程明科

重慶藥友制藥有限責任公司 重慶 401121

甲鈷胺產(chǎn)品A是一種活性維生素B12藥物，主要用于糖尿病引起的周圍神經(jīng)性疾病及因缺乏維生素B；2引起的巨幼紅細胞性貧血。在體內(nèi)，維生素B12經(jīng)酶作用轉(zhuǎn)化為經(jīng)鉆胺，再經(jīng)甲基化生成甲鉆胺，因此甲鉆胺可以作為維生素B12的活性代謝產(chǎn)物直接用于患者?！吨袊幍洹访枋黾租挵酚幸凉裥?，見光易分解[1]。尤其在水溶液狀態(tài)下，由于甲鉆胺分子被水分子所分散，使之對光的通透性大大增加，再加上水溶液中的氧氣的氧化作用，甲鉆胺的光解作用大大加強[2]。

有文獻對甲鈷胺制劑的包裝進行研究，以及臨床使用過程光降解研究，但對于產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的對有關物質(zhì)的影響未見報道。

本試驗主要針對工業(yè)生產(chǎn)操作的可控制性，選擇生產(chǎn)過程中的已灌裝安瓿處于一定照度和高溫（滅菌）兩個條件進行考察。因此，將安瓿瓶暴露在一定照度和滅菌溫度下的雜質(zhì)譜作為研究對象。

1 試驗材料

1.1 儀器

BS200S型電子天平Sartorius、AgilentHP1260型高效液相色譜儀、酸度計。安瓿超聲波清洗機、安瓿滅菌干燥機、安瓿灌裝封口機、帶稱配料罐、雙扉機動門安瓿滅菌器。

1.2 試藥

甲鈷胺原料（河北華榮制藥有限公司）；甘露醇（法國羅蓋特公司生產(chǎn)）；氫氧化鈉（湖南爾康制藥有限公司）；依地酸二鈉（湖南爾康制藥有限公司）

2 實驗方案設計

2.1 生產(chǎn)工藝描述

加入處方量甘露醇適量，攪拌使溶解，再加入處方量依地酸二鈉（乙二胺四乙酸二鈉），攪拌使溶解。用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)藥液pH值為5.0-7.0。在避光條件下將甲鈷胺原料加入上述溶液中，攪拌使其溶解，定容，灌裝，封口，滅菌、燈檢，包裝。

2.2 生產(chǎn)工藝過程分析

分析生產(chǎn)過程，配制溶解過程在密閉的配料罐中進行，灌裝和封口速度0.2s/支；且生產(chǎn)車間的照明燈管均用紅色玻璃紙包裹，照度小于10lx。因此配制、灌裝、封口、滅菌過程，車間照度對產(chǎn)品的影響為正常生產(chǎn)工藝過程狀態(tài)。

燈檢過程，需要提高檢查照度，保證能將可能的異物檢出，進而保證產(chǎn)品質(zhì)量。因此生產(chǎn)過程中燈檢工序為光照最強的工序。同時溶液狀態(tài)下的滅菌中的高溫過程，也會對產(chǎn)品帶來一定降解。

2.3 產(chǎn)品燈檢照度考察

連續(xù)按生產(chǎn)工藝配制三批樣品，灌裝，封口。存放溫度：18-26℃的模擬潔凈室溫度環(huán)境中。模擬燈檢檢查的條件，根據(jù)生產(chǎn)流程安排，每件樣品在燈檢間不超過30min，但綜合日常生產(chǎn)可能會出現(xiàn)異常情況，故將產(chǎn)品分別放在不同模擬考察的照度：70-90lx、150-200lx、300-350lx條件下，模擬燈檢過程存放時間：0min、10min、20min、30min、60min；時刻點取樣檢測。為考察產(chǎn)品存放在不同照度下有關物質(zhì)變化關系，

2.4 不同滅菌溫度考察

連續(xù)按生產(chǎn)工藝配制三批樣品，灌裝，封口。采取滅菌溫度100℃（30min）、115℃（30min）、121℃（8min），三種條件進行滅菌?？疾鞙缇^程高溫對有關物質(zhì)的影響情況。

2.5 有關物質(zhì)檢驗方法

（1）儀器：美國安捷倫高效液相色譜儀，包括四元泵系統(tǒng)、紫外檢測器、自動進樣器及Agilent1260工作站。電子天平Sartorius。

（2）檢驗方法：參照國家食品藥品監(jiān)督管理局標準（試行）YBH04422004[3]的有關物質(zhì)檢測項方法測定。

（3）可接受標準：羥鈷胺雜質(zhì)＜1.0%，總雜＜3.0%

3 實驗實施及結果

3.1 不同照度存放時間驗證

（1）產(chǎn)品的典型雜質(zhì)譜。通過對比檢測結果圖譜，三批樣品的雜質(zhì)譜比較穩(wěn)定，經(jīng)典雜質(zhì)圖譜如圖1。

圖1 配制溶液雜質(zhì)圖譜

經(jīng)光照破壞后羥鈷胺的典型圖譜如圖2。

圖2 光照降解羥鈷胺雜質(zhì)圖譜

利用各雜質(zhì)峰保留時間同主成分峰保留時間的比值即相對保留時間（RRT）進行雜質(zhì)譜統(tǒng)計。

（2）有關物質(zhì)雜質(zhì)譜。根據(jù)檢驗結果統(tǒng)計作圖，考察各種照度下存放時間的有關物質(zhì)變化關系。

以雜質(zhì)含量為縱坐標，暴露時間為橫坐標，雜質(zhì)譜為數(shù)列作圖（圖3）。

圖3 三種照度下不同暴露時間雜質(zhì)譜

②以雜質(zhì)含量為縱坐標，照度為橫坐標，暴露時間為數(shù)列作圖，考察3批產(chǎn)品羥鈷胺的雜質(zhì)變化情況（圖4）。

圖4 三批產(chǎn)品羥鈷胺同照度變化關系圖

（3）結論：

①甲鈷胺產(chǎn)品A安瓿產(chǎn)品在不同照度下存放1小時內(nèi)，共能檢出6個雜質(zhì)，雜質(zhì)譜相對保持穩(wěn)定。

②從圖3和圖4可以看出，在70-90lx光照條件下，各雜質(zhì)穩(wěn)定；生產(chǎn)過程中燈檢使用的光照不能超過90lx。暴露時間不超過30min。

③1小時內(nèi)檢測的最大雜質(zhì)為RRT=0.23的光降解雜質(zhì)羥鈷胺，且其含量在高照度下隨存放時間明顯增大。其他雜質(zhì)在存放時間和照度變化下無顯著變化，為非工藝過程產(chǎn)生的雜質(zhì)。

④從圖4可以看出，在存放時間內(nèi)70-90lx下的存放，羥鈷胺雜質(zhì)含量均符合標準要求，且各批羥鈷胺含量顯示，相同時間下，隨照度增加羥鈷胺含量增加。羥鈷胺雜質(zhì)含量同照度呈正相關關系。

3.2 不同滅菌溫度考察

（1）統(tǒng)計滅菌前后溶液的有關物質(zhì)變化，以雜質(zhì)譜為橫坐標，雜質(zhì)含量為縱坐標，滅菌條件為數(shù)列作圖。

圖5 三批產(chǎn)品不同溫度滅菌前后有關物質(zhì)變化對比

（2）結論：

①從圖5可以看出，滅菌過程會導致羥鈷胺和總雜的增加；其余雜質(zhì)在滅菌前后和不同滅菌溫度雜質(zhì)均無顯著變化。

②從圖5可以看出，100℃、115℃、121℃溫度滅菌后，羥鈷胺和總雜均比滅菌前有所增加，僅100℃溫度滅菌條件下滅菌后有關物質(zhì)能滿足標準要求。故生產(chǎn)過程中滅菌溫度應選擇100℃的條件。

③通過圖5可以看到，115℃和121℃滅菌后雜質(zhì)RRT=0.23這個位置的雜質(zhì)，超過標準規(guī)定。

4 結語

通過我們的試驗設計及結果可得出以下結論

（1）甲鈷胺產(chǎn)品A安瓿溶液在不同照度下存放1小時內(nèi)，共能檢出6個雜質(zhì)，雜質(zhì)譜相對保持穩(wěn)定。

（2）從圖4可以看出，光降解雜質(zhì)羥鈷胺與光照和暴露存放時間呈正相關關系。故在生產(chǎn)過程中控制環(huán)境照度，燈檢使用的光照應嚴格控制在90lx以下。暴露時間控制在30min以內(nèi)。

（3）光照后和滅菌后檢測到的最大雜質(zhì)為RRT=0.23的降解雜質(zhì)羥鈷胺，表明本品對光照和高溫敏感，降解顯著。

（4）從圖5可以看出，三個溫度滅菌后，羥鈷胺和總雜均比滅菌前有所增加，僅100℃溫度滅菌條件下滅菌后有關物質(zhì)能滿足標準要求。故生產(chǎn)過程應采用無菌工藝生產(chǎn)和100℃流通蒸汽的輔助滅菌。

5 討論

通過對實驗方案的實施結果進行分析，我們在今后的生產(chǎn)中將進一步研究甲鈷胺產(chǎn)品A降解的影響因素，優(yōu)化生產(chǎn)工藝，降低有關物質(zhì)增量?？梢詮囊韵聨追矫孢M行優(yōu)化：

（1）可以通過改進設備或優(yōu)化生產(chǎn)流程，縮短產(chǎn)品在光照狀態(tài)下的時間或利用自動化設備，全過程密閉完成。

（2）可以進一步對滅菌過程的控制，滅菌過程的升溫、維持、降溫過程的一致性控制，確保批與批之間產(chǎn)品的一致性和穩(wěn)定性。

（3）進一步對進廠物料，其質(zhì)量、生產(chǎn)工藝、存放條件，等影響因素的研究，以確保雜質(zhì)的質(zhì)和量基本恒定，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

本實驗方案的設計仍有一定的局限性，本文僅對生產(chǎn)過程中的兩個方面進行了有關物質(zhì)影響因素考察?？山Y合“人、機、料、法、環(huán)”進行多因素考察，查找對產(chǎn)品質(zhì)量的影響因素，從而確保產(chǎn)品質(zhì)量和療效的安全性[1]。

6 結語

RRT：相對保留時間（本文指各雜質(zhì)峰保留時間同主成分峰的保留時間的比值）。