李 芳，張仙瓊，何小華，王韶輝，羅 雄

（ 1.成都蜀星飼料有限公司，成都 611633；2.成都威艾盛動(dòng)物營養(yǎng)有限公司，成都 611633）

鎂是細(xì)胞內(nèi)的主要陽離子，作為酶促反應(yīng)的輔助因子參與機(jī)體內(nèi)主要代謝途徑，細(xì)胞外的鎂對動(dòng)物機(jī)體正常的神經(jīng)傳導(dǎo)、肌肉收縮和骨骼礦物元素沉積至關(guān)重要。醫(yī)藥上硫酸鎂常作為瀉藥和抗驚厥藥被廣泛應(yīng)用。在飼料添加劑行業(yè)中硫酸鎂是最為重要的無機(jī)鎂源之一，鎂缺乏會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物生長受阻、神經(jīng)過敏、驚厥甚至死亡。飼料添加劑硫酸鎂的原料及生產(chǎn)工藝決定了產(chǎn)品中會(huì)殘留、攜帶一定量的有毒有害物質(zhì)，例如砷、鉛、汞等。為更好的監(jiān)控產(chǎn)品安全，本文根據(jù)GB32449-2015《飼料添加劑硫酸鎂》中規(guī)定的砷的檢測方法，即《飼料中總砷的測定》GB/T13079-2006中規(guī)定兩種砷的檢測方法進(jìn)行比較驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)試劑

試劑均為分析純，特殊注明除外。水全部使用二級水。鹽酸：分析純。碘化鉀溶液：稱取15g溶于水，定容至100 mL。現(xiàn)用現(xiàn)配。無砷鋅粒：3.0±0.2 mm。鹽酸溶液：1∶1。鹽酸（優(yōu)級純）溶液：5∶95。氫氧化鈉（優(yōu)級純）溶液：5g·L-1。硼氫化鉀溶液：20 g·L-1。稱取20 g硼氫化鉀，溶于1 000 mL 5 g·L-1的氫氧化鈉溶液中。硫脲-抗壞血酸混合溶液：稱取10 g硫脲，加80 mL水溶解，加入10 g抗壞血酸溶解后用水定容至100 mL。酸性氯化亞錫溶液：400 g·L-1。二乙胺基二硫代甲酸銀（Ag-DDTC）-三乙胺-三氯甲烷吸收溶液：2.5 g·L-1。乙酸鉛棉花。

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅰ：1 mL溶液含砷（As）0.010 mg。移取1 mL砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mg·mL-1）置于100 mL容量瓶中，用水定容，搖勻即可?，F(xiàn)用現(xiàn)配。

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅱ：1 mL溶液含砷（As）0.1 μg。移取1 mL砷標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅰ，置于100 mL容量瓶中，定容，搖勻。該溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

砷標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅲ：1 mL溶液含砷（As）1 μg。移取10 mL砷標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅰ，置于100 mL容量瓶中，用水定容，搖勻即可?，F(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 試驗(yàn)儀器

砷化氫發(fā)生及吸收裝置。北京海光儀器公司AFS-3000半自動(dòng)雙道原子熒光光度計(jì)。該儀器對砷的檢出限為＜0.1 μg·L-1精密度RSD＜0.7%。上海分析儀器廠751-GW紫外分光光度計(jì)。

1.3 樣品來源

成都蜀星飼料有限公司原料留樣。

1.4 試驗(yàn)方法及步驟

1.4.1 銀鹽法

銀鹽法原理是樣品加酸溶解后，使砷呈離子狀態(tài)，經(jīng)碘化鉀、氯化亞錫將高價(jià)砷還原為三價(jià)砷，然后被鋅粒和酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫還原為砷化氫，在密閉裝置中，被二乙胺基二硫代甲酸銀的三氯甲烷溶液吸收，形成銀溶膠，其顏色與砷含量正相關(guān)，用分光光度計(jì)比色測定。具體步驟參考《飼料中總砷的測定》GB/T13079-2006。

1.3.2 氫化物原子熒光光度法

該方法的原理是樣品加酸溶解后，加入硫脲與抗壞血酸混合溶液將砷預(yù)還原為三價(jià)砷，加入硼氫化鉀使其生成砷化氫，由氬氣載入石英原子化器中分解為原子態(tài)砷，其在砷空心陰極燈的發(fā)射光激發(fā)下產(chǎn)生原子熒光，其熒光強(qiáng)度與砷含量正相關(guān)，參照標(biāo)準(zhǔn)系列確定樣品中砷含量。具體步驟參考《飼料中總砷的測定》GB/T13079-2006和文獻(xiàn)報(bào)道以及AFS3000說明書中規(guī)定的具體要求。此外，還借鑒了《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑硫酸銅》GB29210-2012和《電鍍用硫酸銅》HG/T3592-2010中規(guī)定砷的檢測方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 銀鹽法

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制參照GB/T13079-2006《飼料中總砷的測定》中規(guī)定的方法完成，結(jié)果見表1和圖1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)液檢測結(jié)果

圖1 銀鹽法標(biāo)準(zhǔn)曲線

由表1和圖1可知，銀鹽法檢測砷含量為0.00～6.00 μg時(shí)，其吸光度與含量呈良好線性關(guān)系，r=0.999 9，回歸方程為y=0.035x-0.000 6。

2.1.2 樣品檢測結(jié)果

4個(gè)樣品，分別做兩個(gè)平行，檢測結(jié)果見表2。

由表2可知，銀鹽法檢測樣品的平行間絕對差極小，重復(fù)性良好，符合檢測結(jié)果規(guī)定。

2.1.3 樣品加標(biāo)回收率

兩個(gè)樣品分別稱取3個(gè)平行樣，其中兩個(gè)分別加入砷2 μg，其余步驟同樣品檢測。重新做標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2，檢測結(jié)果見表3。

圖2再次驗(yàn)證了銀鹽法的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。由表3可知，銀鹽法的回收率差異較大，其原因還不得而知，需進(jìn)一步探究。

表2 樣品檢測結(jié)果

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 氫化物原子熒光法

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制參照GB/T13079-2006《飼料中總砷的測定》中規(guī)定的方法完成，結(jié)果見表4和圖3。

由表4和圖3可知，采用氫化物原子熒光法檢測砷含量，砷濃度在0～8 ng·mL-1時(shí)，其熒光強(qiáng)度與濃度呈良好線性關(guān)系，r=0.999 9，回歸方程為y=158.0x+7.323。

表3 銀鹽法回收率結(jié)果

表4 原子熒光法標(biāo)準(zhǔn)曲線熒光度結(jié)果

2.2.2 樣品檢測以及回收率結(jié)果

4個(gè)樣品，分別做3個(gè)平行，其中5、6號樣品增加兩份做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，即分別加入2 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1 μg·mL-1），檢測結(jié)果見表5。

圖3 氫化物原子熒光法標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

由表5可知，氫化物原子熒光法檢測平行樣RSD極小，表明該方法的精確度好；加標(biāo)回收率94.34%～97.98%，表明該方法的準(zhǔn)確度較好。

表5 氫化物原子熒光法檢測結(jié)果與回收率

3 結(jié)論

3.1 銀鹽法

通過試驗(yàn)表明銀鹽法具有線性良好、線性范圍寬、檢出限良好等特點(diǎn)，可以避免砷斑法目測時(shí)人為誤差及砷斑法對于時(shí)間的敏感性；但該方法操作步驟較為復(fù)雜，對環(huán)境條件要求較高，試驗(yàn)過程中使用的三氯甲烷和反應(yīng)生成的砷化氫均屬于有毒有害物質(zhì)，因而試驗(yàn)全程需在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，操作極為不便，且對試驗(yàn)人員身體健康存在較大威脅。

3.2 氫化物原子熒光法

試驗(yàn)表明氫化物原子熒光法具有線性極佳、加標(biāo)回收率良好、檢出限量好且極低等特點(diǎn)，表明該方法的準(zhǔn)確度與精確度很高。此外，大量文獻(xiàn)報(bào)道表明氫化物原子熒光法簡化了砷測定步驟，縮短了檢驗(yàn)時(shí)間，具有靈敏度高，穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)[1-2]。氫化物原子熒光法試驗(yàn)過程中無需使用三氯甲烷，且無易揮發(fā)的砷化氫等有毒有害物質(zhì)生成，該方法更加環(huán)保綠色安全，對檢驗(yàn)員有較好的保護(hù)作用。

4 注意事項(xiàng)

4.1 銀鹽法

銀鹽法容易受到溫度、光照等自然條件干擾，另外砷化氫發(fā)生器的氣密性以及乙酸鉛棉花塞的松緊都有可能影響到檢測結(jié)果，因而該方法對試驗(yàn)操作人員素質(zhì)要求較高[3-4]。為了保證銀鹽法精準(zhǔn)度，試驗(yàn)過程中需注意以下事項(xiàng)：試驗(yàn)環(huán)境溫度應(yīng)盡可能保持一致，重復(fù)試驗(yàn)間溫差不宜過大；砷化氫與二乙胺基二硫代甲酸銀生成銀膠的過程應(yīng)避光進(jìn)行；反應(yīng)完成后應(yīng)盡快檢測；試驗(yàn)所用器皿（比色皿除外）經(jīng)常清洗后，均應(yīng)用濃硫酸溶液煮沸＞10 min，然后用重蒸水浸泡清洗＞3遍；比色皿經(jīng)嚴(yán)格清洗后用乙醇浸泡超聲10 min，用重蒸水沖洗3～5遍。

4.2 氫化物原子熒光法

由于氫化物原子熒光法檢出限極低，因此該方法對儀器及所用器皿的清潔度要求更高，所用儀器管道和器皿每次使用前都必須用5%～10%的稀硝酸浸泡＞24 h，然后超聲輔助清洗30 min，最后用重蒸水浸泡清洗3～5遍。另外，該方法中所用試劑最好是優(yōu)級純，且所用試劑必須現(xiàn)用現(xiàn)配。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 吳海坤,喇翠玲,趙元博,等.尿砷測定試管快速消解氫化物原子熒光法的建立及評價(jià)[J].中華地方病學(xué)雜志,2017,36（4）:293-296.

[2]劉珍香.氫化物原子熒光法測定廢水中砷的實(shí)驗(yàn)研究[J].科技與創(chuàng)新,2016（15）:99-100.

[3] 張艷麗,李勇,孫玉國.銀鹽法檢測水質(zhì)、土壤中總砷應(yīng)注意的問題[J].河南農(nóng)業(yè),2017（4）:26.

[4]張衛(wèi)國.銀鹽法測定飲用水中砷的影響因素探討[J].微量元素與健康研究,2010,27（3）:45-46.