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        高壓熱水提取靈芝多糖及對其抗氧化活性的影響

        2018-04-17 06:09:24操麗麗姚江奇姜紹通
        關(guān)鍵詞:總糖靈芝提取液

        操麗麗, 周 俊, 鄭 峰, 姚江奇, 王 濤, 姜紹通, 龐 敏,*

        (1.合肥工業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院/安徽省農(nóng)產(chǎn)品精深加工重點實驗室, 安徽 合肥 230009; 2.安徽黃山云樂靈芝有限公司, 安徽 宣城 242609)

        靈芝(Ganodermalucidum)是我國一種重要的藥用真菌,具有很高的藥用價值,素有“仙草、瑞草”之美譽,作為民間藥方延年益壽和滋補身體已經(jīng)有上千年歷史。靈芝含有多糖、核苷、三萜化合物、生物堿、不飽和脂肪酸、甾醇、有機鍺等活性成分[1-2]。靈芝多糖是靈芝中主要的生物活性成分,具有抗腫瘤[3-4]、免疫調(diào)節(jié)[5]、抗氧化[6]等多種藥理活性,因此靈芝多糖是靈芝研究的一個熱點。

        靈芝子實體多糖屬于胞內(nèi)多糖,存在于細胞壁或細胞間質(zhì)中,而靈芝子實體的細胞壁是由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素組成的致密結(jié)構(gòu),導(dǎo)致靈芝多糖不易從細胞內(nèi)提取出來。利用多糖易溶于熱水、稀酸、稀堿等極性溶液的特性,目前提取靈芝多糖的方法主要有熱水浸提法[7]、超聲協(xié)助水提法[8]、微波提取法[9]、酶法[10]、微波輔助超聲提取法[11]等。熱水浸提法提取多糖是工業(yè)生產(chǎn)常用的方法,但提取時間長、能耗大、得率低、活性差,限制了靈芝產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。超聲協(xié)助水提法以超聲波的高頻振蕩及其產(chǎn)生的“空穴效應(yīng)”破壞細胞結(jié)構(gòu),有利于多糖從細胞內(nèi)溶出;酶法提取是以酶來降解細胞壁,使得胞內(nèi)多糖溶出,可提高靈芝多糖的得率;微波提取法是通過微波破壞細胞壁和細胞膜的結(jié)構(gòu),從而使胞內(nèi)多糖快速溶出[12],但這些方法因成本高,在工業(yè)上難以大規(guī)模的應(yīng)用。高壓熱水法是利用高壓對細胞的破碎作用,有利于熱水從胞內(nèi)溶出多糖,此提法方法簡單可行、適用性強,可用于大批量的工業(yè)生產(chǎn)[13]。

        由于高溫高壓的提取強度會對多糖的結(jié)構(gòu)和活性產(chǎn)生影響,且抗氧化性是靈芝多糖的主要藥理活性之一,因此,本文通過正交試驗對高壓熱水提取靈芝多糖的工藝進行了優(yōu)化,并分析提取工藝對其抗氧化活性的影響,期望獲得的結(jié)果能為靈芝的開發(fā)利用提供一定的理論基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        靈芝子實體超微粉由安徽黃山云樂靈芝有限公司提供。

        葡萄糖、蒽酮、濃硫酸、無水乙醇、正丁醇、氯仿等試劑均為分析純,中國國藥集團化學(xué)試劑有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH),梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司。

        1.2 儀器與設(shè)備

        TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計,北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;MLS-3780型高壓蒸汽滅菌鍋,日本SANYO公司;AL104型電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;CR22GⅡ型高速冷凍離心機,日本日立公司;CR22GⅡ型超濾設(shè)備,美國Pall公司;FD-1A-50型冷凍干燥機,北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司。

        1.3 檢測方法

        1.3.1還原糖的檢測

        采用3,5-二硝基水楊酸(DNS)法[14]。以葡萄糖質(zhì)量濃度(x,mg/mL)為橫坐標、吸光度(y)為縱坐標,繪制葡萄糖標準曲線,對其進行線性回歸后得到方程y=1.404 2x-0.017 7,該方程的相關(guān)系數(shù)為0.999 2,葡萄糖濃度的線性檢測范圍為0.10~0.70 mg/mL。還原糖的質(zhì)量濃度計算見式(1)。

        (1)

        式(1)中ρ為根據(jù)葡萄糖標準曲線計算得到待測提取液中葡萄糖質(zhì)量濃度,mg/mL;V為靈芝多糖提取液體積,mL;n為稀釋倍數(shù);m為靈芝子實體超微粉質(zhì)量,g。

        1.3.2多糖的檢測

        采用蒽酮-硫酸法[15]。以葡萄糖質(zhì)量濃度(x,mg/mL)為橫坐標、吸光度(y)為縱坐標,繪制葡萄糖標準曲線,對其進行線性回歸后得到方程y=5.420 6x-0.077 3,該方程的相關(guān)系數(shù)為0.999 1,葡萄糖濃度的線性檢測范圍為0.04~0.18 mg/mL??偺堑馁|(zhì)量濃度和多糖的提取率計算分別見式(2)和(3)。

        (2)

        ω(多糖)=[ω(總糖)-ω(還原糖)]×0.9×100%。

        (3)

        式(2)和(3)中,0.9為葡萄糖換算成葡聚糖校正系數(shù),其他參數(shù)同1.3.1節(jié)。

        1.3.3DPPH自由基清除率的測定

        根據(jù)文獻[16],稱取一定量的DPPH,用無水乙醇配制成0.2 mmol/L的DPPH溶液。取2 mL待測液,加入 2 mL 0.2 mmol/L DPPH溶液,混合均勻,室溫放置30 min后,于波長525 nm處測吸光度(Ai)。以2 mL待測液和2 mL無水乙醇混合作為對照組(Aj),另外2 mL 0.2 mmol/L DPPH溶液和2 mL無水乙醇混合后測吸光值(Ac)。DPPH自由基清除率計算見式(4)。

        (4)

        1.4 高壓熱水提取靈芝多糖工藝優(yōu)化

        1.4.1單因素實驗

        精確稱取靈芝子實體超微粉末 1.00 g,以蒸餾水為提取溶劑,分別研究提取溫度(110、115、120、125、130 ℃)、料液比 (即靈芝子實體超微粉質(zhì)量與提取溶劑體積的比例)(1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70 g/mL)、提取時間(20、30、40、50、60 min)對靈芝總糖含量、還原糖含量和DPPH自由基清除率的影響。每組實驗重復(fù)3次,取平均值。

        1.4.2正交試驗

        根據(jù)單因素實驗結(jié)果,用L9(34)設(shè)計正交試驗研究提取溫度、提取時間、料液比對靈芝多糖提取的影響,對靈芝多糖高壓熱水提取工藝進行優(yōu)化。每組實驗重復(fù)3次,取平均值。

        1.4.3提取次數(shù)對靈芝多糖提取率影響的研究

        根據(jù)正交試驗優(yōu)化確定的工藝,提取靈芝多糖。高壓熱水靈芝多糖提取液經(jīng)5 000 r/min離心20 min,測定上清液中的總糖和還原糖含量。取棄去上清液后的固體多次重復(fù)提取,測定上清液中的總糖和還原糖含量。

        1.5 靈芝多糖的純化

        稱取50.00 g靈芝子實體超微粉,在較佳高壓熱水提取條件下提取多糖,5 000 r/min離心20 min后收集上清液,經(jīng)過3 000 Da膜超濾濃縮后,向溶液中加入其體積1/3的Sevag試劑(V(氯仿)∶V(正丁醇)=4∶1)混合震蕩后靜置30 min,離心(4 000 r/min,5 min),除去有機層及水層和有機層交界處的變性蛋白質(zhì),重復(fù)多次至無蛋白質(zhì)產(chǎn)生。除蛋白后的多糖,冷凍干燥保存,測定DPPH自由基清除率。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 提取溫度對靈芝多糖提取的影響

        以料液比1∶50 g/mL、提取時間為30 min,考察110、115、120、125和130 ℃的提取溫度對靈芝多糖提取的影響,結(jié)果見圖1。

        圖1 提取溫度對靈芝多糖提取的影響Fig.1 Effect of temperature on extraction efficiency of polysaccharides from Ganoderma lucidum

        由圖1可以看出,隨著提取溫度的升高,靈芝多糖提取液中總糖含量和還原糖含量不斷增加,對DPPH自由基清除率不斷下降,當(dāng)溫度達到125 ℃時,總糖含量的增加不顯著,而還原糖含量顯著增加。這說明隨著溫度的升高,有助于多糖從細胞中的溶出,但高溫也導(dǎo)致多糖發(fā)生降解,其抗氧化活性也降低了。因此,選擇125 ℃作為較佳提取溫度。

        2.2 料液比對靈芝多糖提取的影響

        以提取溫度120 ℃、提取時間為30 min,考察1∶30、1∶40、1∶50、1∶60和1∶70 g/mL的料液比對靈芝多糖提取的影響,結(jié)果見圖2。

        圖2 料液比對靈芝多糖提取的影響Fig.2 Effect of solid-to-liquid ratio on extraction efficiency of polysaccharides from Ganoderma lucidum

        由圖2可以得知,在料液比為1∶30~1∶50 g/mL時,靈芝多糖提取液中總糖含量和對DPPH自由基清除率隨提取用水量的增加而增大;當(dāng)料液比為1∶50 g/mL時,總糖的含量和靈芝多糖提取液對DPPH自由基清除作用達到最大。而當(dāng)繼續(xù)增加提取用水量時,總糖含量反而有著緩慢下降。這可能的原因是,在1∶50 g/mL的料液比時,靈芝多糖的浸出已比較充分,繼續(xù)增加提取用水,含量沒有多大的變化,反而增加了升溫的時間。此外,提取用水的增加會增加其他組分(如蛋白質(zhì))的溶出,對于多糖的溶解可能存在一定影響。同時,在不同的料液比下,靈芝多糖提取液中還原糖含量變化不明顯,說明料液比對靈芝多糖的降解影響不顯著。因此,選擇1∶50g/mL作為靈芝多糖提取的較佳料液比。

        2.3 提取時間對靈芝多糖提取的影響

        以料液比1∶50 g/mL、提取溫度120 ℃,考察20、30、40、50和60 min的提取時間對靈芝多糖提取的影響,結(jié)果見圖3。

        圖3 提取時間對靈芝多糖提取的影響Fig.3 Effect of time on extraction efficiency of polysaccharides from Ganoderma lucidum

        由圖3可以看出,在20~60 min內(nèi),靈芝多糖提取液中還原糖含量隨著時間的增加不斷升高,呈線性增長;而總糖含量的增長在30 min后趨于平緩。這可能是因為高壓熱水提取靈芝多糖是一個固液非均相的提取過程,需要一定的時間才能使多糖從固體內(nèi)部傳遞到液體,因此總糖含量隨時間的增加而增大;而在30 min后,固液體中多糖達到平衡,繼續(xù)增加提取時間對總糖含量的影響較小,但時間的延長存在多糖的分解。同時,在20~40 min內(nèi),靈芝多糖提取液對DPPH自由基清除率不斷增加,而在40 min后,靈芝多糖提取液對DPPH自由基清除作用不斷下降。因此,選擇30 min作為較佳的提取時間。

        2.4 正交試驗

        在單因素實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上,選用L9(34)正交表,對高壓熱水提取靈芝多糖提取工藝進行正交試驗優(yōu)化,實驗結(jié)果和分析結(jié)果見表1。

        表1 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

        從表1中極差分析結(jié)果可以看出,3個因素對靈芝多糖提取率的影響由大到小依次為料液比(B)、提取時間(C)和提取溫度(A)。在實驗設(shè)計范圍內(nèi),優(yōu)化得到高壓熱水提取靈芝多糖的較佳條件為A2B2C2,即提取溫度為125 ℃、料液比1∶50 g/mL、提取時間30 min。該組合沒有在正交試驗的9個組合中出現(xiàn),驗證實驗結(jié)果表明,在此條件下高壓熱水提取靈芝多糖的提取率為4.54%。相比較常壓熱水(在料液比1∶50 g/mL、提取溫度95 ℃、提取時間30 min條件下,多糖的提取率為3.01%)來說,高壓熱水提取靈芝多糖的提取率提高了50%以上。

        2.5 提取次數(shù)對靈芝多糖提取的影響

        以提取溫度為125 ℃、料液比1∶50 g/mL、提取時間30 min,考察高壓熱水提取次數(shù)對靈芝多糖提取的影響,結(jié)果見表2。

        從表2可以看出,隨著抽提次數(shù)的增加,多糖的提取率越來越低,第一次提取的多糖占4次提取多糖總量的53.47%,2次提取的多糖含量可達6.78%,占總提取量的80%以上,3次提取的多糖占總提取量的93%以上,因此可見在高壓熱水條件下,靈芝子實體多糖提取只需提取 2~3 次,即可提取出絕大部分多糖。

        表2 提取次數(shù)對靈芝多糖提取率的影響

        2.6 靈芝多糖對DPPH自由基清除率的影響

        靈芝多糖對DPPH自由基的清除作用如圖4。

        圖4 靈芝多糖對DPPH·消除率的影響Fig.4 Effect of polysaccharides from Ganoderma lucidum on scavenging activity of DPPH radicals

        由圖4可知,靈芝多糖具有清除DPPH自由基的能力,而且清除能力隨多糖濃度的增加逐漸增強,表明靈芝多糖對DPPH自由基的清除率與多糖含量存在量效關(guān)系。

        3 結(jié) 論

        靈芝子實體細胞的細胞壁具有細胞壁是由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素組成的致密結(jié)構(gòu),通過高壓熱水提取,可以提高水對細胞穿透力和細胞破壞力,能有效加快多糖的釋放。以靈芝子實體超微粉為原料,研究了在高壓熱水條件下提取溫度、時間和料液比對靈芝多糖的提取以及提取液對DPPH自由基清除率的影響。結(jié)果顯示,在一定范圍內(nèi),靈芝多糖提取率隨著提取溫度升高、時間增加和料液比增大而增大,但高溫高壓也會促進靈芝多糖分解,影響其對DPPH自由基清除作用。通過正交試驗優(yōu)化,得到靈芝多糖高壓熱水提取優(yōu)化條件為料液比1∶50g/mL、提取溫度125 ℃、提取時間為30 min,在此條件下,一次高壓熱水提取靈芝多糖提取率達到4.54%,相較于常壓熱水提取法來說,多糖提取率顯著提高??寡趸瘜嶒灲Y(jié)果表明,靈芝多糖對 DPPH 自由基有一定的清除能力,且與多糖質(zhì)量濃度存在一定的量效關(guān)系。

        參考文獻:

        [1] ZHOU X W, SU K Q, ZHANG Y M. Applied modern biotechnology for cultivation ofGanodermaand development of their products[J]. Applied Microbiology & Biotechno-logy, 2012, 93(3):941-963.

        [2] 毛健, 馬海樂. 靈芝多糖的研究進展[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(1):295-299.

        MAO J, MA H L. Research progress ofGanodermalucidumpolysaccharides[J]. Food Science, 2010, 31(1):295-299.

        [3] ZHANG J, CHEN J M, WANG X X, et al. Inhibitor or promoter? The performance of polysaccharides fromGanodermalucidumon human tumor cells with different p53 statuses[J]. Food & Function, 2016, 7(4):1872-1875.

        [4] SLIVA D, LOGANATHAN J, JIANG J, et al. MushroomGanodermalucidumprevents colitis-associated carcinogenesis in mice[J]. Plos One, 2012, 7(10):e47873.

        [5] WANG J, YUAN Y, YUE T. Immunostimulatory activities of β-d-glucan fromGanodermalucidum[J]. Carbohydrate Polymers, 2014, 102:47-54.

        [6] SHI M, ZHANG Z, YANG Y. Antioxidant and immunoregulatory activity ofGanodermalucidumpolysaccharide (GLP)[J]. Carbohydrate Polymers, 2013, 95(1):200-206.

        [7] 白鳳岐, 牟建樓, 陳志周,等. 水提法提取靈芝多糖及其體外抗氧化研究[J]. 食品工業(yè), 2015(3):143-146.

        BAI F Q, MOU J L, CHEN Z Z, et al. Study on extraction and antioxidant activity ofGanodermalucidumpolysaccharides by water method[J]. Food Industry, 2015(3):143-146.

        [8] SHI M, YANG Y, HU X, et al. Effect of ultrasonic extraction conditions on antioxidative and immunomodulatory activities of aGanodermalucidumpolysaccharide originated from fermented soybean curd residue[J]. Food Chemistry, 2014, 155(10):50-56.

        [9] 張妙彬, 潘麗晶, 陳繼敏,等. 靈芝多糖的微波法提取及抗氧化活性研究[J]. 中國食用菌, 2013, 32(4):35-37.

        ZHANG M B, PAN L J, CHEN J M, et al. Study on extraction and antioxidant activity ofGanodermalucidumpolysaccharides by microwave method[J]. Edible Fungi of China, 2013, 32(4):35-37.

        [10] 董玉瑋, 苗敬芝, 曹澤虹,等. 酶法提取靈芝多糖的工藝研究[J]. 食品科技, 2009(6):217-220.

        DONG Y W, MIAO J Z, CAO Z H, et al. Extraction of polysaccharide inGanodermalucidumby enzymatic method[J]. Food Science and Technology, 2009(6):217-220.

        [11] 黃生權(quán), 李進偉, 寧正祥. 微波-超聲協(xié)同輔助提取靈芝多糖工藝[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(16):52-55.

        HUANG S Q, LI J W, NING Z X. Ultrasonic-microwave synergistic extraction of polysaccharides from cultivatedGanodermalucidum[J]. Food Science, 2010, 31(16):52-55.

        [12] 王波. 靈芝多糖提取、分離純化、表征及體外抗氧化活性探究[D]. 鄭州: 鄭州大學(xué), 2016.

        WANG B. Extraction, isolation, purification, characteri-zation andinvitroantioxidant activity of polysaccharide fromGanodermalucidum[D]. Zheng Zhou: Zhengzhou University, 2016.

        [13] MATSUNAGA Y, WAHYUDIONO, MACHMUDAH S, et al. Hot compressed water extraction of polysaccharides fromGanodermalucidum, using a semibatch reactor[J]. Asia-Pacific Journal of Chemical Engineering, 2014, 9(1):125-133.

        [14] 張青, 潘英, 童本定. 3,5-二硝基水楊酸法測定靈芝多糖的含量[J]. 中國老年保健醫(yī)學(xué), 2013, 11(5):7-9.

        ZHANG Q, PAN Y, TONG B D, et al. Determination ofGanodermalucidumpolysaccharide content by 3,5-dinitrosalicylic acid method[J]. Chinese Journal of Geriatric Care, 2013, 11(5):7-9.

        [15] 郭曉蕾, 朱思潮, 翟旭峰,等. 硫酸蒽酮法與硫酸苯酚法測定靈芝多糖含量比較[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2010(9):2000-2002.

        GUO X L, ZHU S C, ZHAI X F, et al. Comparison of methods in determination of polysaccharide inGanodermalucidum[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2010(9):2000-2002.

        [16] 朱尚彬, 聶少平, 朱盼,等. 黑靈芝不同溶劑提取物抗氧化活性比較研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(17):98-101.

        ZHU S B, NIE S P, ZHU P, et al. Comparative study of antioxidant activity of different solvent extracts ofGanodermalucidum[J]. Food Science, 2009, 30(17):98-101.

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