趙洪濤，張占云，范立壯

保定市第二醫(yī)院普通外科，河北 保定0710510

胃鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行增殖和表達(dá)后，其產(chǎn)生的遺傳物質(zhì)和代謝產(chǎn)物可以使血液中腫瘤細(xì)胞因子指標(biāo)如hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2等的水平明顯升高；通過(guò)指標(biāo)升高的趨勢(shì)，可以預(yù)測(cè)患者發(fā)生胃鱗狀細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)[1]。胃鏡或手術(shù)切除標(biāo)本的病理學(xué)檢查是診斷胃鱗狀細(xì)胞癌的金標(biāo)準(zhǔn)。癌細(xì)胞的分化程度和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況是預(yù)測(cè)生存期的最重要的影響因素[2]，但大多數(shù)患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)被診斷為晚期胃鱗狀細(xì)胞癌，失去了最佳的治療時(shí)機(jī)，生存期較短。在晚期胃鱗狀細(xì)胞癌中hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的表達(dá)較高；而在早期，則表達(dá)較低[3]。由于胃鱗狀細(xì)胞癌患者的免疫力下降，加之放化療、手術(shù)和侵入性操作的實(shí)施，導(dǎo)致胃部感染，成為致死原因之一[4]。hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2等腫瘤細(xì)胞因子與傳統(tǒng)炎性因子比較，特異度較高，當(dāng)發(fā)生胃鱗狀細(xì)胞癌時(shí)其含量明顯增多[5]。本研究探討了胃鱗狀細(xì)胞癌患者h(yuǎn)TERT、GLⅠ1和GLⅠ2的表達(dá)及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2011年8月至2016年10月在保定市第二醫(yī)院接受治療的80例胃鱗狀細(xì)胞癌患者（觀察組）和80例胃炎患者（對(duì)照組）的臨床資料。觀察組患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②病理診斷為胃鱗狀細(xì)胞癌；③無(wú)其他嚴(yán)重疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①無(wú)完整臨床資料；②合并其他部位原發(fā)腫瘤。對(duì)照組患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②臨床診斷為胃炎；③無(wú)其他嚴(yán)重疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：有原發(fā)腫瘤。觀察組80例患者中，男45例，女35例；年齡為50～72歲，平均為（65.32±3.15）歲；高分化者48例，中低分化者32例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者53例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期有25例，Ⅲ～Ⅳ期有55例。對(duì)照組80例患者中，男40例，女40例；年齡為48～70歲，平均為（65.25±3.08）歲；淺表性胃炎55例，萎縮性胃炎25例。兩組患者的年齡和性別等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

抽取兩組患者的清晨空腹靜脈血，以3500 r/min的速度離心30 min，取血清，置于‐20℃冰箱保存待測(cè)。采用腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞因子分析儀檢測(cè)hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2水平。取凍存的血清保存液體，每1 ml的TRⅠZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，進(jìn)行裂解操作；4℃冰上采用無(wú)酶的RNA沖洗液進(jìn)行洗滌，以10 000 r/min的速度離心5 min，得到3種標(biāo)志物表達(dá)后的RNA?；旌弦涸诩尤肽孓D(zhuǎn)錄酶之前先70℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至離心管內(nèi)外溫度一致，然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μl，37℃水浴60 min，室溫放置5 min，使其完全溶解，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以β‐actin為模版，將3種標(biāo)志物分別進(jìn)行翻譯后，采用免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

觀察兩組患者h(yuǎn)TERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)情況，比較不同臨床病理特征胃鱗狀細(xì)胞癌患者h(yuǎn)TERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)率的差異，分析影響胃鱗狀細(xì)胞癌患者h(yuǎn)TERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)的因素。hTERT的染色主要出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核中也有染色。GLⅠ1、GLⅠ2在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有陽(yáng)性染色出現(xiàn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸分析法分析胃鱗狀細(xì)胞癌中hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)的影響因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 hTERT、GLI 1、GLI 2的陽(yáng)性表達(dá)率

觀察組患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者h(yuǎn)TERT、GLⅠ 1、GLⅠ 2陽(yáng)性表達(dá)率比較[ n（%）]

2.2 臨床特征與hTERT、GLI 1、GLI 2陽(yáng)性表達(dá)率

觀察組患者中，中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ⅲ～Ⅳ期患者的hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)率分別明顯高于高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ⅰ～Ⅱ期患者（P＜0.01），而不同年齡、性別和腫瘤部位患者h(yuǎn)TERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 觀察組患者臨床特征與hTERT、GLⅠ 1、GLⅠ 2陽(yáng)性表達(dá)率的關(guān)系

2.3 h TERT、GLI 1、GLI 2陽(yáng)性表達(dá)的影響因素

將單因素分析有意義的分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期作為自變量，將胃鱗狀細(xì)胞癌患者h(yuǎn)TERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)作為因變量，進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)入回歸方程，hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有密切的關(guān)系。（表3～5）

表3 觀察組hTERT陽(yáng)性表達(dá)率的影響因素分析

表4 觀察組GLⅠ 1陽(yáng)性表達(dá)率的影響因素分析

表5 觀察組GLⅠ 2陽(yáng)性表達(dá)率的影響因素分析

3 討論

胃通過(guò)消化道與外界直接相通，胃鱗狀細(xì)胞癌患者更易受到外界不良刺激的影響[6]。胃鱗狀細(xì)胞癌患者血清腫瘤因子hTERT是由細(xì)胞核中遺傳物質(zhì)逆轉(zhuǎn)錄后合成，繼而傳遞到細(xì)胞質(zhì)中合成新生腫瘤細(xì)胞，是血漿中含量最高且可以參與外圍腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞因子功能的一類(lèi)腫瘤細(xì)胞因子，較易受感染或炎性反應(yīng)的影響，可以參與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、黏附、轉(zhuǎn)移及血液凝固。由hTERT活化、代謝而形成的纖維聚合體，在腫瘤細(xì)胞質(zhì)相連的網(wǎng)狀物中可見(jiàn)，是造成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)因子[7]。當(dāng)血液中hTERT水平較高時(shí)，腫瘤處于高度惡性狀態(tài)，易造成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，多臟器受累，減弱胃的消化功能，增加患者發(fā)生惡病質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)。hTERT可以在腫瘤細(xì)胞表面形成一個(gè)保護(hù)層，抵抗化療，對(duì)胃鱗狀細(xì)胞癌核心腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供支持，導(dǎo)致不良預(yù)后的發(fā)生[8]。

GLⅠ1和GLⅠ2的生理特征包括促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分化、增殖和進(jìn)行淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可與hTERT同期進(jìn)行淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[9]。在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，GLⅠ1和GLⅠ2的主要生理反應(yīng)是可以同時(shí)作為“第一應(yīng)激反應(yīng)者”的角色。胃鱗狀細(xì)胞癌患者的癌細(xì)胞和正常細(xì)胞之間存在結(jié)構(gòu)和成分的差異，GLⅠ1和GLⅠ2可以被腫瘤細(xì)胞表達(dá)的受體激活。一旦激活GLⅠ1和GLⅠ2，其形狀和生長(zhǎng)因子發(fā)生改變，釋放血液中生物活性脂質(zhì)，使腫瘤增殖和遺傳能力增強(qiáng)，造成惡病質(zhì)。胃鱗狀細(xì)胞癌患者的癌細(xì)胞可以觸發(fā)GLⅠ1和GLⅠ2激活系統(tǒng)，其調(diào)控可被癌細(xì)胞表面受體、細(xì)胞產(chǎn)物、細(xì)胞外因子和免疫細(xì)胞放大，進(jìn)而增加惡性轉(zhuǎn)移率[10]。在胃鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中GLⅠ1和GLⅠ2均有其特異性[11]。GLⅠ1是一種外圍腫瘤細(xì)胞依賴性蛋白酶，在某些類(lèi)型的癌癥中，特別是胃鱗狀細(xì)胞癌的癌細(xì)胞中，存在高度特異性[12]。GLⅠ1是胃鱗狀細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞因子中的重要成分，可以作為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。腫瘤細(xì)胞具有催化GLⅠ1凝集后高表達(dá)的作用，并可以促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床可以作為一種有效的腫瘤標(biāo)志物指示因子；當(dāng)其含量顯著增多時(shí)，應(yīng)警惕胃鱗狀細(xì)胞癌已經(jīng)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，增加了胃鱗狀細(xì)胞癌患者惡變的風(fēng)險(xiǎn)[13]。GLⅠ2可以直接或間接激活胃鱗狀細(xì)胞癌其他相關(guān)因子的表達(dá)如Pl、zFHxlB、ZEB2等，并在細(xì)胞膜上表達(dá)，此時(shí)，白細(xì)胞也被激活，釋放蛋白酶和氧自由基，促進(jìn)GLⅠ2表達(dá)。表達(dá)后的GLⅠ2，可以激發(fā)誘導(dǎo)黏附分子、白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞作為腫瘤合成的基質(zhì)，為胃鱗狀細(xì)胞癌患者的癌細(xì)胞增殖和分化提供基礎(chǔ)[14]。本研究中，觀察組患者的3種腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞因子陽(yáng)性表達(dá)率較高，說(shuō)明胃鱗狀細(xì)胞癌患者的腫瘤細(xì)胞增殖、分化后可以使血清中腫瘤標(biāo)志物因子明顯增多；處于晚期的患者，3種腫瘤標(biāo)志物的陽(yáng)性表達(dá)率較高，說(shuō)明病理分期越高，惡性程度越高，血清腫瘤因子的表達(dá)越高；hTERT、GLⅠ1、GLⅠ2陽(yáng)性表達(dá)率與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，說(shuō)明惡性程度越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高，血清腫瘤標(biāo)志物含量越多，陽(yáng)性表達(dá)特征越明顯。本研究檢測(cè)胃鱗狀細(xì)胞癌患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的陽(yáng)性表達(dá)率，發(fā)現(xiàn)患者的惡性程度和轉(zhuǎn)移率越高，這3種腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)率越高。通過(guò)這種方法，可以有效地檢測(cè)胃鱗狀細(xì)胞癌的病理分期，及時(shí)治療。綜上所述，胃鱗狀細(xì)胞癌患者的hTERT、GLⅠ1和GLⅠ2的陽(yáng)性表達(dá)率較高，且與分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有密切的關(guān)系。

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