馬金丹，黃 艷，顧沐恩，方臻臻，馬 喆，趙 琛，殷之光*

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203；2.上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所，上海 200030）

世界衛(wèi)生組織（WHO）明確強(qiáng)調(diào)：健康壽命比壽命更重要，最終目的是提高人口的健康壽命[1-3]。本課題組以往開(kāi)展了有關(guān)針灸延緩衰老的臨床研究，結(jié)果顯示，艾灸可明顯改善老年人衰老相關(guān)癥狀，增強(qiáng)老年人外周血單個(gè)核細(xì)胞Bcl-2、PKC 表達(dá)[4]，并從衰老相關(guān)基因篩選、衰老信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控等方面研究艾灸抗衰老的調(diào)控機(jī)制[5]。但衰老的發(fā)生發(fā)展是機(jī)體功能狀態(tài)的時(shí)空漸變，隨時(shí)間的漸進(jìn)性，衰老的進(jìn)程由密變疏逐步弱化而衰退[6]。因此，現(xiàn)階段關(guān)于抗衰老的研究熱點(diǎn)已從方法與手段過(guò)渡到時(shí)序方案。本研究基于自然衰老大鼠模型，通過(guò)檢測(cè)大鼠血清MDA含量變化，觀察不同時(shí)序艾灸腎俞穴延緩衰老效應(yīng)，并探索長(zhǎng)期艾灸腎俞穴的安全性，為進(jìn)一步闡明衰老的發(fā)病機(jī)制及不同時(shí)機(jī)艾灸延緩衰老的作用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 選用12月齡，體質(zhì)量（600±20）g，雄性清潔級(jí)SD大鼠40只（上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心）；溫度22～27 ℃，相對(duì)濕度為50%～70%。所有大鼠自由飲水進(jìn)食，進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，1周后如無(wú)不良反應(yīng)，飲食飲水正常，則可納入正式實(shí)驗(yàn)。

1.2 試劑與儀器 特制細(xì)艾條（南陽(yáng)漢醫(yī)艾絨有限責(zé)任公司）。TBA試劑盒（南京建成生物研究所）；ELISA試劑盒（上海源葉生物有限公司）。

1.3 分組與治療

1.3.1 分組 40只大鼠隨機(jī)分為4組，分別為24月齡對(duì)照組、艾灸1組、艾灸2組、18月齡對(duì)照組，每組10只。

1.3.2 治療 18月齡對(duì)照組（n = 10）：飼養(yǎng)至18月齡，不進(jìn)行治療。24月齡對(duì)照組（n = 10）：飼養(yǎng)至24月齡，不進(jìn)行治療。艾灸1組（n = 10）：從大鼠12月齡開(kāi)始艾灸腎俞穴（穴位定位參照李忠仁主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003），采用直徑5 mm小艾條點(diǎn)燃后在距離穴位2 cm處施灸，兩側(cè)腎俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至18月齡，再飼養(yǎng)至24月齡。艾灸2組（n = 10）：從大鼠18月齡開(kāi)始艾灸腎俞穴，采用直徑5 mm小艾條點(diǎn)燃后在距離穴位2 cm處施灸，兩側(cè)腎俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至24月齡。

1.4 標(biāo)本采集 18月齡對(duì)照組大鼠于飼養(yǎng)至18月齡時(shí)處死取材，其余4組均在24月齡時(shí)處死取材。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠24 h禁食、不禁水。2%戊巴比妥鈉50 mg/kg行腹腔注射，待大鼠麻醉后，取腹主動(dòng)脈血4～5 mL，離心制備血清待檢。

1.5 指標(biāo)檢測(cè) 采用TBA方法檢測(cè)各組大鼠血清MDA含量變化。采用ELISA方法檢測(cè)各組大鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）以及血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示；不服從正態(tài)分布，則以中位數(shù)（四分位間距）M（Q）表示。數(shù)據(jù)方差齊時(shí)，采用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差法（LSD）；方差不齊時(shí)采用Games-Howell比較組間差異。數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)，兩兩比較則采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α = 0.05。

2 結(jié)果

2.1 最終納入實(shí)驗(yàn)各組大鼠數(shù)量 18月齡對(duì)照組大鼠沒(méi)有出現(xiàn)死亡情況，24月齡對(duì)照組大鼠死亡2只、艾灸1組大鼠死亡2只，艾灸2組死亡2只，故最終納入實(shí)驗(yàn)的為18月齡對(duì)照組（n = 10）、24月齡對(duì)照組（n = 8）、艾灸1組（n = 8）、艾灸2組（n = 8）。2.2 大鼠血清MDA含量的比較 見(jiàn)表1。

表1 大鼠血清MDA含量比較（） nmol/mL

表1 大鼠血清MDA含量比較（） nmol/mL

注：與18月齡對(duì)照組比較，## P＜0.01；與24月齡對(duì)照組比較，△△ P＜0.01

組 別 n MDA 18月齡對(duì)照組 10 2.09±0.85 24月齡對(duì)照組 8 4.36±0.55##艾灸1組 8 2.46±0.77△△艾灸2組 8 2.12±0.67△△

2.3 各組大鼠血清AST、ALT水平比較 見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清ALT、AST水平比較 U/L

2.4 各組大鼠血清CRE、BUN水平比較 見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血清CRE、BUN水平比較（x±s）

3 討論

腎俞穴出自《靈樞·背腧》，別名少陰俞，與腎相應(yīng)，屬足太陽(yáng)膀胱經(jīng)。腎俞穴是腎中精氣輸注的部位，中醫(yī)認(rèn)為，通過(guò)刺激腎俞穴能夠益精補(bǔ)腎、培補(bǔ)腎元，又可以緩解腰肌勞損[7-8]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[9-10]認(rèn)為，刺激腎俞穴可以通過(guò)抗氧化、提高免疫力、改善神經(jīng)內(nèi)分泌等途徑達(dá)到延緩衰老的目的。

抗衰老治療已經(jīng)廣泛并運(yùn)用在人體衰老的進(jìn)程中，研究[11-12]認(rèn)為，對(duì)于不同時(shí)間艾灸干預(yù)的對(duì)衰老的干預(yù)效應(yīng)不同，針灸在不同時(shí)間窗的介入對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)存在差異。本研究中，艾灸1組從大鼠12月齡開(kāi)始艾灸，灸至18月齡，灸時(shí)半年，即從大鼠壯年期開(kāi)始灸至初老期；艾灸2組從大鼠18月齡灸至24月齡，灸時(shí)也為半年，即從大鼠初老期灸至衰老期，比較艾灸介入時(shí)間的不同。結(jié)果顯示，衰老大鼠血清MDA水平升高，而2組艾灸組對(duì)MDA的影響效應(yīng)相當(dāng)，可以推測(cè)，對(duì)于氧化應(yīng)激所致衰老，艾灸1組與艾灸2組的時(shí)間對(duì)其影響并無(wú)明顯差別。而對(duì)BUN的調(diào)節(jié)，艾灸2組的調(diào)節(jié)作用更明顯，這也可能與艾灸1組介入時(shí)間較早，其效應(yīng)未能持續(xù)至24月齡有關(guān)。

MDA的水平高低可以直接反應(yīng)出機(jī)體氧自由基水平，以及過(guò)氧化反應(yīng)的強(qiáng)度和速率，是反映因過(guò)氧化導(dǎo)致機(jī)體組織和細(xì)胞損傷程度的重要指標(biāo)[13]。因此MDA作為氧化應(yīng)激系統(tǒng)的重要指標(biāo)被廣泛研究[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，衰老大鼠血清MDA水平隨著組織的衰老而逐漸升高，艾灸腎俞穴可以通過(guò)降低自然衰老大鼠腎血清MDA水平，產(chǎn)生抗衰老作用。本研究結(jié)果顯示，各組大鼠血清MDA的表達(dá)：與18月齡對(duì)照組比較，24月齡對(duì)照組大鼠血清MDA含量明顯升高，與24月齡對(duì)照組比較，艾灸1組、艾灸2組血清MDA水平均有明顯降低（P＜0.01），但不同介入時(shí)間比較，艾灸1組與艾灸2組并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究結(jié)果表明，與18月齡對(duì)照組比較，24月齡對(duì)照組大鼠血清ALT、BUN含量明顯升高，而艾灸后艾灸1組、艾灸2組血清ALT及AST表達(dá)與24月齡對(duì)照組比較無(wú)差異，艾灸2組大鼠血清BUN水平降低。提示了本研究所采用的艾灸療程與劑量，對(duì)自然衰老大鼠肝功能無(wú)損害，并且對(duì)其腎功能有一定的改善作用。這也與祖國(guó)醫(yī)學(xué)理論中的“治未病”概念相符合[15]。

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