肖煥星，郭彥輝，王 波，賴慶光

（上海海利生物技術(shù)股份有限公司，上海 201403）

豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)是引起豬圓環(huán)病毒病的首要病原，它主要侵襲豬的免疫系統(tǒng)，干擾和破壞機體對抗疾病時免疫抗體的產(chǎn)生和維持，致使抵抗力下降，從而容易繼發(fā)或并發(fā)其他疾病，可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、斷奶豬和肥育豬的呼吸道疾?。≒RDC）、母豬繁殖障礙（RF）等疾病[1]。豬圓環(huán)病毒2型遍布全球，給世界各國的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[2]。目前，豬場普遍采用免疫豬圓環(huán)病毒2型疫苗來防控豬圓環(huán)病毒病，并取得了令人滿意的效果[3]。盡管圓環(huán)病毒疫苗供應(yīng)商及研發(fā)單位都提供了疫苗免疫評價方法（免疫陰性豬后：檢測血清抗體水平，相對日增重，圓環(huán)病毒載量，攻毒試驗等），但在豬場復(fù)雜的背景條件下，如何來簡便、科學(xué)評價圓環(huán)疫苗的免疫效果，成為各養(yǎng)殖業(yè)主最為關(guān)心的問題。本試驗通過比較豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗免疫組及非免疫組仔豬在10周齡時的平均增重、14周齡成活率及血清抗體的變化規(guī)律，綜合評估疫苗的免疫效果，希望能對豬場在臨床評價圓環(huán)疫苗的免疫效果及在選擇適合本場的疫苗時提供參考。

1　試驗方法

1.1 試驗動物及分組

試驗豬由河北某2000頭種豬場提供，該場未免疫圓環(huán)病毒疫苗但種豬及肥豬血清抗體均為陽性。試驗隨機選擇15窩×4頭/窩（14±2 ）日齡的健康仔豬60頭，同窩仔豬隨機平均分配到試驗組及對照組，每組30頭并做好標(biāo)識。

1.2 疫苗及檢測試劑盒

豬圓環(huán)病毒滅活疫苗（商品名：圓畢凈，規(guī)格100 mL/瓶，批號：20170105）由上海海利生物技術(shù)股份有限公司提供。豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒由韓國金諾提供。

表1　試驗動物處理方案

表2　前腔靜脈采血設(shè)計

表3　各組試驗豬2～14周齡成活率

表4　各組試驗豬2～10周齡個體平均增重

圖1　各組不同周齡血清ELISA抗體水平S/P

1.3 試驗動物處理及血清樣品采集

試驗動物按該豬場常規(guī)的管理方式進(jìn)行飼養(yǎng)，按表1進(jìn)行免疫處理、稱重及統(tǒng)計死亡數(shù)。

試驗動物血清樣品采集按表2方案執(zhí)行，前腔靜脈采血3～5 mL/頭，將析出的血清轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管備用。

1.4 血清抗體檢測

將采集的血清樣品按試劑盒公司提供的操作規(guī)程做ELISA 抗體檢測，抗體水平用S/P值表示。判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品S/P值≥0.4判定為陽性，樣品S/P值＜0.3判定為陰性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

增重數(shù)據(jù)、抗體水平用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SAS軟件進(jìn)行顯著性分析。

2　結(jié)果與分析

2.1 各組死亡率對比分析

試驗結(jié)束時試驗組的成活率為90.0%高于對照組的成活率83.3%，盡管差異不顯著（P=0.83，P＞0.05），但在一定程度上仍能表明圓環(huán)病毒2型滅活疫苗的免疫改善了豬場的臨床癥狀，這一點與臨床上豬群的整齊度及健康度提高相吻合。

2.2 各組平均增重對比分析

從表4可以看出，10周齡試驗豬轉(zhuǎn)欄時的平均增重試驗組（22.91 kg）顯著高于對照組（19.04 kg），表明圓環(huán)病毒2型滅活疫苗免疫豬群能有效抵抗田間野毒的進(jìn)攻，使免疫組的仔豬生長潛能得以充分發(fā)揮；而對照組仔豬因受圓環(huán)病毒感染的影響造成生長緩慢。

2.3 各組血清ELISA抗體變化規(guī)律與分析

通過圖1我們可以看出，對照組仔豬母源抗體從2周開始下降，6到8周降到最低，10周齡時因野毒感染ELISA抗體水平再次上升，并達(dá)到異常高的水平S/P值達(dá)到2.7；試驗組仔豬分別于2周、5周齡免疫豬圓環(huán)病毒2型滅活苗后，抗體水平的走勢較對照組發(fā)生變化，即：2周齡到6周齡時母源抗體迅速下降，而自身抗體未完全建立，所以抗體水平呈稍下降的趨勢，6周齡后伴隨主動免疫抗體水平的升高抗體水平逐步上升并維持在2.0左右，呈長尾的L型。從這種抗體水平的變化趨勢可以看出疫苗免疫有效阻止了野毒感染過程。

3　總結(jié)與討論

1）圓環(huán)病毒2型感染豬群后，在不同豬場不同的背景條件下，表現(xiàn)不同的臨床癥狀，對于臨床癥狀明顯的群體，通過臨床癥狀的改善（如：成活率、發(fā)病率等），來評價疫苗免疫后的效果是可行的。

2）除了臨床癥狀的改善外，圓環(huán)疫苗的免疫效果會最終體現(xiàn)在生產(chǎn)成績的提高方面，所以通過評價生產(chǎn)成績的表現(xiàn)來間接評估疫苗的免疫效果，成為多數(shù)豬場認(rèn)可的方法。

3）因為豬場背景復(fù)雜，許多因素及病原都會造成類似圓環(huán)病毒病的臨床表現(xiàn)，如：高致病性豬藍(lán)耳病、新報導(dǎo)的圓環(huán)病毒3型[4]，這些因素所導(dǎo)致臨床損失不會因為豬圓環(huán)病毒2型疫苗接種得到改善。因此，特異性的血清學(xué)檢測是必不可少的，在臨床上使用最多的血清學(xué)檢測方法是ELISA方法。在使用ELISA方法評估圓環(huán)疫苗免疫效果時采樣時間點至關(guān)重要，建議采集7～8周齡的樣品，因為此時母源抗體已降至最低點，而野毒抗體還沒有起來，此時的ELISA抗體水平和疫苗免疫的相關(guān)性最強。

綜上所述，關(guān)于圓環(huán)病毒2型疫苗在臨床上免疫效果的評估，要結(jié)合臨床癥狀、生產(chǎn)成績及血清抗體水平進(jìn)行綜合分析。

[1] 呂惠序.豬圓環(huán)病毒2 型的診斷與綜合防制[J].養(yǎng)豬，2014（3）：113-115.

[2] GILLESPIE J， OPRIESSNIG T，MENG XJ， et al. Porcine circovirus type2and porcine circovirusassociated disease[J]. Vet Intern Med，2009，23：1151-1163.

[3] 邢剛，馬濤，邱小伙，等. 商品化豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗臨床免疫效果比較[C].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集，2013：406-410.

[4] SHAO-LUN ZHAI， XIA ZHOU，HE ZHANG，et al. Comparative epidemiology of porcine circovirus type3in pigs with different clinical presentations[J]. Virology Journal，(2017)14：222.