劉宇翔，劉瑤，馮露雅，郭德志，劉明芳＊

（1.湖南省永州市第一中學，湖南永州 425100；2.永州市異蛇科技實業(yè)有限公司，湖南永州 425199）

蘄蛇又名五步蛇，學名尖吻蝮（Agkistrodonacutus），在我國分布較廣，是我國十大劇毒蛇之一，其中又以武夷山山區(qū)和皖南山區(qū)儲量最多，其毒液主要作用于血液系統(tǒng)，引起出血、腫脹與局部組織壞死。蘄蛇為蝰科動物五步蛇除去內(nèi)臟的干燥體，味甘咸、性溫；有毒。歸肝經(jīng)。功效為祛風，通絡(luò)，止痙。用于風濕頑痹，麻木拘攣，中風口眼?斜，半身不遂，抽搐痙攣，破傷風，麻風，疥癬[1]。

蘄蛇蛇毒是從蘄蛇的毒腺中分泌的一種毒液，它是一種生物毒素（Biotoxin）。蛇毒的主要生物學功能是幫助蛇捕食和消化食物，毒蛇分泌的毒液能快速使獵物死亡。一般蛇毒的新鮮毒液呈粘稠的半透明液體，有特殊的腥味[2]，搖晃時易起泡沫，呈弱酸性，平均每條蛇咬物一次排出的毒液量222.2 mg，毒液中固形物含量為26.2%，含水量為65%～80%，常溫下易失活，置冰箱中一周會有部分失去活力[3]。

2 化學成分

2.1 蘄蛇蛇毒成分

蛇毒化學成分十分復(fù)雜，不同的成分有著不同的藥理作用。其主要成分是蛋白和多肽，占干重的90%～95%，又因蛇的種類、產(chǎn)地、時間、蛇齡、雌雄、生存環(huán)境等不同而有明顯的差異。蛇毒遇重金屬離子、乙醇、酚類等物質(zhì)時，立即產(chǎn)生沉淀；高溫環(huán)境下產(chǎn)生絮狀沉淀；遇氧化劑、還原劑亞硫酸鈉、強酸、強堿等，活性成分易被破壞，易被蛋白水解酶所分解；紫外線照射亦能使蛇毒失活；經(jīng)甲醛處理后會失去毒性，仍保持抗原性，或變成類毒素[4]。蛇毒中的蛋白類物質(zhì)是蛇毒主要毒性成分，主要包括酶和蛇毒素兩大類。另外，蛇毒內(nèi)除含活性酶類外，還有其他活性多肽。

2.1.1 蘄蛇蛇毒中的酶類成分

目前，蘄蛇中發(fā)現(xiàn)的蛇毒多屬絲氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶和磷脂酶A2家族，部分蛋白質(zhì)可能屬于去整合素家族[5]。蛇毒酶類大多數(shù)屬水解酶類，按其主要毒理作用分三大類：（1）蛋白酶、磷脂酶、精氨酸醋酶、透明質(zhì)酸酶和膠原蛋白酶等，能引起局部毛細血管和組織損傷與壞死；（2）凝血酶、蛋白酶、磷脂酶A2(PLA2)，能引起各種類型的促凝和抗凝作用；（3）蛇毒中激膚釋放酶可以通過釋放血管舒緩激膚酶，而產(chǎn)生降壓、水腫、疼痛等作用[2]。

有學者通過平衡透析研究了過氧化氫酶之間與二價金屬離子的交互性，和金屬離子對其結(jié)構(gòu)和活性的影響[6]，了解到這種性質(zhì)是所有過氧化氫酶，包括Cu2+離子催化酶中活性必不可少的，而過氧化氫酶是蘄蛇毒液中具有獨特催化酶活性的酶。酶類中的凝血酶（thrombin-like enzyme）是一種絲氨酸蛋白酶，也是一種磷脂酶A2.PLA2抑制劑，是蘄蛇、眼鏡蛇等毒液內(nèi)具有廣泛抗出血活性酶[7]。降纖酶是安全有效的強力血栓溶解劑，具有蛇毒類凝血酶性質(zhì)，在體外促凝，在體內(nèi)起著消耗纖維蛋白原的作用，會出現(xiàn)抗凝效果。從蘄蛇蛇毒中分離純化的FIXcaI是一種分子量較小，比較穩(wěn)定，纖溶活性強，可直接降解纖維蛋白，非出血性的新型蛇毒纖溶酶[8]。又從蘄蛇蛇毒的粗毒中分離純化得到多種純組分，如具有凝血酶活力的金屬蛋白，分子量約為28.0 kDa，具有精氨酸酯酶活力和激活因子ⅩⅢ的活性；分子量24.3 kDa的類凝血酶，不具有激活因子ⅩⅢ的活性；分子量約為25.4 kDa的抗凝血因子，不具有磷脂酶A2活性、纖溶活性和出血活性。分離出的新型P-I型金屬蛋白酶，對溫度敏感，具有抗凝血活性，40℃下抗凝血活性最強，具有出血毒性，無磷脂酶A2活性[9]?？鼓蜃覫（ACF I）是一種C型凝集素從蘄蛇的毒液結(jié)合蛋白，激活因子X(FXa)，可通過鈣離子通道的方式來延長體外凝血時間[10]?？鼓蜃覫I(ACF II)則是蘄蛇毒液的凝血因子IX 和凝血因子X結(jié)合的蛋白質(zhì)(IX/X-bp)，是目前為止確定出的第一個獨特的雙功能蛋白，其在IX/X-bp家庭抗凝和低血壓患者中有應(yīng)用潛質(zhì)，可通過不同的途徑影響大鼠的血液循環(huán)[11]。同時蘄蛇的毒液中的ACFII與IX/X-bp具有抗凝和降低血壓活性[12]。

2.1.2 蘄蛇蛇毒中的毒素成分

蛇毒中的毒素種類很多，為非酶的毒素，如膜毒素、細胞毒素、蛇毒神經(jīng)生長因子等。蘄蛇蛇毒內(nèi)含有影響心臟、血管及血液系統(tǒng)的成分，能產(chǎn)生多方面的毒性作用的血循毒素。其臨床表現(xiàn)相當于中醫(yī)的火熱毒癥狀，稱為“火毒”。

蛇毒中的神經(jīng)毒素，是蛇毒毒液中最毒的成分，它能使動物產(chǎn)生弛緩性麻痹和呼吸衰竭，從而導致動物死亡。神經(jīng)毒素是一種由15～18種氨基酸，60～74個氨基酸鏈所結(jié)合而成的肽鏈，其中最主要的氨基酸是賴氨酸、精氨酸、天門冬氨酸，但亦含有半胱氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸和色氨酸等成分。神經(jīng)毒素的臨床癥狀相當于中醫(yī)風邪侵襲所致的臨床表現(xiàn)，稱為“風毒”。

被蘄蛇咬傷會產(chǎn)生輕度至中度癥狀與蛋白水解和抗凝血效果，毒液的構(gòu)成的生化和結(jié)構(gòu)特點，毒素仍然未知。

2.2 蘄蛇的化學成分

張冬璇等[13]綜述了蘄蛇中主要物質(zhì)基礎(chǔ)，包含蛋白質(zhì)和氨基酸類成分、磷脂類成分以及核苷類成分，同時總結(jié)了前人探究化學成分的方法和含量測定。蘄蛇含有3種毒蛋白，AaT-Ⅰ、AaT-Ⅱ、AaT-Ⅲ，同時含多種蛋白酶，氨基酸類含量高的由天門冬氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、纈氨酸、硫氨酸、酪氨酸和色氨酸等。丁興紅[14]用高效液相色譜法（HPLC）測定蘄蛇藥材中含尿嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤和尿苷等成分。進而可有效的控制蘄蛇藥材品質(zhì)。

3 蘄蛇蛇毒的藥用價值

3.1 蘄蛇蛇毒的應(yīng)用進展

蘄蛇蛇毒的藥用價值主要體現(xiàn)在釀酒和風濕疾病治療中，尤以蘄蛇的蛇酒研究最為突出。其工藝發(fā)展現(xiàn)已成熟生產(chǎn)周期短，原材料利用率高產(chǎn)品質(zhì)量和口感有飛躍進步。近些年來，蛇毒的酶類研究也較為廣泛和深入，干蛇毒價值出口價每克達1 465美元，經(jīng)濟價值極高。1976年開始我國的一些單位也陸續(xù)開展起蘄蛇蛇毒方面的研究如對蛇毒抗凝組分的分離和醫(yī)用研究。1981年昆明動物研究所等單位從蘄蛇毒中獲得去纖蛋白酶，臨床證明抗凝效果明顯，療程短，使用方便。福建醫(yī)科大學與福建三明制藥廠協(xié)作現(xiàn)已批量生產(chǎn)投放于市場。蛇毒具有廣泛的生物學活性，現(xiàn)已被應(yīng)用于溶栓、抗癌、止血、止痛等方面，通過研究蛇毒生理作用表明，還可改善微循環(huán)、降壓和神經(jīng)毒性[15]。

3.2 蘄蛇的應(yīng)用進展

中國傳統(tǒng)醫(yī)學認為，毒蛇及其毒性成分可通經(jīng)絡(luò)，祛風濕，且有強身健體的功效。蛇肉、蛇毒、蛇血、蛇粉、蛇干以及蛇鞭等均可入藥，對幾十類疾病均有明顯的治療效果，尤以蘄蛇泡酒，對風濕、類風濕效果更為顯著，可分為蘄蛇、蘄蛇肉和酒蘄蛇，服用方法分別為研磨吞服、煮散劑，水煎服和酒劑。蘄蛇具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤的藥理作用。藥典中記載蘄蛇飲片炮制方法：蘄蛇去頭、鱗，切成寸段。蘄蛇肉去頭，用黃酒潤透后，除去鱗、骨，干燥。酒蘄蛇取凈蘄蛇段，照酒炙法（通則 0213)炒干。每100 kg蘄蛇，用黃酒20 kg。本品為段狀。棕褐色或黑色，略有酒氣[1]?，F(xiàn)大量研究表明，蘄蛇具有祛風除濕、抗凝抗栓、去除纖維蛋白元、降低血液粘度、擴張血管、降低血脂、舒筋活絡(luò)、滋陰補腎等功效，主要治療風濕性關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)、本身不遂、四肢麻木、腰酸背痛的癥狀。

王新昌等[16]探索干燥綜合征患者服用益氣養(yǎng)陰祛瘀方+蘄蛇的臨床藥效，臨床癥狀好轉(zhuǎn)，疾病活動度評分、生存質(zhì)量評分、免疫功能均有所改善，尤其是免疫球蛋白G（IgG）大幅度下降。表明蘄蛇水煎劑能減輕干燥綜合征患者病情，改善生活質(zhì)量，可能與其免疫抑制功能有關(guān)。且蘄蛇酶聯(lián)合肝素在治療兔急性下腔靜脈血栓方面是有效的，具有較高的安全性[17]。蘄蛇提取物醇溶性和水溶性部位有一定的抗炎及鎮(zhèn)痛作用，水溶性部位較醇溶性部位的藥效好，可為蘄蛇的臨床應(yīng)用提供指導作用[18]。

3.3 蛇肽的開發(fā)與利用

Felix等[19]在蛇肽研究中克隆和報告第一個5種毒素編碼基因的全長序列的毒液腺物種：蛇毒金屬蛋白酶（SVMP），蛇毒絲氨酸蛋白酶（SVSP），半胱氨酸分泌蛋白（CRISP），a和b亞基C型外源凝集素蛋白（CLP）和C型利尿鈉肽（NP）。這些基因是高度毒液腺中表達及其序列表現(xiàn)出一個公認的信號肽。

國內(nèi)近年來開始研制并生產(chǎn)的蛇毒抗凝制劑，其主要成分都是蘄蛇蛇毒的分離組分——類凝血酶，類凝血酶具有兩種特性：（1）作用于精氨酸衍生物TAME（a-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯）的精氨酸酯酶的活性；（2）水解纖維蛋白原大分子物質(zhì)產(chǎn)生凝結(jié)反應(yīng)的活性。該類凝血酶可以迅速、有效地降低纖維蛋白原含量，產(chǎn)生低纖維蛋白原狀態(tài)，還引起纖維蛋白原降解產(chǎn)物升高，說明體內(nèi)有纖維蛋白降解發(fā)生；在誘導組織型纖溶酶原激活劑（t-PA）升高的同時還可降低纖溶酶抑制劑（PAI）的活性，使肌體內(nèi)的纖溶活性增強，從而達到去纖、抗凝、溶解血栓的作用。與此同時，該酶能降低犬血粘度，還能引起血漿甘油三酯和膽固醇的下降，這一點有利于病理性疾病的恢復(fù)，但其對血小板含量幾乎無影響，對血漿其他凝血因子也無明顯影響，所以在抗凝、溶栓的同時一般不會引起出血，這是單一組分的類凝血酶應(yīng)用于臨床治療血栓病不同于其他藥品的最大優(yōu)點。

此外，蘄蛇毒素對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎具有抑制作用[20]。有學者[21]表示重癥急性胰腺炎（SAP）仍然是一個挑戰(zhàn)性的疾病，高死亡率，有限的發(fā)病機制的了解和缺乏特定的治療。重組纖溶酶Ⅱ（r FⅡ）蘄蛇毒液可以降低腫瘤壞死因子-α(TNF-a)和SAP的死亡率。可以減少對耐受性抗菌藥物的使用。也發(fā)現(xiàn)蘄蛇毒中含有低分子量蛇毒類凝血酶[22]，可避免使蛋白類分子量大成分直接進入消化道，易引起人體的過敏反應(yīng)[23]。金銘等[24]采用離子交換和分子篩，以柱層析法分離蛇毒C4組分，并用急性毒性實驗和自然戒斷實驗、耐受性實驗考察其毒性、依賴性和耐受性。得出C4組分在一定劑量范圍內(nèi)是安全的，同時其鎮(zhèn)痛作用與嗎啡相比，在長期用藥過程中不產(chǎn)生耐受性和依賴性。楊海波等[25]從桂北蘄蛇毒腺中抽提蛇毒總RNA，采用一步法（RT-PCR和PCR在同一試管內(nèi)進行）擴增纖溶酶金屬蛋白酶原基因，并進行電泳檢測和基因研究發(fā)現(xiàn)蘄蛇蛇毒中含有血液循環(huán)毒素，其中與血凝失調(diào)有關(guān)的兩種蛋白水解酶，類凝血酶和金屬蛋白酶家族。纖溶酶屬于金屬蛋白酶家族的成員，它作用在人的纖維蛋白酶原或纖維蛋白，使血凝塊溶解。蘄蛇酶還具有促進血管內(nèi)皮細胞釋放組織型纖溶酶原激活劑（t-PA），使細胞培養(yǎng)液中t-PA活性升高，t-PA/PAI比值升高，纖維蛋白降解產(chǎn)物明顯增加，提高其纖溶活性的作用[26]。從蘄蛇降纖酶中重組毒液影響并加強超急性排斥反應(yīng)（HAR），HAR是一種主要障礙在異種移植，介導的結(jié)合異種移植的天然抗體和補體的激活劑。目前的治療方法有補體抑制劑和轉(zhuǎn)基因動物的發(fā)展器官[27]。

4 展望

李炎等[28]對國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫上檢索和效價測定，目前市場上流通的大部分樣品的純度均較低，主要成分為蘄蛇酶，降纖酶注射液的熱穩(wěn)定性較差，質(zhì)量有待提高。蛇毒降纖酶N-linked低聚糖的結(jié)構(gòu)，高度活躍的凝血酶（TLE）純化從蘄蛇的毒液，成功使用MALDI-TOF特征質(zhì)譜結(jié)合順序外切糖苷酶消化。低聚糖的蛇毒液蛋白酶是進一步基礎(chǔ)研究的碳水化合物的重要性生物活性[29]。蛇毒作為藥物的開發(fā)力度還不夠，純化不到位。利用蛇毒作為治療癌癥的研究，國內(nèi)外都已經(jīng)進行了長期的工作，但進展仍然不大。臨床上除了蛇毒抗血清藥物，還有一系列注射用制品，國外學者研究結(jié)果表明，不肌注的給藥途徑顯著改變蝮蛇毒液的藥物動力學，卻大大降低了毒液的系統(tǒng)生物利用度[30]。所以蛇類生物制品藥理作用和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)還需要進行深入的研究，研發(fā)前景廣泛。