張海濤，馬明蘭 ，全 青，劉 陽，羅立新

(1.武漢大學(xué) 化學(xué)與分子科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430071；2.武昌理工學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，湖北 武漢 430223)

食用油尤其植物油很大一部分是不飽和脂肪酸,本身對人體是無害,但是這種不飽和脂肪酸有自由氧化的特性,在光照,受熱及密封不嚴(yán)情況下與空氣接觸就會被氧化,長期食用氧化酸敗的油脂會對肝臟產(chǎn)生負(fù)擔(dān),影響生長發(fā)育[1]。為了抑制油脂的氧化，需要添加抗氧化劑，尋找有效的天然的抗氧化劑意義重大[2]。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

陽荷：2016年8月采于恩施建始縣。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所)；95%乙醇；冰乙酸；亞硝酸鈉；硝酸鋁；氫氧化鈉；碘化鉀；異辛烷；硫代硫酸鈉；抗壞血酸；檸檬酸；大豆油。

T224S型電子分析天平(賽多利斯儀器公司)；UV-1800紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津)；索氏提取器；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；小型粉碎機(jī)；RE-201C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；2.5T 冷凍干燥機(jī)(Labconco)；恒溫培養(yǎng)箱等。

1.2 方法

1.2.1 陽荷黃酮的提取

陽荷洗凈→烘干(35℃)→粉碎→稱量→超聲輔助醇提→冷卻→離心→旋轉(zhuǎn)濃縮→醇沉→冷凍干燥→得黃酮粗提物[3]。

1.2.2 陽荷黃酮含量的測定

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg置100mL容量瓶中，用少量95%乙醇溶解后，加50%乙醇定容至刻度，搖勻，即可得0.1mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

精密吸取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0,1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL分別置于25mL 容量瓶中，加入50%的乙醇5mL，加入5%的亞硝酸鈉0.3mL，搖勻，放置6min，加10%的硝酸鋁0.3mL搖勻，放置6min，加入1%的氫氧化鈉4mL搖勻，最后用50%的乙醇稀釋至刻度，放置15min[4]，即得濃度為0.000mg/mL、0.004mg/mL、0.008mg/mL、0.012 mg/mL、0.016 mg/mL、0.020 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以試劑空白作參比，在200至550nm波長范圍掃描，以最大吸收峰作為測試波長。以吸光度A 為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。用最小二乘法進(jìn)行線性擬合,得c與A 的線性回歸方程以及相關(guān)系數(shù)R2。

1.2.2.2 陽荷黃酮含量的測定

精密取黃酮粗提物10.40mg于50mL的容量瓶中，加95%乙醇適量使之溶解，加50%乙醇稀釋至刻度，即得濃度為0.208mg/mL的黃酮樣品溶液。取樣品溶液1mL，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行測定，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程計(jì)算樣品含量。

1.2.3 陽荷黃酮對食用油的抗氧化實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 抗氧化實(shí)驗(yàn)

采用Schaal烘箱法，稱取定量的油樣，加入不同抗氧化劑，敞口置于65±1℃的恒溫箱中，每隔48h攪拌一次并測POV值。POV值越低，表明所添加物質(zhì)的抗氧化作用越強(qiáng)。通過POV值的變化趨勢確定抗氧化劑的抗氧化性能。

POV值得測定方法：按照GB/T 5538-2005規(guī)定的方法測過氧化值。

抗氧化能力的評價(jià)方法:POV值與時間關(guān)系曲線來衡量黃酮對油脂的抗氧化能力。

2 結(jié)果

2.1 樣品溶液吸光值為

代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=12.65x+0.4279, R2=0.9996。測定陽荷黃酮粗粉中總黃酮含量為42.2%。

C/(mg/mL)0.0040.0080.0120.0160.02A0.4800.5280.5770.6310.681

2.2 不同添加量陽荷黃酮對大豆油的抗氧化作用

按照GB2760-2011，植物油脂中天然抗氧化的添加量一般為0.02%～0.07%，故本實(shí)驗(yàn)陽荷黃酮的添加量選為0.05%，0.1%，0.2%。

表1 不同添加量的陽荷黃酮對大豆油的抗氧化作用

由表1可以得出，陽荷黃酮加入后大豆油的POV值明顯低于不加抗氧化劑的，說明陽荷黃酮具有的抗氧化能力，且抗氧化能力隨添加量的增加而變強(qiáng)。

2.3 陽荷黃酮與常見的抗氧化劑在大豆油中抗氧化作用比較

表2 不同抗氧化劑對大豆油的抗氧化作用比較

由表2得出，加入陽荷黃酮后的大豆油的POV值與加入維生素C組過氧化值接近，但明顯低于檸檬酸組，說明其氧化能力與維生素C相當(dāng)，但強(qiáng)于檸檬酸。

3 結(jié)論

陽荷總黃酮對油脂表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化能力，且抗氧化能力強(qiáng)于檸檬酸，相當(dāng)于維生素C,抗氧化能力隨添加量的增大而變強(qiáng)。陽荷黃酮本身還具有一定的藥效，可以作為一種天然抗氧化劑用于油脂及其含油食品中，以延長保質(zhì)期。

[1] 陳 媛，周 玫，劉尚善，等.營養(yǎng)、衰老與自由基理論[J].營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2005,27(3)：178-180.

[2] 徐雅琴，于澤源，任華峰，等.紅樹莓葉片中黃酮類物質(zhì)的提取及抗氧化作用研究[J].中國油脂,2003,28(5):69-71.

[3] 張 蕾，喬旭光，占習(xí)娟，等.超微粉粹對荷葉黃酮類物質(zhì)提取工藝的影響[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2006,32(11):142-145.

[4] 范 照，張迪清.保健食品化學(xué)及其檢測技術(shù)[M].北京：中國輕業(yè)出版社，1998(6)：52-57.

[5] 楊瓊瓊，劉雄民，賴 芳，等.柿木皮單寧的超聲醇提工藝木皮單寧的超聲醇提工藝木皮單寧的超聲醇提工藝優(yōu)化及抗油脂氧化研究[J].精細(xì)化工，2015(11)：1236-1242.