毛云飛，于文章，王增輝，楊恒峰，張佳騰，高付鳳，陳學(xué)森，毛志泉，沈 向

（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院/作物學(xué)國家重點實驗室/山東省高等學(xué)校協(xié)同創(chuàng)新中心，山東泰安 271018）

蘋果作為我國果品產(chǎn)業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)，其種植面積和產(chǎn)量均位于其它果品前列，改善其營養(yǎng)條件、增產(chǎn)提質(zhì)一直是研究熱點。夏燕飛等[1]對紅富士蘋果園土壤成分分析認(rèn)為，土壤中維生素B2、維生素B6和煙酸與富士蘋果中可溶性糖含量具有顯著的正相關(guān)性，煙酸和維生素B12與果實花色苷具有顯著正相關(guān)性，而且這些B族維生素與富士蘋果維生素C含量都具有正相關(guān)性。王安然等[2]研究表明，在不同月份向土壤中施加維生素B6，4月份施用的維生素B6可顯著提高富士單果重和果實的營養(yǎng)品質(zhì)，6月份施加的維生素B6對富士果實香氣品質(zhì)具有顯著的促進作用。維生素B6是土壤有機營養(yǎng)的一種[3]，張宏偉等[4]研究發(fā)現(xiàn)有機營養(yǎng)與礦質(zhì)元素結(jié)合生成有機無機膠體，為形成土壤團聚體創(chuàng)造條件，從而使土壤孔隙增加，水分、空氣、肥料以及溫度相互協(xié)調(diào)，改善土壤環(huán)境，土壤環(huán)境中包含C、H、O、N等元素，可以為土壤微生物提供大量的碳源和氮源，進而改善土壤微生物環(huán)境。

物種多樣性是分析土壤微生物的重要參數(shù)，群落豐富度指數(shù) (abundance indices) 和多樣性指數(shù)(diversity indices) 是用來描述物種多樣性的兩個常用指標(biāo)[5]。在土壤微生物的傳統(tǒng)研究方法中，常采用微生物平板培養(yǎng)法、Biolog鑒定法、核酸分析法等來識別鑒定土壤中的微生物，但這些方法往往會低估土壤中微生物的組成，對目前尚無法培養(yǎng)的微生物無能為力，且無法描繪出微生物群落中的組成差異[6]。近年來，高通量測序技術(shù)不斷發(fā)展，其無需培養(yǎng)即能客觀準(zhǔn)確地還原微生物群落組成，且受主觀因素干擾小，為深入分析微生物的多樣性提供技術(shù)支持[7]。根據(jù)本研究前期試驗基礎(chǔ)，即土施7 g/株的維生素B6對提升富士蘋果果實營養(yǎng)品質(zhì)和香氣品質(zhì)效果最佳[2]，推測土施維生素B6的提質(zhì)作用在很大程度上可能是由于影響了土壤微生物環(huán)境，故本研究采用高通量測序技術(shù)，在前期最佳濃度的基礎(chǔ)上，選用5 g/株和10 g/株的濃度，分析施加維生素B6后，果樹土壤中的微生物多樣性變化，從而揭示土施維生素B6提質(zhì)功效的機理。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

于2015年5月23日在蓬萊市大辛莊鎮(zhèn)三十里堡村，選用4年生生長勢一致、產(chǎn)量均等的以八棱海棠為砧木的富士蘋果樹 (株行距3 m × 4 m) 作為試驗材料，在行間距離蘋果樹體主干1 m處，在每株樹兩側(cè)挖2條深25 cm、寬15 cm、長1.5 m的溝，用維生素B6進行樹體溝施，撒入維生素B6。該處理設(shè)置2個濃度梯度：5 g/株和10 g/株，每個濃度梯度設(shè)3次重復(fù)，以不施加維生素B6處理的樹體作對照，按常規(guī)管理方式進行管理。試驗地土壤中全氮含量為1.53 g/kg，有效磷含量為31.96 mg/kg，速效鉀含量為154.45 mg/kg，有效鎂含量為2.60 mg/kg，有效鐵含量為7.90 mg/kg，有效銅含量為0.14 mg/kg，有效鋅含量為1.74 mg/kg。

1.2 試驗樣品采集

于果實成熟期 (2015年10月中旬) 進行土壤樣品采集。采用“X”形土壤樣品采集方法，分別在每個處理的3次重復(fù)的每株樹東、南、西、北4個方位距樹干60 cm處采集0—40 cm土層2000 g，在去除雜質(zhì)后進行混合，裝進封口袋進行微生物測定。

1.3 測序試驗方法

1.3.1 基因組DNA的提取和PCR擴增 采用CTAB方法對樣本的基因組DNA進行提取，之后利用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的純度和濃度，取適量的樣品于離心管中，使用無菌水稀釋樣品至1 ng/μL。以稀釋后的基因組DNA為模板，根據(jù)測序區(qū)域的選擇，使用帶Barcode的特異引物，New England Biolabs公司的Phusion? High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer，和Thermo公司的高效高保真酶進行PCR擴增，確保擴增效率和準(zhǔn)確性。引物對應(yīng)區(qū)域：16S V4+V5區(qū)引物 (515F和806R)，鑒定細(xì)菌多樣性；ITS1+ITS2區(qū)引物 (ITS5-1737F和ITS2-2043R)，鑒定真菌多樣性。

1.3.2 PCR產(chǎn)物的混樣和純化 PCR產(chǎn)物使用2%濃度的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，根據(jù)PCR產(chǎn)物濃度，將各樣品進行等量混樣，充分混勻后使用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，對目的條帶使用Qiagen公司提供的膠回收試劑盒回收產(chǎn)物，并用純化試劑盒對其進行純化。

1.3.3 文庫構(gòu)建和上機測序 使用TruSeq? DNA PCR-Free Sample Preparation Kit建庫試劑盒進行文庫構(gòu)建，構(gòu)建好的文庫經(jīng)過Qubit和Q-PCR定量，文庫合格后，使用HiSeq2500 PE250進行上機測序。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理 根據(jù)Barcode序列和PCR擴增引物序列從下機數(shù)據(jù)中拆分出各樣品數(shù)據(jù)，截去Barcode和引物序列后使用FLASH[8]對每個樣品的reads進行拼接，得到的拼接序列為原始Tags數(shù)據(jù)(Raw Tags)；拼接得到的Raw Tags，需要經(jīng)過嚴(yán)格的過濾處理[9]得到高質(zhì)量的Tags數(shù)據(jù) (Clean Tags)，并參照Qiime[10]的Tags質(zhì)量控制流程。經(jīng)處理后得到的Tags需要進行去除嵌合體序列的處理，Tags序列[11]通過與數(shù)據(jù)庫 (Gold database，http://drive5.com/uchime/uchime_download.html) 進行比對檢測嵌合體序列，并最終去除其中的嵌合體序列[12]，得到最終的有效數(shù)據(jù) (Effective Tags)。

利用Uparse軟件 (Uparse v7.0.1001，http://drive5.com/uparse/)[13]對所有樣品的全部Effective Tags進行聚類，默認(rèn)以97%的一致性將序列聚類成為OTUs(operational taxonomic units)，同時會選取OTUs的代表性序列，依據(jù)其算法原則，篩選OTUs中出現(xiàn)頻數(shù)最高的序列作為OTUs的代表序列。

使用Qiime軟件 (Version 1.7.0) 計算Chao、Shannon、Simpson、ACE指數(shù)，使用R軟件(Version 2.15.3) 繪制稀釋曲線，并進行Alpha多樣性指數(shù)組間差異分析和Beat多樣性指數(shù)組間差異分析，使用R軟件繪制花瓣圖、熱圖和主成分分析圖，使用Excel和SPSS進行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 測序結(jié)果質(zhì)量分析

為了研究樣品的菌種組成多樣性，對所有樣品的有效序列數(shù)量進行聚類，通過對9個樣品 (3個處理3次重復(fù)) 細(xì)菌多樣性的測序，共測得原始序列條數(shù)為548289，過濾掉低質(zhì)量的序列后，有效序列的總數(shù)為530714，根據(jù)Barcode標(biāo)簽進行樣品序列拆分，再對初始序列進行去冗余處理后，獲得16S rRNA基因Unique reads，有效序列比例均大于96%。真菌多樣性檢測共測得原始序列條數(shù)為549931，過濾掉低質(zhì)量的序列后，有效序列總數(shù)為434886，有效序列比例均大于62%，各樣品的相關(guān)數(shù)據(jù)如表1所示。

稀釋曲線 (rarefaction curve) 反映了樣品的取樣

表 1 土壤樣本細(xì)菌和真菌測序結(jié)果統(tǒng)計Table 1 Sequencing data statistics among soil samples of bacteria and fungi

深度，可以用來評價測序量是否足以覆蓋所有類群。從稀釋曲線 (圖1)可知，序列數(shù)量到5000時各樣品稀釋曲線均基本趨于平緩，說明取樣基本合理，真實環(huán)境中細(xì)菌和真菌群落結(jié)構(gòu)的置信度較高，能夠比較真實地反映土壤樣本的細(xì)菌和真菌群落。

2.2 各處理群落豐富度和多樣性分析

Ace和Chao指數(shù)可反映群落物種豐富度，Simpson和Shannon指數(shù)反映微生物多樣性[14–15]。由表2得知，在細(xì)菌數(shù)量中，維生素B65 g/株處理顯著提高了Ace、Chao和Shannon指數(shù)，與CK相比，分別提高了62.6%、71.6%和22.3%，Simpson指數(shù)與CK相比無顯著差異，維生素B610 g/株處理4種指數(shù)與CK相比均無顯著差異；在真菌數(shù)量中，與CK相比，維生素B65 g/株處理顯著降低了Chao、Simpson和Shannon指數(shù)，分別降低了18.6%、29.2%和34.4%，Ace指數(shù)與CK無顯著差異，維生素B610 g/株處理的4種指數(shù)與CK均無顯著差異。由此可知，維生素B65 g/株處理提高了細(xì)菌群落的豐富度和細(xì)菌的多樣性，降低了真菌群落的豐富度和多樣性；維生素B610 g/株處理對細(xì)菌和真菌的多樣性和豐富度無影響。

圖 1 土壤樣本細(xì)菌和真菌稀釋曲線Fig. 1 Rarefaction curves of bacteria and fungi among soil samples

表 2 施用VB6土壤樣本群落豐富度和多樣性指數(shù)Table 2 The abundance and diversity indices of microbial community in soil samples

2.3 各處理群落Alpha群落類群分析

為了研究各群落類群組成，在對有效序列分類基礎(chǔ)上，以97%的一致性將序列聚類成為OTUs(operational taxonomic units)，然后對OTUs的代表序列進行物種注釋。在0.97的相似度下，得到了每個樣品的OTU個數(shù)，如圖2所示，并同時繪出花瓣圖，結(jié)果可以展示多樣品相同和各自特有的OTU數(shù)目，直觀展示樣品間OTU的重疊情況(圖3)。Alpha群落類群主要用于種內(nèi)種間比較，結(jié)合OTU所代表的物種，可以找出不同環(huán)境中的核心微生物。

細(xì)菌水平上，結(jié)合圖2(左) 與圖3(左)，高通量分析得知，9個樣品測序共可獲得1441～2535種水平分類的細(xì)菌 (OTU)，其中，共有的OTU數(shù)量為566，特異性O(shè)TU數(shù)量為13～197個，以維生素B65 g/株處理效果最突出，與CK相比，維生素B65 g/株 處理不僅增加了土壤中的細(xì)菌微生物OTU總量，也增加了其中的某些特異性O(shè)TU數(shù)目，其中，CK處理第1組中，其特異性細(xì)菌微生物OTU有22個，樣品總細(xì)菌微生物OTU數(shù)有1611個，維生素B65 g/株處理第1組中，其特異性細(xì)菌微生物OTU有197個，樣品總細(xì)菌微生物OTU數(shù)有2 532個，與CK相比，分別增加了795.45%和57.17%。維生素B610 g/株 處理與CK在OTU數(shù)量上并無顯著差異。

真菌水平上，由圖2 (右) 與圖3 (右) 分析得知，9個樣品測序共可獲得315～431種水平分類的真菌(OTU)，其中，共有的OTU數(shù)量為73，特異性O(shè)TU數(shù)量為11～55個，與CK相比，維生素B65 g/株處理不僅降低了土壤中真菌微生物OTU總量，也降低了其中的某些特異性O(shè)TU數(shù)目，維生素B610 g/株處理中，除第1組重復(fù)外，其他2次重復(fù)均降低了真菌微生物OTU總量及某些特異性O(shè)TU數(shù)目，其中，CK處理第1組中，其特異性真菌微生物OTU有19個，樣品總真菌微生物OTU數(shù)有417個，維生素B65 g/株處理第1組中，其特異性真菌微生物OTU有11個，樣品總真菌微生物OTU數(shù)有315個，與CK相比，分別降低了42.1%和24.5%。

2.4 各處理群落Beta多樣相關(guān)性研究

Beta多樣性研究中，選用Weighted Unifrac距離和Unweighted Unifrac距離2個指標(biāo)來衡量2個樣品間的相異系數(shù)，其值越小，表示這2個樣品在物種多樣性方面存在的差異越小。以Weighted Unifrac和Unweighted Unifrac距離繪制的熱圖 (Heatmap) 展示結(jié)果。主成分分析 (PCA，Principal Component Analysis) 是一種應(yīng)用方差分解對多維數(shù)據(jù)進行降維，從而提取出數(shù)據(jù)中最主要的元素和結(jié)構(gòu)的方法[16]。應(yīng)用PCA分析，能夠提取出最大程度反映樣品間差異的兩個坐標(biāo)軸，從而將多維數(shù)據(jù)的差異反映在二維坐標(biāo)圖上，進而揭示復(fù)雜數(shù)據(jù)背景下的簡單規(guī)律。如果樣品的群落組成越相似，則它們在PCA圖中的距離越接近。

由圖4 (左) 分析得知，對細(xì)菌而言，維生素B65 g/株處理與CK相比，組間相異系數(shù)達到0.247，維生素B610 g/株處理與CK相比，組間相異系數(shù)達到0.222，維生素B65 g/株處理與維生素B610 g/株處理相比，組間相異系數(shù)達到0.236。

由圖4 (右) 分析得知，對真菌而言，維生素B65g/株處理與CK相比，組間相異系數(shù)達到1.238，維生素B610 g/株處理與CK相比，組間相異系數(shù)達到1.233，維生素B65 g/株處理與維生素B610g/株處理相比，組間相異系數(shù)達到1.350。

由圖5 PCA分析可知，各組間距離大，組內(nèi)之間距離小，表示各組間差異性大，組內(nèi)差異性小，即在細(xì)菌和真菌水平上，施加維生素B65 g/株和維生素B610 g/株兩組處理以及CK，三組間均具有顯著的差異性，表明施入維生素B6后，土壤微生物發(fā)生了顯著變化。

圖 2 土壤樣品細(xì)菌 (左)、真菌 (右)OTUs聚類分析Fig. 2 The analysis of bacteria (left) and fungi (right) OTUs among soil samples

圖 3 土壤樣品細(xì)菌 (左)、真菌 (右) 多樣性的相關(guān)性分析Fig. 3 Similarity analysis of bacteria (left) and fungi (right) diversity among soil samples

2.5 各處理樣品菌群相對豐度組成分析

根據(jù)物種注釋結(jié)果，選取每個樣品或分組在各分類水平 (Phylum、Class、Order、Family、Genus)上最大豐度排名前10的物種，生成物種相對豐度柱形累加圖，以便直觀查看各樣品在不同分類水平上相對豐度較高的物種及其比例。以門水平物種相對豐度柱形圖為例展示，如圖6所示。

圖 4 土壤樣品細(xì)菌 (左)、真菌 (右) 組間差異性相關(guān)分析Fig. 4 Similarity analysis of bacteria (left) and fungi (right) difference in groups among soil samples

圖 5 土壤樣品細(xì)菌 (左)、真菌 (右) 主成分分析Fig. 5 Principle component analyses of bacteria (left) and fungi (right)

在細(xì)菌水平，由圖6 (左) 分析可知，豐富度較高的前10個門分別為變形菌門 (Proteobacteria)、放線菌門 (Actinobacteria)、擬桿菌門 (Bacteroidetes)、酸桿菌門 (Acidobacteria)、綠彎菌門 (Chloroflexi)、芽單胞菌門 (Gemmatimonadetes)、浮霉菌門(Planctomycetes)、厚壁菌門 (Firmicutes)、疵微菌門(Verrucomicrobia)、藍藻菌門 (Cyanobacteria)，由圖中各細(xì)菌相對含量分析可知，在三組處理中，優(yōu)勢類群分別為變形菌門、放線菌門、擬桿菌門及酸桿菌門，這4種優(yōu)勢類群在各自處理中所占比例均超過80%，在這4個優(yōu)勢群中，維生素B610 g/株處理提高了土壤中變形菌門、放線菌門的相對豐度，與CK相比，分別提高了12.6%和56.7%，降低了擬桿菌門、酸桿菌門相對豐度，與CK相比，分別降低了59.9%和41.5%，維生素B65 g/株處理則降低了擬桿菌門的相對豐度，與CK相比，降低了34.8%，對其他3種優(yōu)勢菌門無影響。

圖 6 土壤樣品在細(xì)菌 (左)、真菌 (右) 門分類水平上相對豐度變化Fig. 6 Changes in relative abundance of soil bacteria (left) and fungi (right) samples at phylum level

在真菌水平，由圖6 (右) 分析得知，豐富度較高的前6個門分別為子囊菌門 (Ascomycota)、擔(dān)子菌門 (Basidiomycota)、接合菌門 (Zygomycota)、球囊菌門 (Glomeromycota)、壺菌門 (Chytridiomycota)、新美鞭菌門 (Neocallimastigomycota)，結(jié)合圖中各真菌相對含量，在三組處理中，優(yōu)勢類群分別為子囊菌門、擔(dān)子菌門、接合菌門，這3種優(yōu)勢類群在各自處理中所占比例均超過98%，在這3個優(yōu)勢群中，與CK比較，維生素B65 g/株處理將土壤中子囊菌門相對豐度提高了36.9%，分別將擔(dān)子菌門和接合菌門的相對豐度降低了57.01%和37.18%，維生素B610g/株處理將土壤中擔(dān)子菌門相對豐度提高了24.8%，將接合菌門相對豐度降低了64.5%，而對子囊菌門的相對豐度無影響。

3 討論與結(jié)論

土壤微生物作為陸地生態(tài)系統(tǒng)植物多樣性和生產(chǎn)力的重要驅(qū)動者，與植物生長發(fā)育密切相關(guān)[17–18]，一方面植物作為生產(chǎn)者，為微生物提供碳源和氮源，經(jīng)過微生物的分解為植物提供營養(yǎng)，從而達到互惠作用。本試驗利用高通量測序技術(shù)，施加維生素B65 g/株處理，提高了細(xì)菌總OTU及特異性O(shè)TU數(shù)量，也提高了細(xì)菌的豐富度和多樣性，同時降低真菌總OTU、特異性O(shè)TU數(shù)量，降低了真菌的豐富度和多樣性，經(jīng)Alpha多樣性分析得知，CK組間平均OTU數(shù)為1662，維生素B65 g/株處理組間平均OTU數(shù)為2478，與CK相比，提高了49.1%，特異性O(shè)TU數(shù)，CK為22個，維生素B65 g/株處理為148個，這與維生素B65g/株 處理與CK的Beta多樣性分析結(jié)果相符，其組間多樣性差異大。有研究報道，當(dāng)土壤微生物由細(xì)菌主導(dǎo)型向真菌主導(dǎo)型轉(zhuǎn)變時，植物更容易受到病原菌的侵染[19]。而施加維生素B65g/株 以后，細(xì)菌數(shù)量變多，真菌數(shù)量變少，在一定程度上防止了植物遭受病原菌侵害的幾率。施加維生素B610 g/株，盡管對細(xì)菌和真菌的豐富度和多樣性無顯著影響，但降低了真菌的OTU，對植物仍有一定的保護作用。而維生素B6施用劑量增加，對細(xì)菌和真菌豐富度和多樣性指數(shù)無顯著影響，經(jīng)Alpha多樣性分析，維生素B610 g/株 處理與CK在總OTU及特異性O(shè)TU上無太大差別，而經(jīng)Beta多樣性分析得知，維生素B610 g/株處理與CK在組間多樣性上仍存在差異[20]，2種劑量處理的差異原因還需要進一步試驗驗證。

根據(jù)物種注釋結(jié)果，9個土壤樣品中的細(xì)菌菌類按優(yōu)勢類群分類，優(yōu)勢菌群分別為變形菌門、放線菌門、擬桿菌門及酸桿菌門，這四種優(yōu)勢類群在各自處理中所占比例之和均超過80%，其中，變形菌門的比例超過50%。本試驗中，維生素B65 g/株處理降低了擬桿菌門的相對豐度，對其他3種優(yōu)勢菌種相對豐度無影響，維生素B610 g/株處理提高了變形菌門和放線菌門的相對豐度，降低了擬桿菌門和酸桿菌門的相對豐度。變形菌門和放線菌門等為土壤中的有益菌，變形菌門是革蘭氏陰性菌，其數(shù)量大、多樣性高，有研究稱，變形菌門可以參與各種有機物的碳氮循環(huán)，代謝類型多樣，還可以作為生物治理因子代謝環(huán)境中的化學(xué)污染，如甲苯等[21]。放線菌門大多數(shù)微生物主要降解纖維素甚至許多難降解的芳香族化合物，對于土壤的礦化作用起到十分重要的作用[22]。土壤中酸桿菌門大多是嗜酸菌，數(shù)量變化受多種因素影響，其豐富度也與土壤pH有關(guān)[23]，施加不同濃度維生素后，其數(shù)量變化，可能與土壤pH變化有關(guān)。擬桿菌門與DNA、蛋白質(zhì)和脂類等有機物質(zhì)的轉(zhuǎn)化緊密相關(guān)，這些有機物質(zhì)的吸收和利用是碳循環(huán)的重要組成部分[24]，盡管不同濃度維生素B6處理均降低了土壤中擬桿菌門的相對豐度，但由于細(xì)菌總OTU均升高，其具體數(shù)量變化還有待后續(xù)進一步研究。

將真菌優(yōu)勢群種進行分類，優(yōu)勢群種分別為子囊菌門、擔(dān)子菌門和接合菌門，3種菌門所占比例之和超過98%，其中，子囊菌門在3種處理中的比例均超過50%，是絕對優(yōu)勢菌門，盡管有研究表明，子囊菌門中的2個變種，即Valsa malivar.mali和V.malivar.pyri，是蘋果腐爛病的主要病原菌之一[25]，但也有研究表明，子囊菌門中的Incertae sedis27也可促進生根[26]。擔(dān)子菌門數(shù)量繁多，分布廣泛，其中有些可食用，也有的可藥用，而也有一些能引起植物和園林病害[27]。本試驗中，維生素B65 g/株 處理提高了子囊菌門相對豐度，降低了擔(dān)子菌門相對豐度，維生素B610 g/株 處理未降低子囊菌門相對豐度，但提高了擔(dān)子菌門的相對豐度，其具體變化還有待研究。施加不同濃度維生素B6后，土壤中的接合菌門均會顯著降低，而有研究表明，隨著連作年限的增加，土壤中的接合菌門的比例會逐年增加[28]，因此，施加維生素B6對防治重茬具有良好的效果。

綜合以上研究結(jié)果，維生素B6可改變土壤中細(xì)菌和真菌的豐富度和多樣性，改變土壤中門水平的細(xì)菌和真菌的相對豐度，維生素B65 g/株處理可提高土壤中細(xì)菌豐富度和多樣性，降低真菌豐富度和多樣性，降低了細(xì)菌中擬桿菌門 (Bacteroidetes) 的相對豐度，提高了真菌中子囊菌門 (Ascomycota) 的相對豐度，降低了擔(dān)子菌門 (Basidiomycota) 和接合菌門 (Zygomycota) 的相對豐度，維生素B610 g/株處理提高了細(xì)菌中的變形菌門 (Proteobacteria) 和放線菌門 (Actinobacteria) 的相對豐度，降低了擬桿菌門(Bacteroidetes) 和酸桿菌門 (Acidobacteria) 的相對豐度，提高了真菌中擔(dān)子菌門 (Basidiomycota) 的相對豐度，降低了接合菌門 (Zygomycota) 的相對豐度。維生素B6作為一種良好的根系生態(tài)調(diào)節(jié)途徑，具有極佳的推廣價值。

參 考 文 獻：

[ 1 ]夏燕飛, 張文會, 王榮, 等. 土壤有機營養(yǎng)對‘紅富士’蘋果果實產(chǎn)量和品質(zhì)的影響[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報, 2013, 19(4): 868–877.Xia Y F, Zhang W H, Wang R,et al. Effect of soil organic nutrition matter on yield and quality of Fuji apple[J]. Journal of Plant Nutrition and Fertilizer, 2013, 19(4): 868–877.

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