究進展［J］.中國新藥雜志，2003，12（11）：899-901.

［10］倪艷，蘇強，劉霞，等.黃芪多糖水煎提取工藝的優(yōu)化試驗研究［J］.中國中藥雜志，1998，23（5）：284-286.