林建和 肖雍琴 陳張華 李福泉 張娟

摘 要： 以動物內(nèi)臟為材料，研究塑化標(biāo)本制作中固定、脫水脫脂、真空滲透塑化、定型整形環(huán)節(jié)工藝技術(shù)要求，經(jīng)過試驗，優(yōu)化參數(shù)及工藝要求，塑化標(biāo)本制作方法簡便、設(shè)備簡易，具有推廣利用價值。

關(guān)鍵詞： 動物內(nèi)臟；塑化標(biāo)本

塑化標(biāo)本制作是將試驗材料利用滲透塑化技術(shù)，經(jīng)過固定、脫水脫脂、真空浸漬塑化和定型處理等工序后，制作成方便用于教學(xué)或其它試驗用途的一種標(biāo)本制作方法。長期以來。解剖標(biāo)本的制作均以福爾馬林等有害藥物進行浸泡、固定和保存。福爾馬林作為保存液會慢慢揮發(fā)而致使?jié)舛冉档?，并且福爾馬林液在保存中往往形成多聚甲醛，使浸液變濁，影響觀察[1-2]。福爾馬林浸泡式標(biāo)本強烈的刺激性氣味和毒性，難免會對廣大師生身體健康造成傷害。生物塑化標(biāo)本相對于傳統(tǒng)標(biāo)本來說，更具安全性，更有利于教學(xué)和研究。目前塑化標(biāo)本的制作工藝復(fù)雜，設(shè)備多，成本也因此較高。本文旨在探索在低成本的情況下，普通生物實驗室就能制作小型塑化標(biāo)本的方法。

1 主要設(shè)備及材料

1.1主要設(shè)備

真空干燥箱，恒溫干燥箱，玻璃缸，電吹風(fēng)，比重計。

1.2主要試劑

甲醛（HCHO），乙醇（CH3CH2OH），丙酮（CH3COCH3），聚乙二醇HO（CH2CH2O）nH（PEG）。

1.3材料

經(jīng)5%～10%甲醛溶液固定后的內(nèi)臟標(biāo)本。

2 塑化內(nèi)臟標(biāo)本制備

2.1內(nèi)臟標(biāo)本材料處理

用于塑化的內(nèi)臟標(biāo)本按常規(guī)解剖進行處理。經(jīng)福爾馬林固定后的肺，帶氣管或支氣管，肺門結(jié)構(gòu)盡量保留完整。心臟應(yīng)清除心腔內(nèi)的凝血污塊，必須保留主動脈、肺動脈、前后腔靜脈和肺靜脈，并進行開窗處理，以便于觀察心臟結(jié)構(gòu)。腸道類空腔器官，應(yīng)盡量清除其內(nèi)容物。

2.2漂白

經(jīng)丙酮脫水脫脂后的標(biāo)本與空氣接觸時間略長，顏色會加深，應(yīng)進行漂白處理。將內(nèi)臟標(biāo)本直接放入1%～2%的過氧化氫溶液中浸泡一周。

2.3脫水

脫水前將內(nèi)臟標(biāo)本放在流動水源處長時間連續(xù)清洗，動作要緩和輕柔，48小時后開始脫水。把內(nèi)臟標(biāo)本放入80%、95%、100%Ⅰ、100%Ⅱ的乙醇溶液進行梯度脫水，每一種乙醇溶液各浸泡一周，乙醇量應(yīng)淹沒標(biāo)本。

2.4脫脂

標(biāo)本脫水后，還應(yīng)進行脫脂，乙醇只有脫水作用，丙酮有脫水和脫脂的作用。在內(nèi)臟標(biāo)本經(jīng)95%的乙醇溶液脫水后，可用100%丙酮進行脫水脫脂，在室溫下進行10天脫脂。

2.5真空塑化

塑化劑采用聚乙二醇，是一種溫和低毒無刺激性的高分子化合物，能完全溶于水，具有較好的穩(wěn)定性。根據(jù)聚乙二醇分子量大小不同，其物理形態(tài)可由白色粘稠液（分子量200～700）到蠟質(zhì)半固體（分子量1000～2000）直到堅硬的蠟質(zhì)固體（分子量3000～20000）。

經(jīng)脫水脫脂后的內(nèi)臟標(biāo)本，即刻放入分子量為600的聚乙二醇溶液中完全浸沒，可用鐵塊下壓標(biāo)本于塑化劑內(nèi)，溫度保持在25℃～30℃，塑化全過程均在真空干燥器和間歇負(fù)壓下完成。浸漬開始時，將標(biāo)本放入裝有塑化劑的塑化容器內(nèi)，這時即可見塑化劑液面有許多氣泡冒出。由于氣泡的數(shù)量較多，此時不宜抽真空，可放置12～24h后再抽真空[4]。第一天壓力控制從70KPa逐漸調(diào)至50KPa ，第二天的壓力從50KPa 逐漸調(diào)至40KPa；第三天的壓力從 40KPa調(diào)至30KPa，至第五天逐漸調(diào)至10KPa，后面保持10KPa壓力不變。此時標(biāo)本內(nèi)部基本上已被塑化劑填充，每次調(diào)節(jié)進氣閥，均須仔細(xì)觀察塑化劑液面氣泡的產(chǎn)生量。在整個塑化過程中，每半分鐘氣泡數(shù)控制10～20個，后期每半分鐘氣泡數(shù)須在5個以內(nèi)[4]，直到無氣泡產(chǎn)生，即完成了整個真空塑化過程。

2.6標(biāo)本定型整形

將分子量為6000的聚乙二醇放入59℃的恒溫干燥箱內(nèi)，待其完全溶化后，將標(biāo)本轉(zhuǎn)入并將其完全浸沒。10～12小時后，取出標(biāo)本，電吹風(fēng)加熱，同時用塑料泡沫吸取表面多余的聚乙二醇，待其未冷卻時，即時定型。經(jīng)過塑化處理后的標(biāo)本，內(nèi)臟部分遇到收縮時，可用石蠟填充。具體操作是：將塑化后的標(biāo)本放入60℃的保溫箱，注射器抽取溶化的石蠟（要求60℃以上溶化的石蠟），注入標(biāo)本收縮的部位以填充飽滿即可[1]。

3 結(jié)果

由以上論述可知，塑化的實質(zhì)是動物組織內(nèi)的液體通過真空滲透過程被活性塑料置換出來，使動物細(xì)胞及組織器官、整體形態(tài)仍舊保持其生前的狀態(tài)。用本方法塑化所得到的內(nèi)臟標(biāo)本成型好，較柔韌，具有一定彈性。外觀光亮，色澤、質(zhì)地都較好地達(dá)到了教學(xué)的要求。沒有福爾馬林的刺激氣味，對人體無危害，能夠取代傳統(tǒng)福爾馬林浸泡保存標(biāo)本的方法。由于標(biāo)本經(jīng)脫水脫脂處理，所以可以長期保存。

4 討論

4.1 乙醇和丙酮脫水脫脂的比較

乙醇價格低廉，容易購買和管理，脫水力強，同時可以使組織硬化，但其脫脂力較弱；丙酮價格較乙醇昂貴，脫水和脫脂力都較強[3]。在采用乙醇脫水的同時，采用結(jié)合丙酮脫脂性能的使用，節(jié)約了制作成本。

4.2固定的效果

取材后的內(nèi)臟標(biāo)本在5%～10%福爾馬林溶液中固定時間不能太長.常采用短期固定（10h～48h），并保存于福爾馬林溶液中，短期固定可以很好地保存標(biāo)本的原有色澤，最好是采用新鮮的標(biāo)本固定，能防止標(biāo)本色澤發(fā)黑發(fā)暗，組織發(fā)硬變脆.而在低溫下比在室溫下對保存標(biāo)本的色澤更有利，其固定的效果還取決于甲醛的濃度。

4.3重視塑化各環(huán)節(jié)操作

在塑化過程的任何環(huán)節(jié).如標(biāo)本在取材后長期暴露在空氣中或沒有浸泡在乙醇或丙酮的液面以下，或者標(biāo)本脫水不徹底等都可造成組織皺縮.如果脫水時間過長則能造成組織器官脆弱，容易改變器官的形狀和顏色[3]。

4.4本方法與傳統(tǒng)塑化標(biāo)本制作方法比較

采用乙醇常溫脫水，丙酮常溫脫脂，設(shè)備簡易，方法簡便，易于操作，成本低，在短時間內(nèi)可制備出品質(zhì)較好的塑化標(biāo)本。極大程度上降低了塑化標(biāo)本制作的設(shè)備要求，利于塑化技術(shù)的推廣和普及。

5 小結(jié)

1）塑化標(biāo)本的制作工藝流程為：初次解剖固定——第二次解剖——脫水脫脂——真空滲透塑化——定型整形。

2）真空滲透塑化是塑化技術(shù)的中心環(huán)節(jié)，在此環(huán)節(jié)的操作過程中，要做好壓力的正確控制與塑化劑液面氣泡的觀察。

3）利用塑化技術(shù)可以除去標(biāo)本水分并且使動物的組織器官保持其生存前的狀態(tài)，標(biāo)本不僅干燥、無味，還可以用手觸摸及抓放。塑化標(biāo)本從外觀、色澤、彈性、標(biāo)本質(zhì)地和氣味以及對人體的危害性看，能滿足動物解剖實驗室教學(xué)和科研要求。

參考文獻

[1] 唐安科.一種簡易塑化動物標(biāo)本的制作方法[J].生物學(xué)通報，2006，41（9）：56-57.

[2] 白春黎.動物肌肉組織器官塑化標(biāo)本制作技術(shù)[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2007，26（1）：125-126.

[3] 喬治良，王澤恩，等.實驗性常溫下制備塑化標(biāo)本技術(shù)[J].解剖學(xué)雜志，2009，32（4）：558-560.

[4] 譚立文，張紹祥.生物塑化技術(shù)中真空浸漬的改進[J].CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ANATOMY，2001，19（4）：380.