張觀宇，闞爽，高飛，許立莉，劉頤

（1.遼陽石化總醫(yī)院病理科，遼寧　遼陽　111003；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院病理科，遼寧　沈陽　110001）

結(jié)直腸息肉病變是大腸癌癌前病變類型，多種基因在結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮分子作用[1]。本研究通過檢測p27和Mcmp4在結(jié)直腸息肉病變中的表達(dá)，探討其對結(jié)直腸癌癌前病變的風(fēng)險提示作用以及在結(jié)直腸癌診斷、指導(dǎo)治療的意義。

1　材料與方法

1.1材料選取2012年1月～2016年12月遼陽石化總醫(yī)院結(jié)腸鏡活檢標(biāo)本320例，分為4組：增生性息肉80例，低級別腺瘤性息肉80例，高級別腺瘤性息肉80例，結(jié)直腸腺癌80例。其中男182例，女138例；年齡32～79歲，平均年齡（56.9±13.6）歲。

1.2方法所有標(biāo)本取檢后立即置入4%中性甲醛溶液固定[2]，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，采用免疫組化SP二步法，分別進(jìn)行p27和Mcmp4檢測，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。p27和Mcmp4鼠抗人單克隆抗體及DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性切片做陽性對照。

1.3結(jié)果判定p27和Mcmp4均定位于細(xì)胞核，以細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色為（+）[3]，觀察切片中10個具有代表性的高倍視野，計數(shù)上皮細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為（+），陽性細(xì)胞數(shù)＜10為（-）[3]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，等級分組資料用Spearman等級相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1p27在增生性息肉、低級別腺瘤、高級別腺瘤、結(jié)直腸腺癌陽性率分別為 91.2%（73/80）、88.8%（71/80）、41.3%（33/80）、36.3%（29/80），增生性息肉和低級別腺瘤兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，低級別腺瘤和高級別腺瘤兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），高級別腺瘤和腺癌兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

2.2Mcmp4在增生性息肉、低級別腺瘤、高級別腺瘤、結(jié)直腸腺癌陽性率分別為 32.5%（26/80）、35%（28/80）、82.5%（66/80）、86.3%（69/80），增生性息肉和低級別腺瘤兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，低級別腺瘤和高級別腺瘤兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），高級別腺瘤和腺癌兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表1　p27在結(jié)直腸息肉和腺癌的表達(dá)Table 1 Expression of p27 in colorectal polyps and adenocarcinomas

表2　Mcmp4在結(jié)直腸息肉和腺癌的表達(dá)Table 2 Expression of Mcmp4 in colorectal polyps and denocarcinomas

2.3統(tǒng)計學(xué)分析顯示，p27和Mcmp4在結(jié)直腸息肉和腺癌中的表達(dá)表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

3　討論

結(jié)直腸癌是人類常見的致死性疾病，在西方國家已位居惡性腫瘤的第三位[4]，每年新發(fā)病例約120萬例。同樣，結(jié)直腸癌也是我國最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率呈上升趨勢[5]，隨著生活水平和飲食習(xí)慣的改變，我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率明顯升高[6]。因此，多年來越來越多的研究積極深入結(jié)直腸癌發(fā)生的分子遺傳學(xué)的探索，表觀遺傳學(xué)和腫瘤關(guān)系的研究日益增多[7-8]。

p27是近年來發(fā)現(xiàn)的一種廣譜細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制因子（cyclin-dependent kinase inhibitors，CDKIs）[9]，該因子在細(xì)胞周期調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，被認(rèn)為屬于抑癌基因家族[10]，一旦p27被過度降解，細(xì)胞增殖無限制進(jìn)行，導(dǎo)致不典型增生和癌變。本研究發(fā)現(xiàn)，p27在增生性息肉和低級別異型增生息肉呈現(xiàn)高表達(dá)，而在高級別異型增生息肉和腺癌中低表達(dá)，且二者之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示p27在結(jié)直腸癌的發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用，p27基因蛋白失活將導(dǎo)致細(xì)胞的異常增生，導(dǎo)致結(jié)直腸腺癌的發(fā)生。這與國內(nèi)外學(xué)者對胃癌[11]、肺癌[12]、喉癌[3]等的研究一致。

微小染色體維持蛋白（MCM）是一組真核生物DNA復(fù)制的主要調(diào)控因子，在DNA復(fù)制的起始和延伸過程中具有重要作用，其表達(dá)水平與細(xì)胞增生程度呈正比。Mcmp4是MCM家族中的一員[3]，只在處于增殖活動周期的細(xì)胞表達(dá)，其不表達(dá)意味著細(xì)胞退出增殖周期成為成熟細(xì)胞。本實驗中，Mcmp4的表達(dá)隨著息肉上皮細(xì)胞異型程度的增加而明顯增高，增生性息肉、低級別腺瘤與高級別腺瘤、腺癌之間的差別具有顯著性，可以作為結(jié)直腸腺瘤預(yù)后評價的重要參考指標(biāo)。

腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展是一個極其復(fù)雜的過程，在各種致癌因素的誘導(dǎo)下引起機(jī)體細(xì)胞一系列基因的改變[13]，最終導(dǎo)致癌的發(fā)生和進(jìn)展。本研究還發(fā)現(xiàn)，p27和Mcmp4在結(jié)直腸息肉和腺癌中的表達(dá)表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)（P＜0.05），二者的協(xié)同作用在結(jié)直腸息肉、腺瘤、腺癌的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，兩者負(fù)相關(guān)，使細(xì)胞進(jìn)入活躍的增生期，從而失去正常的周期調(diào)控，共同參與結(jié)直腸癌的發(fā)生。因此，聯(lián)合檢測p27和Mcmp4在結(jié)直腸息肉病變中的表達(dá)，可以作為結(jié)直腸腺癌及異型增生的重要生物學(xué)標(biāo)記物。

[1]裴笑月,胡波,孫靜陽,等.突變型p53和Pgp在結(jié)直腸癌中表達(dá)的意義[J].診斷病理學(xué)雜志,2015,22(4):233-285.

[2]徐藝桐,張觀宇,蘇玉坤.伴絨毛膜上皮癌分化的子宮內(nèi)膜未分化癌1例臨床病理分析[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2012,9(10):124-125.

[3]劉宏俠,梁振,孫玉滿.p27和p21蛋白在早期喉癌及其切緣組織中的表達(dá)與局部復(fù)發(fā)的關(guān)系[J].診斷病理學(xué)雜志,2014,21(5):283-289.

[4]Jemal A,Siegel R,Xu J,et al.CancerStasstics,2010[J].CA Cancer J Clin,2010,60(5):277-300.

[5]王光茂,袁銀萍,趙翠秀,等.結(jié)腸癌組織MMP-2和MMP-9及VEGF表達(dá)臨床意義的研究[J].中華腫瘤防治雜志,2011,18(16):1267-1269.

[6]張劍,吳敏,王利娟,等.SLP-2在結(jié)腸癌中的表達(dá)[J].世界華人消化雜志,2013,21(22):2228-2231.

[7]Momparler RL.Cancer epigenetics[J].Oncogene,2003,22(42):6479-6483.

[8]Lee MP.Genome-wide analysis[J].Ann N Y Acd Sci,2003,983:101-109.

[9]Begnami MD,Rushing EJ,Evangelista R,et al.Evaluation of RB gene and cyclin-dependent kinase inhibitors p21 and p27 in pleomorphic xantoatrocyoma[J].Int J Surg Path,2006,14(2):113-118.

[10]Yuen PW,Chow V,Choy J,et al.The clinicopathologic significance of p53 and p21 expression in the surgical management of lingual squamous cell carcinoma[J].Am J Clin Pathol,2001,116(2):240-245.

[11]Omi Y,Yamamoto T,Okamoto T,et al.A useful immunohistochemicalapproachtoevaluateintraductal prolierative lessions of the breast and to predict theirprognosi[J].HistolHistopathol,2011,26(1):79-86.

[12]JonasonJH,Gavrilova N,Wu M,et al.Regulation of SCF(SKP2)ubiquitin E3 ligase assembly and p27(KIPI)proteolysis bt the PTEN pathway and cyclin D1[J].CellCycle,2007,6(8):951-961.

[13]祝迎鋒,李莉,于東紅.胃癌組織中HMGB1表達(dá)與幽門螺桿菌L型感染的相關(guān)性研究[J].診斷病理學(xué)雜志,2014,21(3):304-307.