李松琳，李大鵬，李松濤

庫(kù)存血液隨保存時(shí)間延長(zhǎng)，其中的電解質(zhì)和酸 堿平衡會(huì)發(fā)生改變，庫(kù)存血液輸注后可能發(fā)生受血者血K+升高等反應(yīng)，大量輸血可導(dǎo)致電解質(zhì)紊亂等，減少外界因素對(duì)庫(kù)存血液質(zhì)量影響成為現(xiàn)階段臨床及輸血醫(yī)學(xué)的重要研究課題［1-3］。

筆者在經(jīng)典血液保存液Ⅲ中按比例添加丙氨酰谷氨酰胺，并以血液保存液Ⅲ為對(duì)照，通過(guò)監(jiān)測(cè)采集血液儲(chǔ)存過(guò)程中K+含量及pH值指標(biāo)變化，探討不同血液保存液對(duì)庫(kù)存血液電解質(zhì)及酸堿平衡的影響。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇無(wú)償獻(xiàn)血人員10名，均為男性，年齡不限。

1.2 儀器與試劑 測(cè)定K+含量?jī)x器包括ST360全自動(dòng)酶標(biāo)儀（上?？迫A，檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm）、5810R臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）等。測(cè)定pH值使用Delta320型酸度計(jì) （梅特勒-托利多儀器有限公司）。K+測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 血液保存液配制 根據(jù)丙氨酰谷氨酰胺（四川科倫，50 ml∶10 g）使用時(shí)其在與載體溶液混合液中最大濃度不能超過(guò)3.5%的要求，其稀釋液（0.9%氯化鈉注射液稀釋）與血液保存液Ⅲ按1.8∶1比例混合均勻配成實(shí)驗(yàn)組血液保存液。選取一次性使用塑料血袋中血液保存液Ⅲ（四川南格爾公司，生產(chǎn)批號(hào)150123，國(guó)藥準(zhǔn)字H20045509）為對(duì)照組血液保存液。

1.4 實(shí)驗(yàn)方案 選取無(wú)菌試管20只均分為實(shí)驗(yàn)組A和對(duì)照組B。根據(jù)測(cè)定pH值Delta320型酸度計(jì)探頭要求及K+檢測(cè)取樣量，2組試管中均應(yīng)加入全血3ml。按照血液保存液Ⅲ56 ml采集全血400 ml要求，B組1～10管均分別加入血液保存液Ⅲ0.42 ml，A組1～10管均分別相應(yīng)加入實(shí)驗(yàn)組血液保存液1.176 ml。

采集10名獻(xiàn)血者未抗凝靜脈血，分別對(duì)應(yīng)加入A、B 2組1～10試管中各3 ml，充分搖勻后放置4～6℃冰箱保存。根據(jù)K+和pH檢測(cè)取樣對(duì)標(biāo)本無(wú)菌、標(biāo)本量等影響，結(jié)合ACD、CPD保存液采血21 d、35 d保存期等因素，樣本檢測(cè)時(shí)間為血液采集后10 d、21 d、35 d。

1.5 指標(biāo)測(cè)定 K+含量測(cè)定采用微板法，嚴(yán)格按試劑盒操作說(shuō)明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，450 nm波長(zhǎng)測(cè)各孔吸光度A。Delta320型酸度計(jì)測(cè)定pH值嚴(yán)格按照說(shuō)明書。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 檢驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （x±s）表示。選擇SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

采血后 10 d、21 d、35 d 分別檢測(cè) A、B 兩組血液 K+含量，10 d、35 d分別檢測(cè) A、B 兩組 pH 值，數(shù)據(jù) 按 檢 測(cè) 時(shí) 間 分 組 為 T1、T2、T3， 共 AT1、AT2、AT3、BT1、BT2、BT3六組。

2.1 K+含量測(cè)定 K+含量檢測(cè)各組基本統(tǒng)計(jì)量見(jiàn)表1，由相同檢測(cè)時(shí)間同樣本A、B兩組檢測(cè)值取得配對(duì)樣本數(shù)據(jù)，配對(duì)T檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，其中AT1、BT1間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組K+含量檢測(cè)值

表2 配對(duì)T檢驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)資料為重復(fù)測(cè)量資料（時(shí)間和組別因素），對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行球型檢驗(yàn)，取得ε校正系數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)校正，檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3；對(duì)重復(fù)效應(yīng)和交互效應(yīng)進(jìn)行方差分析（F檢驗(yàn)），結(jié)果見(jiàn)表4，表明各檢測(cè)時(shí)間之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），檢測(cè)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），時(shí)間與組別因素間存在顯著交互作用（P＜0.001）。LSD法進(jìn)行各檢測(cè)時(shí)間之間多重比較，結(jié)果見(jiàn)表5，表明K+含量均存在顯著性差異（P＜0.05）。在α=0.05置信水平下，各檢測(cè)時(shí)間之間K+含量均存在顯著性差異，第10天檢測(cè)K+含量A、B兩組間存在顯著性差異，A組顯著低于B組，其余時(shí)間K+含量差異不顯著。

2.2 pH值測(cè)定 pH測(cè)定數(shù)據(jù)按時(shí)間分為T1、T3兩組，各組基本統(tǒng)計(jì)量見(jiàn)表6，對(duì)時(shí)間及組別因素?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果F=1.286，P=0.294；對(duì)時(shí)間及組別因素?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，結(jié)合表6分析，表明檢測(cè)時(shí)間之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F=1060.585，P＜0.001），10 d 測(cè)定 pH 值顯著高于35 d；檢測(cè)組間pH值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=20.249，P＜0.001），A 組顯著低于 B 組。 在 α=0.05置信水平下，檢測(cè)時(shí)間之間pH值具有顯著性差異，檢測(cè)組間pH值存在顯著性差異。時(shí)間因素與組別因素之間無(wú)交互作用。

表3 K+球型檢驗(yàn)結(jié)果

表4 K+和pH值方差分析結(jié)果

表5 不同檢測(cè)時(shí)間之間LSD多重比較結(jié)果

表6 各組pH值

3 討論

血液儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)可使血液紅細(xì)胞內(nèi)Na+含量升高和K+離子含量降低，導(dǎo)致細(xì)胞變形能力減低及滲透脆性增加，在保存期延長(zhǎng)致紅細(xì)胞生存條件變化及代謝廢物產(chǎn)生、部分保存紅細(xì)胞壽命縮短及損傷增加等因素影響下發(fā)生紅細(xì)胞破裂溶血［4-6］。

丙氨酰谷氨酰胺在血液中可迅速分解為丙氨酸和谷氨酰胺 （Glutamine，Gln），Gln作為體內(nèi)天然存在的非必需氨基酸，在機(jī)體營(yíng)養(yǎng)代謝、免疫保護(hù)、炎癥調(diào)節(jié)及機(jī)體免疫機(jī)能增強(qiáng)等方面具有重要作用［7，8］，可提高血漿中谷胱甘肽水平及機(jī)體抗氧化水平，減少和對(duì)抗自由基對(duì)機(jī)體組織器官的損傷，并可短時(shí)間對(duì)紅細(xì)胞膜Na+K+－ATP酶活性產(chǎn)生顯著性影響［9，10］。

此次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果表明，保存期內(nèi)實(shí)驗(yàn)組血液保存液采集血液對(duì)儲(chǔ)存紅細(xì)胞具有保護(hù)作用，可短時(shí)間維持及改善紅細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境，調(diào)整細(xì)胞內(nèi)、外K+和Na＋平衡，增加紅細(xì)胞膜流動(dòng)性及對(duì)機(jī)械壓抗性［9］；pH值測(cè)定中各檢測(cè)時(shí)間之間pH值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），采集后10 d檢測(cè)pH值顯著高于35 d時(shí)測(cè)量值，表明保存期內(nèi)因儲(chǔ)存紅細(xì)胞生存條件變化及酸性代謝產(chǎn)物產(chǎn)生，使pH值逐步降低，而檢測(cè)組間pH值存在顯著性差異（P＜0.05），表明試驗(yàn)組血液保存液采集血液對(duì)儲(chǔ)存血液酸堿平衡產(chǎn)生顯著影響，可減少和對(duì)抗自由基損傷，改善紅細(xì)胞生存條件及代謝環(huán)境。

綜上所述，添加丙氨酰谷氨酰胺血液保存液對(duì)儲(chǔ)存血液電解質(zhì)及酸堿平衡具有顯著性影響，可改善紅細(xì)胞生存條件及代謝環(huán)境，提高儲(chǔ)存血液質(zhì)量及輸注效果，具有提高受血者輸注后免疫功能和血紅蛋白含量、降低危重病患者感染率等作用。

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［2017－09－22 收稿，2017－10－20 修回］