鄒立宏 何平有，2 翟含流

1.瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司

2.天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司

3.河北省保定市蓮池區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所

一、實(shí)驗(yàn)材料

1.種毒。豬瘟兔化弱毒株購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

2.毒液。按2000年版《獸用生物制品規(guī)程》（以下簡(jiǎn)稱《規(guī)程》）載“豬瘟活疫苗制造及檢驗(yàn)規(guī)程（I）”方法制備毒液，病毒效價(jià)不低于105RID/ml。

3.保護(hù)劑。耐熱保護(hù)劑以甘氨酸、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮為基礎(chǔ)，優(yōu)選制備。

4.對(duì)照疫苗。按《規(guī)程》生產(chǎn)常規(guī)的豬瘟活疫苗，批號(hào)S2017。

5.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。效檢用兔為健康大耳白兔，體重1.5～2.5 kg；試驗(yàn)豬，3月齡，體重約3.5 kg，選購(gòu)自河北順平某村，經(jīng)檢驗(yàn)無豬瘟中和抗體。

二、試驗(yàn)方法

1.耐熱苗制備。將合格的豬瘟病毒液與耐熱保護(hù)劑按一定比例，混合，定量分裝后冷凍真空干燥，制備3批疫苗，批號(hào)分別為201701、201702和201703。

2.疫苗加速老化試驗(yàn)和保存期試驗(yàn)。將3批豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗和對(duì)照疫苗取樣后，分別進(jìn)行以下試驗(yàn)項(xiàng)目。

3.疫苗加速老化試驗(yàn)。將疫苗置于37℃溫室中放置10 d，分別于放置后第2 d和第10 d，按照《規(guī)程》用兔進(jìn)行效力檢驗(yàn)。

4.疫苗保存期試驗(yàn)。將疫苗置于2℃～8℃環(huán)境中，放置26個(gè)月，分別于放置第0天、第12個(gè)月、第24個(gè)月和第26個(gè)月，按照《規(guī)程》用兔進(jìn)行效力檢驗(yàn)。

5.成品溶解性及其它檢驗(yàn)項(xiàng)目。將4批豬瘟活疫苗隨機(jī)取樣，按照《規(guī)程》方法分別進(jìn)行物理性狀檢驗(yàn)、無菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)、剩余水分測(cè)定、真空度測(cè)定等項(xiàng)目的檢測(cè)；并觀察豬用活疫苗稀釋液對(duì)其溶解情況。

三、試驗(yàn)結(jié)果

1.疫苗加速老化試驗(yàn)和保存期試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果見表1。從表1可以看出，3批豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗，37℃環(huán)境中放置10 d后，疫苗效力均為(++)（++），而在2℃～8℃環(huán)境下保存26個(gè)月疫苗，疫苗效力也均為 (++)（++），明顯優(yōu)于相同環(huán)境儲(chǔ)存的S2017（對(duì)照苗），其效價(jià)為（+）（-）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3批研制的豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗耐熱性能均良好。

表1 不同保存環(huán)境不同時(shí)間試驗(yàn)疫苗效力測(cè)定結(jié)果

2.成品溶解性試驗(yàn)及其它檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)結(jié)果。4批疫苗其余各項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目（物理性狀檢驗(yàn)、無菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)、剩余水分測(cè)定、真空度測(cè)定）均符合要求。溶解性結(jié)果見表2。由表2可以看出，3批豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗溶解性均良好，優(yōu)于規(guī)程疫苗。

表2 3批豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗溶解試驗(yàn)結(jié)果

四、討論

本研究?jī)?yōu)選的豬瘟活疫苗耐熱保護(hù)劑對(duì)豬瘟病毒之所以有良好保護(hù)效果，筆者認(rèn)為是通過以下兩個(gè)方面實(shí)現(xiàn)的，一是凍干過程中保護(hù)劑中大分子物質(zhì)的優(yōu)先析出，有效阻止了小分子物質(zhì)的結(jié)晶，從而減少了凍干過程中豬瘟病毒活性的損傷；二是耐熱保護(hù)劑與病毒的最適配比，有效地阻止了保存過程中外界因素對(duì)病毒破壞作用。同時(shí)，精選的保護(hù)劑配方，溶解性能優(yōu)良，對(duì)提高豬瘟疫苗的臨床使用效果和今后耐熱保護(hù)劑的研究均具有重要意義。