張家琛 ，肖小朋 ，蔡珉敏 ，鄭龍玉 ，喻子牛 ，楊瑞斌 ，周學(xué)永 ，張吉斌

（1.天津農(nóng)學(xué)院 食品科學(xué)與生物工程學(xué)院，天津 300384；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物國家重點實驗室 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北 武漢 430070；3.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，湖北 武漢 430070）

黑斑蛙，學(xué)名黑斑側(cè)褶蛙（Pelophylax nigromaculatus），屬于脊索動物門兩棲綱無尾目蛙科，是我國野外常見的蛙類，一般與虎紋蛙、中國林蛙等統(tǒng)稱為青蛙［1］。黑斑蛙作為特種養(yǎng)殖動物，因其口感鮮美，藥、食、補同用，備受廣大消費者和養(yǎng)殖戶的青睞［2］。由于近幾年的市場需求量大，養(yǎng)殖戶大多采用小池高密度養(yǎng)殖，大量使用人工飼料。該養(yǎng)殖模式會使蛙缺乏活動，身體機能差，再加上人工飼料的高營養(yǎng)，導(dǎo)致蛙體內(nèi)營養(yǎng)過剩，代謝壓力大，普遍存在脂肪肝等癥狀。這樣一來，養(yǎng)殖的蛙類與野生蛙相比，肉質(zhì)及營養(yǎng)都會變差，免疫力較低，容易患上“歪頭病”等一些對養(yǎng)殖戶造成大量損失的疾病。近年來，許多科研工作者使用活蟲直接或間接替代人工飼料來飼養(yǎng)蛙類。陳高鵬等［3］研究不同餌料對棘腹蛙幼蛙生長和存活的影響，發(fā)現(xiàn)使用人工飼料時，幼蛙成活率最低，而使用搖蚊幼蟲時，幼蛙生長發(fā)育和成活率最高。王春清等［4］使用黃粉蟲、蚯蚓、蠅蛆3種活蟲飼養(yǎng)中國林蛙幼蛙，發(fā)現(xiàn)使用蚯蚓作為活餌飼養(yǎng)效果很好，林蛙幼蛙的成活率、體重增長率均顯著增高。呂樹臣等［5］研究了蚯蚓、家蠶、黃粉蟲和蠅蛆對中華大蟾蜍幼蟾生長發(fā)育的影響，結(jié)果證實喂食蚯蚓對幼蟾蜍發(fā)育效果最好。王艷梅［6］研究發(fā)現(xiàn)，在人工飼料的基礎(chǔ)上搭配活餌可以顯著增加二齡、三齡林蛙的體重以及臟體比和肥滿度。因此，使用活餌飼養(yǎng)黑斑蛙的效果在一定條件下可能會優(yōu)于人工飼料。

亮斑扁角水虻（Hermetia illucens L.），也叫黑水虻，簡稱水虻，其幼蟲以畜禽糞便、餐廚垃圾、豆渣和果渣等有機廢棄物為食，同時幼蟲及預(yù)蛹本身具有極高的營養(yǎng)價值，可以用作動物飼料甚至有成為人類食物的潛力。喻國輝等［7］綜述了亮斑扁角水虻的飼用價值，其幼蟲和預(yù)蛹均具備作為水產(chǎn)及家畜飼料的潛力。水虻幼蟲相比于蠅蛆和黃粉蟲，更易于飼養(yǎng)和控制，且生長速度快、周期短。水虻及其衍生產(chǎn)品已經(jīng)在國內(nèi)外水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上取得了許多新的研究成果［8］。該研究使用水虻老熟幼蟲作為活餌部分替代人工飼料飼養(yǎng)黑斑蛙，并對黑斑蛙的生長指標(biāo)和營養(yǎng)指標(biāo)進行了測定，以探索水虻幼蟲部分替代人工飼料對黑斑蛙生長的影響。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 實驗動物：試驗所用黑斑蛙為湖北省武漢市安山福源黑斑蛙養(yǎng)殖基地提供，在2016年8月初選用個體大小相似的蛙1 500只，肢體健康，體重為20～25 g。蛙在初始稱重前進行2 d的饑餓處理，隨后按照試驗設(shè)計的分組投放飼養(yǎng)。

1.1.2 試驗餌料：人工飼料為安徽鴻益飼料有限公司生產(chǎn)的蛙類配合飼料，干燥球狀小顆粒，主要營養(yǎng)成分見表1。

表1 人工飼料和水虻幼蟲的營養(yǎng)成分（干重） %

活餌為武漢市超拓生物農(nóng)業(yè)有限公司提供的武漢品系亮斑扁角水虻老熟幼蟲，幼蟲為5～6齡，確保幼蟲2 d之內(nèi)不會變黑而進入6齡預(yù)蛹階段。所有幼蟲均為轉(zhuǎn)化雞糞所得，投喂之前饑餓處理1 d并清洗干凈。水虻幼蟲的營養(yǎng)成分見表1。

1.1.3 試驗工具：電子秤（100 kg）、小型便攜秤（1 000 g）、溫濕度計、尼龍網(wǎng)、捕魚網(wǎng)、木制食盤、解剖工具、組織粉碎機（常州國華電器有限公司）、分析天平（上海亨方科學(xué)儀器有限公司）、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海市精宏實驗設(shè)備有限公司）、凱氏定氮儀（福斯公司，KjeltecTM8400型）、索氏提取器、箱式節(jié)能電阻爐（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計：實驗池設(shè)計如圖1所示，準(zhǔn)備4 m×15 m的長方形養(yǎng)殖池，池中間有一條寬1 m的水溝，用尼龍網(wǎng)圍成一排高0.6 m，面積4 m2的15個實驗池，每個實驗池包含1 m×1 m的水域（陰影部分）和兩側(cè)為1.0 m×1.5 m的陸地區(qū)域，各實驗池陸地及水域部分不相通，用1 m高尼龍網(wǎng)隔開，條件一致，編號為1～15，每個實驗池兩邊陸地部分各放置一個0.5 m×0.8 m的長方形飼料盤。試驗共設(shè)置5個處理，每個處理3次重復(fù)。將1 500只黑斑蛙分為15組，每組100只，稱重求各處理初始平均體重。安排試驗組時隨機抽取，重復(fù)處理的試驗組不得相連，最終設(shè)計結(jié)果見表2。試驗前2 d，將實驗池水域部分灌滿水并使水面溢出，使實驗池陸地環(huán)境潮濕。實驗池上方設(shè)置黑色遮陽網(wǎng)罩，防止地表溫度過熱。外圍用鐵皮護欄圍住，防止蛇、鼠等動物破壞實驗池，影響試驗結(jié)果。

圖1 實驗池示意圖

1.2.2 飼養(yǎng)方案：經(jīng)過預(yù)試驗，每個實驗池每天投喂量為40 g時，可以基本滿足當(dāng)季蛙攝食需求，水虻幼蟲按照75%含水量計算干重，5個處理投喂量分別為：40 g人工飼料（100%人工飼料）；10 g亮斑扁角水虻老熟幼蟲（以干重計）+30 g飼料（25%活餌+75%人工飼料）；20 g亮斑扁角水虻老熟幼蟲（以干重計）+20 g人工飼料（50%活餌+50%人工飼料）；30 g亮斑扁角水虻老熟幼蟲（以干重計）+10 g人工飼料（75%活餌+25%人工飼料）；40 g亮斑扁角水虻老熟幼蟲（以干重計，100%活餌）。水虻幼蟲及飼料要投入深度約5 cm食盤中，防止幼蟲爬出食盤。每天傍晚投喂前回收前1 d所剩飼料，并稱重，除100%活餌組外，各處理組水虻幼蟲幾乎被捕食完畢，按全部消耗計算。由于100%活餌組幼蟲數(shù)量較多，有少部分幼蟲逃出食盤進入水域或土中，回收難度大，故也按照全部消耗計算。

表2 試驗組分配和初始重

1.2.3 試驗指標(biāo)測定：9月下旬，當(dāng)蛙進食大幅減少且開始準(zhǔn)備打洞冬眠時，停止投喂飼料。每個實驗池隨機捕獲健康蛙15～20只，用于后續(xù)指標(biāo)測定。

①生長指標(biāo)測定：生長指標(biāo)參照皇康康等［9］提供的方法。設(shè)Wi和Wf分別表示黑斑蛙初始均重和末均重（g），Wd為攝入飼料總重（g），Wdf為使用飼料總重（g），Nf為末蛙數(shù)，Ni為初蛙數(shù)，t為試驗天數(shù)（d），Wt為黑斑蛙終末總重（g），W0為黑斑蛙初始總重（g），L為黑斑蛙終末體長（cm）。

②營養(yǎng)指標(biāo)測定：根據(jù)溫安祥等［10］的研究，蛙類主要食用部分為四肢部分肌肉。因此，測定蛙四肢肌肉部分中的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分的含量作為營養(yǎng)指標(biāo)。取前后肢體肌肉，去骨，用組織粉碎機等工具研磨成肉糜狀。水分含量采用105℃常壓干燥法（GB/T 6435—2006）、粗蛋白含量采用凱式定氮法（GB/T 6432—1994）、粗脂肪含量采用石油醚提取法（GB/T 6433—2006）、粗灰分含量采用550℃灼燒法（GB/T 6438—2007）進行測定。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析：試驗數(shù)據(jù)經(jīng)整理后，采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析，各組試驗數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”的形式表示，并進一步檢驗顯著性，由于初始平均重量相差較大，必要時采用協(xié)方差分析去掉初重的影響。

2 結(jié)果與分析

共進行了35 d試驗，所得結(jié)果及顯著性分析見表3和表4。

2.1 亮斑扁角水虻幼蟲替代量對黑斑蛙生長指標(biāo)的影響

2.1.1 對成活率的影響：試驗期間，僅100%活餌組早期出現(xiàn)3只死亡，解剖后蛙胃中無食物，應(yīng)與水虻幼蟲和飼料無關(guān)，此后各組未出現(xiàn)死亡情況（見表3）。因此，不同替代量對黑斑蛙成活率無影響或影響極小。

2.1.2 對增重率和特定增長率的影響：由表3可知，50%活餌組在增重率和特定生長率上較其他水平效果顯著且穩(wěn)定。75%活餌組和100%活餌組均增重率也明顯高于純?nèi)斯わ暳纤?，但?biāo)準(zhǔn)誤較大，效果不穩(wěn)定。說明使用亮斑扁角水虻幼蟲作為活餌替代50%的人工飼料可以顯著提高黑斑蛙的增重率和特定生長率，使用大量或全部使用水虻幼蟲也可以在一定程度上提高增重率和特定生長率，但效果不穩(wěn)定。

表3 亮斑扁角水虻幼蟲替代量對黑斑蛙生長的影響

表4 亮斑扁角水虻幼蟲替代量對黑斑蛙營養(yǎng)指標(biāo)的影響%

2.1.3 對飼料系數(shù)及飼料回收率的影響：飼料系數(shù)和飼料回收率方面，50%活餌組飼料系數(shù)最低，說明其飼料效率最高且較穩(wěn)定（見表3）。飼料回收率測定時默認水虻幼蟲全部被捕食，但實際上100%活餌組幼蟲有少量剩余，且回收較為困難，因此，該組處理的飼料系數(shù)有一定誤差。每天觀察時發(fā)現(xiàn)，當(dāng)同時投喂活餌和人工飼料時，可以促進蛙對人工飼料的攝食率。但活餌過多也會減少蛙對人工飼料的攝食，100%活餌組中再投喂人工飼料時，蛙對人工飼料的興趣大大減少。

2.1.4 對黑斑蛙肝體指數(shù)、臟體指數(shù)和肥滿度的影響：肝體指數(shù)、臟體指數(shù)和肥滿度3項指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果均為不顯著，但也有一定差異（見表3）。肝體指數(shù)人工飼料組較大，分析其原因應(yīng)為蛙長期食用人工飼料，活躍程度低，造成肝代謝壓力增大，經(jīng)解剖絕大部分蛙出現(xiàn)脂肪肝，肝臟顏色為黃褐色，投喂活餌的處理組在一定程度上可以緩解蛙肝代謝壓力。臟體指數(shù)隨著水虻替代量的增加逐漸增加，判斷采用活體餌料喂食可能在一定程度上提升蛙的內(nèi)臟功能。肥滿度為50%活餌組最高，但與其他組差別較小，應(yīng)為試驗前蛙個體生長發(fā)育已接近中后期，建議后續(xù)的試驗從蛙幼年時期開始探究。

2.1.5 對黑斑蛙活躍度的影響：由于沒有活躍度測量的實際方法，故憑觀察活躍的蛙數(shù)來判斷，其中，50%、75%、100%活餌組活躍度較高。與活餌組相鄰的人工飼料組也會受到影響，蛙有想越過尼龍網(wǎng)去捕食活蟲的表現(xiàn)。

2.2 亮斑扁角水虻幼蟲替代量對黑斑蛙營養(yǎng)指標(biāo)的影響

2.2.1 對肌肉含水量的影響：由表4可知，各處理組黑斑蛙肌肉含水量為71.06%～72.24%，采用亮斑扁角水虻幼蟲替代人工飼料對黑斑蛙肌肉含水量無顯著影響。當(dāng)亮斑扁角水虻幼蟲替代量為100%時，肌肉含水量稍高于其他試驗組，這可能與水虻本身的含水量較高有關(guān)。

2.2.2 對肌肉粗蛋白的影響：由表4可知，粗蛋白測定結(jié)果各組間的差異較大，其中，50%活餌組粗蛋白含量最高，其余組分均不如人工飼料組，100%活餌組顯著低于人工飼料組。水虻幼蟲粗蛋白干重含量為42%～45%，適當(dāng)?shù)靥娲斯わ暳蠒黾雍诎咄芗∪庵写值鞍椎暮俊?/p>

2.2.3 對肌肉粗脂肪的影響：由表4可知，粗脂肪含量雖然各組之間差異不顯著，但活餌組均高于人工飼料組，其中，50%活餌組含量最高。其原因應(yīng)該是水虻蟲體干重粗脂肪含量較高，且處理組攝食率較高。

2.2.4 對肌肉粗灰分的影響：由表4可知，粗灰分方面各組較人工飼料組均無顯著性，但50%活餌組最低，且相較25%活餌組和100%活餌組顯著，可能是50%活餌組所含粗蛋白、粗脂肪比例均高于其他組，故粗灰分含量會略低于其他組。

根據(jù)上述結(jié)果得出，當(dāng)使用50%的水虻老熟幼蟲替代50%人工飼料來飼養(yǎng)黑斑蛙時，增重率和特定生長率最高，肥滿度較高，營養(yǎng)水平最好，并可以間接促進黑斑蛙的攝食率。

3 討論

近年來，我國野生蛙類資源急劇減少，除環(huán)境污染問題外，人類的過度捕捉也是野生蛙類資源減少的重要原因。捕捉野生蛙類大多為食用和藥用，而黑斑蛙主要為食用［11］。分析其原因為目前黑斑蛙養(yǎng)殖基地較少，供不應(yīng)求，且野生黑斑蛙在口感、營養(yǎng)等方面要優(yōu)于養(yǎng)殖黑斑蛙。使用活餌飼喂黑斑蛙會增加蛙的活躍度，使其抵抗力增強、肌肉等部分更發(fā)達、口感更好。特別是使用活餌搭配人工飼料飼養(yǎng)黑斑蛙，不僅可以改善蛙的生長狀態(tài)，使其肉質(zhì)更佳，還可以在一定程度上起到保護野生黑斑蛙的作用。

該試驗中所用亮斑扁角水虻幼蟲均為水虻轉(zhuǎn)化新鮮雞糞所得，亮斑扁角水虻作為資源昆蟲，在國內(nèi)外的科研熱度很高，主要研究方向為水虻蟲粉代替飼料中的魚粉來飼養(yǎng)海水淡水魚類。劉世勝［12］在試驗中使用亮斑扁角水虻幼蟲代替魚粉養(yǎng)殖建鯉（Cyprinus carpio var.Jian），發(fā)現(xiàn)水虻幼蟲可以部分取代飼料中的魚粉及動物性蛋白。Henry等［13］綜述了國外昆蟲在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用，其中著重介紹了水虻幼蟲可以代替飼料中的魚粉，并且在養(yǎng)殖大菱鲆［14］（Scophthalmus maximus）、虹鱒魚［15］（Oncorhynchus mykiss）等魚類時，使用水虻蟲粉得到了與魚粉持平甚至更好的養(yǎng)殖效果。但到目前為止，水虻作為活餌在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的研究內(nèi)容仍很少。該試驗通過使用水虻幼蟲作為活餌部分替代人工飼料飼養(yǎng)黑斑蛙，取得了較好的試驗結(jié)果，為今后亮斑扁角水虻作為活餌在其他養(yǎng)殖業(yè)上的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

相比于常見的活料蚯蚓、黃粉蟲、搖蚊等，亮斑扁角水虻幼蟲有價格便宜、養(yǎng)殖周期短、容易獲取等優(yōu)勢。試驗中使用的黑斑蛙已經(jīng)具備較強的消化和吸收功能，可以有效利用水虻幼蟲所具備的營養(yǎng)成分。當(dāng)蛙剛完成從水中到陸地的變態(tài)發(fā)育時，其體質(zhì)較弱、捕食能力較差，而亮斑扁角水虻老熟幼蟲個體較大、活躍度高，并不適合該時期蛙的飼養(yǎng)。根據(jù)前文所述，蚯蚓及搖蚊幼蟲等昆蟲作為活餌飼養(yǎng)幼蛙效果較好。當(dāng)蛙成長到一定齡期后，其消化系統(tǒng)發(fā)育完全，此時使用水虻幼蟲才會得到好的效果。因此，可以使用水虻幼蟲和其他昆蟲幼蟲在不同時期來飼養(yǎng)黑斑蛙，這樣才能取得活餌喂食的最佳效果。找到水虻幼蟲作為活餌飼養(yǎng)黑斑蛙的最佳投喂時期是接下來要解決的一個重要問題。

該試驗中，蛙的成活率幾乎為100%，活躍度較高，且未出現(xiàn)“歪頭病”等常見蛙類病癥。夏嬙等［16］經(jīng)試驗得出，使用添加亮斑扁角水虻幼蟲的飼料來喂養(yǎng)蛋雞，可以一定程度上提高蛋雞的免疫能力，但是，亮斑扁角水虻能否對蛙類免疫力產(chǎn)生影響，還有待于進一步研究。另外，還可以通過測定脾巨噬細胞呼吸暴發(fā)、血細胞吞噬、胃溶菌酶活力等免疫力指標(biāo)，從而進一步驗證亮斑扁角水虻幼蟲作為活餌可以提高蛙類的免疫能力［17］。

4 結(jié)論

使用亮斑扁角水虻幼蟲作為活體餌料部分替代人工飼料喂養(yǎng)黑斑蛙時，當(dāng)替代量為50%左右時，養(yǎng)殖效果最佳，結(jié)果優(yōu)于人工飼料直接飼養(yǎng)，并且還會促進黑斑蛙對人工飼料的攝取，提高蛙活躍度，但全部使用活體餌料的飼養(yǎng)效果并不理想。該試驗為水虻及其衍生產(chǎn)品在蛙類養(yǎng)殖上的應(yīng)用奠定了實踐基礎(chǔ)。飼喂亮斑扁角水虻幼蟲對黑斑蛙免疫能力、烹飪口感的影響及最佳飼喂時期等問題還需要進一步去驗證。

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