馬秀清，張海容

(忻州師范學(xué)院 化學(xué)系,山西 忻州　034000)

黃芪又名黃耆，為豆科多年生草本植物蒙古黃芪和膜黃芪的根，主要產(chǎn)于內(nèi)蒙古、山西、甘肅、黑龍江等地，為國家三級保護(hù)植物。迄今為止，它在我國已有2000多年的藥用歷史，是一種優(yōu)質(zhì)中藥材。現(xiàn)代藥學(xué)研究表明，黃芪具有多種活性成分，包括多糖類化合物，黃酮類、皂苷類、氨基酸等，具有增強機體免疫功能，保肝、利尿、抗衰老、抗癌、抗輻射、降壓和較廣泛的抗菌作用[1-2]。黃芪的許多功效與其抗氧化作用密切相關(guān)，它的主要成分對自由基有部分清除作用[3-7]。自由基是一種生化反應(yīng)的中間態(tài)物質(zhì),人體在衰老、應(yīng)激,疾病的情況下都發(fā)生自由基對重要生物分子的損傷,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也表明:自由基被認(rèn)為是人體衰老和某些慢性疾病發(fā)生的原因之一[8-9]。通過研究黃芪不同方法下提取液的抗氧化性,在對黃芪加以利用時可以有靈活的選擇性,為黃芪深加工利用提供有價值參考。

1　實驗部分

1.1　試劑

無水乙醇，分析純，天津市北辰方正試劑廠；95%乙醇，分析純，天津市北辰方正試劑廠；硫酸亞鐵銨，分析純，天津市化學(xué)試劑三廠；水揚酸，分析純，天津市北原方正試劑廠；過氧化氫(30%)，分析純，上海華星化工廠；DPPH,分析純，東京化成工業(yè)株式會社；乙酸乙酯，分析純，天津市化學(xué)試劑三廠；抗壞血酸，分析純，北京化學(xué)試劑公司；磷酸二氫鈉，分析純，北京紅星化工廠；磷酸氫二鈉，分析純，天津市化學(xué)試劑六廠。

1.2　儀器

KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超生儀器有限公司；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司；AB204-N電子分析天平，Metter―Toledo Group；DZ-1A型真空干燥箱,天津市泰斯特儀器有限公司；722S可見分光光度計，上海青華科技儀器有限公司；RE-52旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，上海安亭電子儀器廠；SHZ-D循環(huán)水式真空泵，河南鞏義市峪華中儀器廠；精密數(shù)顯酸度計，上海達(dá)儀器有限公司；標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩40目，浙江省上虞市紗篩廠制造；XA-1型固體樣品粉碎機，金壇市榮華儀器制造有限公司。

1.3　溶液的配制

1.3.1提取液的制備

圖1　制黃芪提取液的流程圖

把黃芪藥材烘干、粉碎后，過40目篩，稱10.0 g置于250 mL三角燒瓶中，加入100 mL的80%乙醇，在50℃，90W條件下超聲半個小時，過濾，將殘渣再在相同的條件下超聲半個小時，過濾，合并兩次的濾液，將濾液蒸發(fā)至一定體積，定容于100 mL容量瓶得提取液Fa；將殘渣在90℃條件下水煮10 h，過濾，將殘渣在相同的條件下水煮10 h，過濾，合并兩次濾液，將濾液蒸發(fā)至約100 mL，假如約4倍的無水乙醇得上清夜和沉淀，過濾，得白色沉淀和上清夜，將沉淀用水溶解定容于100 mL容量瓶得Fb；上清夜蒸發(fā)至約50 mL加入約100 mL乙酸乙酯，分層，水層定容于100 mL容量瓶得提取液Fd；乙酸乙酯層蒸發(fā)至一定體積，烘干，再溶解到95%乙醇，定容于100 mL容量瓶中得提取液Fc。所得4種提取液均為0.1g/mL的黃芪不同的提取液。

1.3.2抗氧化能力的測定

1.3.2.1水揚酸法

在10 mL比色管中依次加入7.5×10-3mol·L-1的硫酸亞鐵銨1 mL，7.5 mol·L-1的水楊酸，0.3%的H2O2各1 mL，最后分別加入一定量的被測物定容至10 mL，靜置半小時，測其在510 nm處的吸光度值，吸光度越低，除·OH的效果越好。

該產(chǎn)物在510 nm處有強吸收，若加入自由基清除劑，便會與水楊酸競爭，從而使有色產(chǎn)物的生成量減少，采用固定反應(yīng)時間法，在510 nm處測定被測物反應(yīng)的吸光度，并與空白溶液比較，便能確定提取液對其的清除作用，清除率計算公式(1)為：

(1)

A對照—指加入Fe2+,H2O2，水楊酸后的羥自由基體系的吸光度值；

A樣品—指加入Fe2+,H2O2，不同提取液，水楊酸后的羥自由基體系的吸光度值；

1.3.2.2DPPH法

在10 mL的比色管中加入一定量的被測物，再加入2×10-4mol·L-1的DPPH·溶液，搖勻，30min后用被測物作參比，測定吸光度A樣,同時用無水乙醇作參比，測定2 mL 2×10-4mol·L-1DPPH液與2 mL無水乙醇混合后溶液的吸光度A對，根據(jù)下面的公式(2)計算清除率：

(2)

A對照—指加入DPPH·的自由基體系的吸光度值；

A樣品—指加入不同提取液，DPPH·后自由基體系的吸光度值。

吸光度值越低，總的清除率就越好。

2　結(jié)果與分析

2.1　不同提取液對·OH的清除作用

圖2　不同體積的不同黃芪提取液對羥基自由基的清除率

在10 mL比色管中依次加入1 mL硫酸亞鐵銨，1 mL水楊酸，1 mL H2O2后，把提取液及Vc按分別不同體積：0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL加入比色管中定容，同時在另8支比色管中依次加入0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0mL的提取液定容于10 mL做背景，靜置30min，在510 nm處測其吸光度，計算各自的清除率，其中Fa稀釋5倍，F(xiàn)b，F(xiàn)c，F(xiàn)d，Vc沒有稀釋，其清除率的關(guān)系如圖2。

由圖2可看出Fa、Fb、Fd對·OH 都有清除作用且清除能力與濃度有明顯的量效關(guān)系，F(xiàn)c幾乎不具有抗氧化性，F(xiàn)d的清除效果受濃度影響較大，隨濃度的增大，清除效果明顯提升，由于Fa未稀釋時加進(jìn)去提取液溶液就變?yōu)闊o色，故Fa的清除效果最好。

2.2　不同提取液對DPPH自由基的清除作用

在10 mL比色管中依次把各提取液及稀釋了80倍的Vc按不同的體積：0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL加入8支比色管中，再各加入2 mL的DPPH溶液定容于10 mL，同時在另8支比色管中依次加入0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL的提取液定容于10 mL做背景，靜置30min后，在517 nm處測其吸光度，其中Fa稀釋了10倍，F(xiàn)b稀釋了5倍，F(xiàn)c，F(xiàn)d未稀釋，Vc稀釋了80倍，計算各清除率，清除率關(guān)系見圖3。

圖3　不同體積的不同黃芪提取液對DPPH自由基的清除率

由圖3可看出Fa、Fb、Fc、Fd都有一定的抗氧化性，雖然Fa、Fb,均經(jīng)過稀釋，但Fa的抗氧化性比Fb的抗氧化性好且穩(wěn)定，故Fa的抗氧化性最好。

3　結(jié)論

本實驗通過對幾種不同提取液清除·OH和DPPH自由基的測定，可知這幾種提取液對·OH 和DPPH·都具有一定的清除能力，通過對這幾種提取液抗氧化性的比較可知，在50℃，90W條件下超聲半個小時的提取液的抗氧化性最好。

4　展望

自由基與人體健康有密切的關(guān)系，中草藥黃芪對清除自由基有著廣泛的前景，本文對黃芪不同提取液抗氧化性的研究，對在以后利用黃芪制取抗氧化的保健品、營養(yǎng)品、醫(yī)藥學(xué)及化妝品時都可以節(jié)省人力物力達(dá)到預(yù)期的效果。

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