王靜，王亞明，田云霄，吳士茜，孫穎，袁艷龍，張桂東，王海紅，王杰，霍雙

（邯鄲市中心醫(yī)院a.病理科，b.普外一科，c.普外科，d.泌尿外科，e.科教科，河北 邯鄲 056001）

在世界范圍內(nèi)，胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，調(diào)查顯示其發(fā)病率居第4位，病死率位列癌癥死因的第2位［1］，在中國等發(fā)展中國家約有70%的胃癌新發(fā)病例和死亡病例［2］。臨床資料顯示，胃癌的早期確診率很低，大部分患者在診時已處于中晚期，近80%的患者存在局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示探尋胃癌特異性的血清腫瘤標(biāo)志具有重要臨床價值。E-鈣黏蛋白是一種介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞間黏附的鈣依賴性跨膜蛋白，黏附下降是引起腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素之一，提示其有作為胃癌早期標(biāo)志的可能［3］。膜聯(lián)蛋白A7屬膜聯(lián)蛋白家族成員，具有典型的磷脂結(jié)合特性、Ca2＋通道形成特性，在細(xì)胞生長調(diào)節(jié)、分化、凋亡、膜轉(zhuǎn)運(yùn)及鈣離子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面起到重要作用［4-5］。本研究通過檢測96例胃癌患者及60例正常人血清中E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平，旨在分析其與胃癌臨床病理特征間的相關(guān)性以及對胃癌預(yù)后評估臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取邯鄲市中心醫(yī)院腫瘤科2014年5月—2015年1月收治并確診的胃癌患者96例，其中男性61例，女性35例；年齡54～71歲，Ⅰ期17例，Ⅱ期20例，Ⅲ期40例，Ⅳ期19例。Ⅰ期和Ⅱ期為胃癌早期組，Ⅲ期和Ⅳ期為胃癌晚期組。收集同期在邯鄲市中心醫(yī)院體檢健康者60例作為對照組，其中男性39例，女性21例；年齡50～75歲，平均（64.17±8.95）歲。兩組基本資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 患者采取胃鏡和病理檢查進(jìn)行確診。胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（2002年）相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定［6］。

1.3 入選標(biāo)準(zhǔn) （1）符合胃癌相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；（2）年齡20～75歲；（3）首次確診者；（4）進(jìn)行本研究前未接受放化療等相關(guān)治療；（5）患者或患者近親屬知情，且簽署知情協(xié)議書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）伴有心、腦、肝等臟器嚴(yán)重障礙者；（2）生存期預(yù)計少于1年者；（3）不能配合隨訪者；（4）同時有其他類型腫瘤者。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 指標(biāo)檢測 所有研究對象靜脈血采集均在晨起空腹進(jìn)行，約3 mL，血樣室溫離心，血清置于-70℃下保存。E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7測定采取酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），檢測均使用同一批次試劑。檢測所有患者腫瘤灶直徑。

1.5.2 分析指標(biāo) （1）比較對照組健康體檢者和胃癌組患者血清中E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平；（2）分析血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平與患者的性別、年齡和腫瘤的位置、大小、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的相關(guān)性；（3）隨訪結(jié)果：所有患者予1年化療后隨訪，記錄死亡例數(shù)，比較生存病例和死亡病例在入院時血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量數(shù)據(jù)用表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或t′檢驗(yàn)比較組間差異；計數(shù)資料以頻數(shù)表示，用χ2檢驗(yàn)比較組間差異，所有檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，p＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平比較 與對照組比較，胃癌組患者血清E-鈣黏蛋白顯著降低，膜聯(lián)蛋白A7顯著提高，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.01），見表1。

表1 兩組血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平比較／（μg·L-1

表1 兩組血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平比較／（μg·L-1

組別 例數(shù) E-鈣黏蛋白 膜聯(lián)蛋白A7對照組60 15.13±1.87 10.22±1.31胃癌組 96 2.27±0.29 27.06±2.97 t值52.873 48.515 P值 ＜0.001 ＜0.001

2.2 胃癌臨床病理參數(shù)對血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平的影響 不同年齡、性別以及胃癌的大小、腫瘤位置的患者血清中E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.01），見表2。

2.3 胃癌患者中死亡和存活患者血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平比較 1年期隨訪發(fā)現(xiàn)30例死亡，66例存活。死亡胃癌患者在入院時血清E-鈣黏蛋白水平顯著低于存活患者，膜聯(lián)蛋白A7水平顯著高于存活患者，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.01），見表 3。

表3 胃癌患者血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白 A7水平比較／（μg·L-1

表3 胃癌患者血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白 A7水平比較／（μg·L-1

類別 例數(shù) E-鈣黏蛋白 膜聯(lián)蛋白A7死亡患者30 1.72±0.23 33.41±3.93存活患者 66 2.82±0.39 22.71±2.86 t值17.247 13.388 P值 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

采取腫瘤標(biāo)志物篩查已成為胃癌早期診斷重要方式之一。血清生物學(xué)標(biāo)志物是近年臨床常用于腫瘤診斷的手段，具有敏感性好、操作便捷等優(yōu)點(diǎn)［7］。近年來驗(yàn)證的血清標(biāo)志物如癌胚抗原［8］、多種糖類抗原［9］等。但是以上血清標(biāo)志物僅僅能表示胃癌發(fā)病機(jī)制中的某一方面，要達(dá)到對胃癌進(jìn)行早期更好地、全面地確診，探尋提取新的特異性更高、敏感性更好的胃癌血清標(biāo)志物仍是當(dāng)前臨床面臨的重要科學(xué)問題。

表2 血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性／（μg·L-1）

表2 血清E-鈣黏蛋白和膜聯(lián)蛋白A7水平與胃癌臨床病理特征的相關(guān)性／（μg·L-1）

病理因素 例數(shù) E-鈣黏蛋白 t值P值 膜聯(lián)蛋白A7 t值P值年齡1.534 0.128 0.446 0.657＜60歲 46 2.18±0.60 27.75±6.92≥60歲 50 2.36±0.55 28.37±6.71性別 1.125 0.263 0.044 0.965男61 2.21±0.51 28.09±6.41女35 2.33±0.49 28.03±6.56大小 1.077 0.284 0.553 0.581＜5 cm 40 2.35±0.67 28.44±6.72≥5 cm 56 2.19±0.75 27.68±6.57腫瘤位置 0.473 0.637 0.584 0.561胃體 33 2.30±0.61 27.63±6.81賁門或幽門 63 2.24±0.58 28.49±6.88 TNM分期 14.648 ＜0.001 8.224 ＜0.001Ⅰ＋Ⅱ 37 2.73±0.34 25.18±2.97Ⅲ＋Ⅳ 59 1.81±0.22 30.94±3.55分化程度 13.475 ＜0.001 9.223 ＜0.001高、中分化 36 2.69±0.32 24.90±2.83低分化 60 1.85±0.25 31.22±3.85淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 12.965 ＜0.001 8.370 ＜0.001未見轉(zhuǎn)移 35 2.64±0.30 24.99±3.05有轉(zhuǎn)移61 1.90±0.25 31.13±3.671

E-鈣黏蛋白為Ⅰ型跨膜糖蛋白，存在于人體上皮細(xì)胞膜，作為細(xì)胞黏附分子在維持上皮細(xì)胞極性和細(xì)胞緊密連接中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用［10］。研究發(fā)現(xiàn)E-鈣黏蛋白在人類很多惡性腫瘤中相對于正常組織呈現(xiàn)異常表達(dá)或低表達(dá)，且與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)密切相關(guān)［11］。研究發(fā)現(xiàn)，E-鈣黏蛋白在胃癌組織中呈低表達(dá)，且與腫瘤分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等呈明顯相關(guān)［3，12］。本組結(jié)果顯示，胃癌組患者血清E-鈣黏蛋白顯著降低（p＜0.01），血清E-鈣黏蛋白水平與胃癌患者的年齡、性別以及胃癌的大小、位置差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)（p＜0.01），死亡組患者入院時血清E-鈣黏蛋白水平顯著低于存活組（p＜0.01）。提示了血清E-鈣黏蛋白水平可能與胃癌發(fā)生和病情惡化聯(lián)系密切，有可能成為評估胃癌治療預(yù)后的重要臨床指標(biāo)之一。

膜聯(lián)蛋白A7屬鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，敲除小鼠膜聯(lián)蛋白A7基因后，23%小鼠產(chǎn)生自發(fā)性腫瘤，提示膜聯(lián)蛋白A7基因表達(dá)異常參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程［13］。隨后多項(xiàng)研究證實(shí)，膜聯(lián)蛋白A7在前列腺癌和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中較正常組織中表達(dá)明顯降低［4，13］。其他研究發(fā)現(xiàn)，膜聯(lián)蛋白A7乳腺癌和胃癌組織中表現(xiàn)明顯升高［13-14］。本組結(jié)果顯示，胃癌組患者血清膜聯(lián)蛋白A7水平明顯升高（p＜0.01），血清膜聯(lián)蛋白A7水平與胃癌患者的年齡、性別以及胃癌的大小、位置無明顯相關(guān)（P＞0.05），與胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)（p＜0.01），死亡組患者入院時血清膜聯(lián)蛋白A7水平顯著高于存活組（p＜0.01）。提示了血清膜聯(lián)蛋白A7水平可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展聯(lián)系密切，有望成為評估預(yù)后的重要臨床指標(biāo)之一。

綜上，胃癌患者血清E-鈣黏蛋白水平顯著低于對照組，而膜聯(lián)蛋白A7水平明顯升高，且兩者的血清學(xué)水平與胃癌的臨床病理特征如分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)，可作為胃癌的早期診斷的備選標(biāo)志物之一，有待于大樣本、多中心胃癌血清樣品的驗(yàn)證。

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