（山東省聊城市畜牧獸醫(yī)局，山東聊城 252000）

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清

本次試驗抽取的110個樣本豬場多為存欄母豬在50頭份以下的中小規(guī)模豬場，試驗用樣本豬共429頭份，其中已進行PRV疫苗免疫的豬為337頭份，未進行PRV疫苗免疫的豬只為92頭份；10月份66頭份，11月份92頭份，12月份81頭份，2月份47頭份，3月份143頭份；青島（包括平度）78頭份，濰坊（包括高密、昌邑、安丘、臨朐、青州）217頭份，淄博（包括臨淄）31頭份，泰安（包括肥城）75頭份，臨沂（包括莒南）28頭份；仔豬49頭份，保育豬65頭份，育肥豬36頭份，后備母豬32頭份，經(jīng)產(chǎn)母豬227頭份，種公豬20頭份。

1.1.2 儀器設(shè)備

試驗要用到GT10-1高速離心機，電爐，DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱，單道、多道可調(diào)微量移液器，BCD-212HDA普通冰箱，分光光度計，DG5033A酶標儀。

1.1.3 檢測試劑

PRV抗原包被的酶標板、辣根過氧化物酶（HRPO）標陽性對照血清、PRV抗體陰性對照血清、去離子水（本試驗購自北京愛德士元亨生物科技有限公司的IDEXX試劑及試劑盒）。

1.2 檢測方法

所有試劑在使用前先放入18℃～25℃恒溫箱中恢復(fù)至室溫。濃縮液用去離子水進行10倍稀釋，被檢樣品血清用樣品稀釋液2倍稀釋。

取出PRV抗原包被板，向A1、B1孔中加入100μl 2倍稀釋陰性對照血清，C1、D1孔中加入100 μl 2倍稀釋陽性對照血清，相應(yīng)孔中加入100μl稀釋樣品。然后放到18℃～25℃恒溫箱中孵育60 min。每孔用 300μl左右稀釋洗滌液洗滌3～5次后入100 μl抗PRVgB酶標抗體。在恒溫箱（18℃～25℃）中孵育20 min。每孔用300μl左右稀釋洗滌液洗滌3～5次后加入100μlTMB底物溶液。在恒溫箱（18℃～25℃）中孵育15 min。每孔加入50μl終止液終止反應(yīng)。在650nm，A（650）下測量并記錄樣品的吸光值。

1.3 結(jié)果計算

本次試驗使用的是IDEXX提供的計算方法。

1.3.1 試驗有效條件

若陰性對照平均值減去陽性對照后的平均值大于0.300則結(jié)果有效，否則無效。

1.3.2 計算方法

陰性對照平均值=（A1 A（650）+B1 A（650））/2。

陽性對照平均值=（C1 A（650）+D1 A（650））/2。

對照比率S/N值=樣本A（650）/陰性對照平均值。

2 結(jié)果

此110個豬場的8817頭份豬中429頭份豬的血樣ELISA方法檢測，陽性豬292頭份，陰性豬137頭份，陽性率為68.07 %；陽性豬場為95個，陰性豬場15個，陽性率為86.36 %。

2.1 不同免疫情況下抗體水平檢測陰陽比例對照

已進行PRV疫苗免疫的豬為337頭份，未進行PRV疫苗免疫的豬為92頭份，免疫率達到78.55 %，如表1所示。

表1 不同免疫狀況下抗體水平檢測陰陽比例對照表

由表1分析可得示，在未進行免疫防護的豬中陽性率偏高，豬場的隱性感染率很高。在已進行免疫防護的豬中仍有1/4的沒有得到有效的抗體保護，免疫效果不理想。

2.2 不同時間抗體水平檢測陰陽比例對照

表2 不同時間抗體水平檢測陰陽比例對照表

由表2分析可得，不同時間抗體水平有著明顯的差異，在2017年的10、11、12，2018年的2、3這五個月份中抗體水平始終圍繞68.07 %這條線上下波動，并無明顯規(guī)律可循。但是11月和3月的波動范圍相對較大，抗體水平不穩(wěn)定，尤其在3月的中旬和下旬陽性率差值竟超過25 %，可能與多變的天氣有關(guān)，要關(guān)注氣候變化，及時防護。

2.3 不同地區(qū)豬場抗體水平檢測陰陽比例對照

各地區(qū)的免疫狀況各不相同，抗體水平存在差異，在濰坊以東和以北的地區(qū)免疫效果相對偏好一些，如青島的平度、濰坊的昌邑、安丘、淄博的臨淄等地抗體水平相對較高，臨淄抗體陽性率達到了86.67 %，而臨朐、青州、泰安的肥城、臨沂的莒南等地抗體水平相對較低，應(yīng)加強這幾個地區(qū)的免疫程序。導(dǎo)致免疫效果差異的因素有：選擇的疫苗不同或者是防疫與管理太過粗放等引起。

2.4 不同階段豬場抗體水平檢測陰陽比例對照

已產(chǎn)母豬的73.06%的陽性率效果還是比較理想的，后備母豬68.75%的陽性率較低于已產(chǎn)母豬，可加強此階段的免疫防護。哺乳階段仔豬通過從母體乳汁中獲得抗體可減少發(fā)病概率，陽性率為71.43%，表明獲得了有效的免疫保護。但是保育豬和育肥豬的陽性率分別為40.00%和30.56%，表明斷奶后的商品豬免疫工作有明顯的不足，這也加重了豬場偽狂犬病感染的概率。