張艷珍　王彥鵬　危起偉　杜　浩　劉志剛　胡維勇　張曉雁

(1. 中國水產科學研究院長江水產研究所, 武漢 430223; 2. 北京信沃達海洋科技有限公司(北京海洋館), 北京 100081)

血細胞在動物的生命活動中起著重要作用, 是動物體對自身生理狀態(tài)變化和對外界環(huán)境因子刺激非常敏感的細胞, 是機體免疫的重要成分, 具有吞噬、分泌等多種功能, 參與機體的傷口修復和防御等生理機制。魚類的血細胞的功能與維持體內各種生理環(huán)境的穩(wěn)定性有密切關系, 形態(tài)與數量變化是魚類健康判斷、疾病診斷與預防的重要依據,已有多種魚類進行相關研究[1,2]。鱘魚相關研究也較多, 包括大西洋鱘(Acipenser oxyrinchus)、短吻鱘(Acipenser brevirostrum)、歐洲鰉(Huso huso)、納氏鱘(Acipenser naccarii)、高首鱘(Acipenser transmontanus)、史氏鱘(Acipenser schrenckii)等[3—8]。中華鱘(Acipenser sinensis)作為國家一級保護動物,目前處于極危狀態(tài)[9], 但對于中華鱘血細胞形態(tài)研究僅見1齡幼魚報道[10]。北京海洋館作為中華鱘重要的遷地保護和保育科教基地之一, 育有多尾野生中華鱘和各齡子一代及子二代中華鱘, 養(yǎng)殖中采用單尾護理的方式[11—12], 利于對個體研究與評價。本次通過對從幼體到成體多個年齡中華鱘血細胞進行形態(tài)觀察, 了解中華鱘血細胞的組成與功能, 旨在為中華鱘的健康保育研究提供基礎依據, 同時為動物血細胞研究相關領域豐富基礎資料。

1　材料與方法

1.1　研究對象

40尾中華鱘來自中國水產科學研究院長江水產研究所中華鱘養(yǎng)殖基地, 在北京海洋館長期馴養(yǎng),包括野生中華鱘2個年齡組, 人工繁殖子一代中華鱘4組, 子二代1組, 信息如表 1所示。

1.2　養(yǎng)殖條件

養(yǎng)殖池體規(guī)格29.0 m (長)×11.0 m (寬) ×4.4 m(高), 配置20.0 m ×3.0 m的展示觀察窗, 兩側設置從展窗面向對面池壁的水平水流, 與展窗呈近45°角向池體后方水流。養(yǎng)殖水溫21.0—22.5 ℃, 溶氧7.0—7.8 mg/L, pH 7.5—8.0, 濁度＜ 0.07 NTU。池體上方設置7盞1000 W金屬鹵素燈照明, 光周期設定為10h∶14h (光∶暗), 從池體底部到水體表面的白天照度多介于50—4000 lx, 夜間為全黑。養(yǎng)殖密度小于2.4 kg/m3。餌料種類包括生鮮餌料和特制混合餌料, 投喂率約1%, 每周3次, 采用水下單獨投喂方式。

1.3　光鏡和電鏡樣本制備

血液采集： 實驗中華鱘停食3d后進行血液采集, 尾靜脈采血注入肝素鋰抗凝管中備用, 采血后立即血涂片, 每個樣本制備5個血涂片, 檢測在采血后2h內開始。

光鏡樣本： 新鮮血液制備涂片, 自然干燥, 采用Wright-Giemsa法進行染色, 自來水沖洗自然干燥后在Olympus CX41油鏡下觀察。

電鏡樣本： 血液經10000 r/min低溫離心10min后, 使用一次性毛細針筒吸取白細胞層和少量紅細胞, 采用2.5%戊二醛固定后, 常規(guī)透射電鏡生物樣品制備方法制備電鏡樣品, 在FEI TECNAI G220型透射電鏡及成像系統(tǒng)下觀察并采集圖片。

1.4　數據統(tǒng)計

細胞測量方法： 圓形、橢圓或較規(guī)則細胞直接測量最長和最短直徑; 不規(guī)則細胞測量最長徑和與其垂直方向的直徑分別作為長短徑;

表 1　中華鱘樣本信息Tab. 1　Information of the animal

細胞核測量方法： 圓形、近圓形、腎形、桿狀或較規(guī)則核型直接測量最長和最短直徑; 分葉核型細胞的長短徑分別測量各葉的長徑和短徑。

使用LQ530顯微數碼成像裝置及圖像處理系統(tǒng)采集圖片, 進行各類細胞及細胞核長短徑測定,單位 μm。其中紅細胞每個樣本測量20個細胞, 其他類型細胞每個樣本測量5—10個細胞, 結果取各類型所有細胞的平均值, 以(平均值±標準差)表示。采用SPSS分析軟件對數據進行分析處理。

2　結果

2.1　血細胞組成與大小

中華鱘外周血可見細胞中最多的是紅細胞(Erythrocyte), 紅細胞平均密度為(5.56 ± 1.19) ×108/mL, 白細胞(Leukocyte)和血栓細胞(Thrombocyte)占少數, 平均密度分別為(16.53 ± 4.94)×106/mL和(15.53 ± 15.82)×106/mL, 血栓細胞數量波動大。其中白細胞中數量最多的是淋巴細胞(Lymphocyte)約占83%, 大淋巴和小淋巴各自比例詳見表 2, 其次是嗜中性粒細胞(Neutrophil)、單核細胞(Monocyte),最少的是嗜酸性粒細胞(Eosinophil), 各自比例詳見表 2。未見到嗜堿性粒細胞(Basophil)。

對不同年齡中華鱘的血細胞密度及組成進行比較(表 2), 結果顯示： RBC值為18齡和11齡較低,與其他齡組之間存在顯著性差異(P＜0.05), ＞30齡(W-N)組略高于其他組, 差異不顯著; WBC值為18齡、4齡分別與其他齡組間存在顯著性差異(P＜0.05), DLC結果中NEU和LYM比例顯示18齡、4齡分別與其他齡組間存在顯著性差異(P＜0.05), 子一代各齡之間有差異不顯著, 另2類白細胞之間年齡間變化大。

細胞的測量結果均值詳見表 3。在本次試驗中單核細胞和嗜中性粒細胞個體最大, 細胞大小范圍分別為(14.95—21.93) μm ×(8.89—18.79) μm和(9.45—22.69) μm ×(9.18—17.85) μm; 其次是嗜酸性粒細胞和大淋巴細胞, 細胞大小范圍分別為(14.20—17.09) μm ×(13.42—16.39) μm和(12.95—24.39) μm×(6.30—18.19) μm, 酸性粒細胞的直徑差異極小; 依次為紅細胞(13.00—18.54) μm ×(7.94—13.25) μm,血栓細胞和小淋巴細胞最小, 細胞大小范圍分別為(9.71—15.62) μm ×(4.54—11.61) μm和(7.51—12.84) μm ×(5.91—10.89) μm。各類血細胞結構和大小在不同年齡組間無顯著差異, 僅個別魚體略有區(qū)別。

表 2　不同年齡血細胞組成比較Tab. 2　The blood cell types of different ages

表 3　血細胞組成及細胞大小Tab. 3　The blood cell types and the sizes of different cells

2.2　光鏡觀察結果

通過光學顯微鏡觀察發(fā)現, 中華鱘外周血涂片中紅細胞的數量最多, 白細胞和血栓細胞數量較少,單個或少數幾個聚集分散在紅細胞之間。白細胞包括淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和單核細胞。

紅細胞紅細胞呈橢圓或卵圓形, 表面光滑,細胞核形狀與細胞形狀相似, 位于細胞中央, 少數略偏位, 細胞核內染色質多質密, 被染色為深紫藍色, 無核仁。細胞質豐富, 細胞質被染色為灰藍色(圖版Ⅰ-1—17)。部分血涂片染色過程中環(huán)境偏堿性, 細胞呈灰藍色。另偶可見圓形原紅細胞。

淋巴細胞淋巴細胞呈圓形、橢圓形或不規(guī)則形, 大小不等, 可分為大淋巴和小淋巴細胞(圖版Ⅰ-1—4), 細胞核質比大, 是白細胞中數量最多的類型。細胞核多為圓形或腎形, 染色質致密呈塊狀,無核仁, 著色深紫紅色。細胞質較少, 染色為藍色,多數有明顯的偽足突起, 有的呈一薄層包裹細胞核,有的經胞吞呈空泡狀似漿細胞(Plasma cell)(圖版Ⅰ-3), 有的胞質幾乎不可見, 細胞近似裸核。其中大淋巴細胞少數, 胞核顏色較小淋巴略淺。外周血中偶可見正在分裂的淋巴細胞(圖版Ⅰ-4)。未見到原淋巴細胞和幼淋巴細胞。

嗜中性粒細胞嗜中性粒細胞呈圓形、卵圓形或不規(guī)則形等, 細胞較大, 核質比低于淋巴細胞和單核細胞(圖版Ⅰ-5—7)。細胞核為彎曲呈腎形、桿狀(圖版Ⅰ-5)、帶狀或分葉型(圖版Ⅰ-6、7),桿狀和分葉核型數量多, 分葉核一般2—5葉, 核常偏于細胞一側, 細胞核內染色質較質密, 被染色為紫紅色或藍紫色, 無核仁。細胞質豐富, 被染色較淺, 呈淡粉紅色, 少數無色, 布滿少量細小、淡紫色或紅色小顆粒, 大小不均勻。未見到原粒細胞、早幼和中幼粒細胞。

嗜酸性粒細胞嗜酸性粒細胞多呈圓形, 個別卵圓形, 細胞中等偏大, 核質比小, 數量極少, 在血涂片中偶爾見到(圖版Ⅰ-8—10)。細胞核常因胞漿顆粒覆蓋不能見完整形狀, 主要為桿狀或分葉形等, 分葉核多, 常見2—3葉, 核偏于細胞一側或貼細胞膜, 細胞核內染色質致密, 被染色為藍紫色, 無核仁。細胞質豐富, 充滿了大小均勻的圓形橘紅色嗜酸性顆粒, 數量不盡相同, 細胞表面?？梢婏枬M顆粒溢出胞膜。未見到嗜酸早幼粒細胞和中幼粒細胞。

單核細胞單核細胞呈橢圓形、不規(guī)則形或圓形, 細胞較大, 核質比介于中性粒細胞和淋巴細胞之間, 在血涂片中數量極少(圖版Ⅰ-11—14)。細胞核形狀多樣, 包括腎形、馬蹄形、分葉或不規(guī)則等, 略偏于細胞一側, 染色質多疏松網狀, 染色呈淡紫紅色或淡紫色, 無核仁。細胞質較豐富, 細胞質被染色為灰藍色或藍色, 染色不均勻且可見有些胞漿內含有空泡(圖版Ⅰ-12、13)。在顯微鏡下, 單核細胞和嗜中性粒細胞有時難以區(qū)分, 差異詳見表 4。

血栓細胞血栓細胞呈長桿形、圓形或橢圓形, 表面大部分光滑, 僅2端常有放射狀延長突出,細胞較小, 核質比變化大, 其數量接近淋巴細胞, 在血涂片中多為單個出現, 有時數個聚集在一起成團出現(圖版Ⅰ-15—17)。細胞核呈長桿形、橢圓形或腎形等, 位于細胞中央, 少數偏位, 細胞核內染色質致密, 被染色為紫紅色。細胞質胞漿量隨細胞的不同形狀差別大, 長桿狀細胞的胞漿量近2倍于細胞核, 圓形或橢圓形僅一薄層包裹細胞核, 細胞質染色較淡, 呈粉紅色。另, 外周血中常見到正在分裂或剛形成的血栓細胞(圖版Ⅰ-17)。

2.3　電鏡觀察結果

電鏡下可觀察到細胞類型有六大類, 包括紅細胞、血栓細胞、淋巴細胞、Ⅰ型粒細胞、Ⅱ型粒細胞、單核細胞。

紅細胞紅細胞質膜表面大部分較平滑, 個別部位出現質膜內褶。細胞質電子密度低, 可見到少量線粒體或個別部位電子密度略高(圖版Ⅱ-1、2)。核周間隙明顯, 核孔多個且清晰, 異染色質呈團塊狀沿核膜分布和分散在核內, 未見到核仁。

淋巴細胞淋巴細胞質膜表面常形成細小的圓形或指狀突起(圖版Ⅱ-3)。細胞質電子密度高于紅細胞, 環(huán)繞著幾乎占據整個細胞的細胞核, 胞質有豐富的細胞器包括內質網、線粒體、溶酶體、游離核糖體以及個別空泡(圖版Ⅱ-4); 核周間隙不明顯, 核孔清晰, 異染色質呈帶狀或塊狀。也有部分淋巴細胞質膜延伸成長突起或形成褶皺, 或胞漿散出, 可見大量胞吞作用。

Ⅰ型(嗜中性)粒細胞Ⅰ型(嗜中性)粒細胞質膜表面常有細長或粗大的突起。細胞質含大量分散的特殊小顆粒, 呈長短不一的桿狀或長橢圓形等, 直徑0.2—1 μm不等, 顆粒電子密度高, 由膜包被, 內涵物均勻(圖版Ⅱ-9、13、14)。溶酶體電子密度較低, 呈大小不一的圓形, 內涵物均勻。細胞質中還有豐富的線粒體、粗面內質網、高爾基體及游離核糖體等細胞器(圖版Ⅱ-10—12)。核膜清晰, 異染色質疏松。?？梢姲|中有多個胞吞過程或形成的空泡, 并發(fā)現特殊顆粒的胞吞作用(圖版Ⅱ-10)。

Ⅱ型(嗜酸性)粒細胞Ⅱ型(嗜酸性)粒細胞質膜表面形成大量細小的指狀突起或膜包被游離至細胞外。細胞質含大量的特殊大顆粒, 幾乎覆蓋整個細胞, 多數呈圓形或近圓形, 直徑0.5—2 μm不等, 顆粒電子密度深, 由膜包被, 內含物均勻。溶酶體電子密度較低, 明顯小于特殊顆粒, 呈大小不一的圓形, 內涵物均勻(圖版Ⅱ-17、18)。細胞質中還有豐富的線粒體、粗面內質網、高爾基體、溶酶體及游離核糖體等細胞器(圖版Ⅱ-19)。細胞核小,偏向一側, 核膜核孔清晰, 異染色質疏松呈塊狀。

單核細胞單核細胞質膜表面有指狀或短粗突起, 細胞多變形。細胞質含大量的溶酶體和顆粒, ?？梢姶罅靠张?圖版Ⅱ-5—8)。溶酶體電子密度不一, 大小不等, 個別呈空泡狀。核內異染色質少, 沿核膜分布。少見到顆粒。

血栓細胞血栓細胞質膜表面一端或兩端常形成長指狀突起。細胞質電子密度較低, 含許多小空泡或幾個電子密度極高的顆粒, 部分空泡開口于細胞表面。核膜清晰, 異染色質呈帶狀沿核膜分布(圖版Ⅱ-15、16)。

3　討論

3.1　血細胞的組成與大小

血細胞的組成受到魚體大小、發(fā)育階段、營養(yǎng)水平、環(huán)境條件、應激水平以及采血過程等多種因素影響[13], 本次血液樣本的采集中嚴格控制操作時間與過程, 所有樣本在采樣前均已在養(yǎng)殖池體內養(yǎng)殖多年, 并經過長時間的親和訓練和捕撈訓練,以減少人為或應激對血液指標的影響, 同時對樣本進行血清皮質醇檢測以判斷受應激程度[14]。

表 4　嗜中性粒細胞和單核細胞形態(tài)比較Tab. 4　The morphological differences between Neutrophil and Monocyte

魚類的血細胞一般包括紅細胞、血栓細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞以及單核細胞7大類[1]。本次結果顯示中華鱘外周血中包括6類細胞類型, 各類型細胞分別有不同種核型結構或處于不同時期, 其中紅細胞比例最高, 白細胞和血栓細胞較少。其血細胞密度遠低于黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)、羅非魚、軍曹魚(Rachycecentron canadum)、斜帶石斑魚(Epfnephelus coioides)、革胡子鯰(Clarias gariepinus)等[14—18]; 紅細胞密度較達氏鰉(Huso dauricus)、高首鱘、歐洲鰉、納氏鱘等鱘魚低[3—7], 與史氏鱘接近[8], 而白細胞的密度較上述幾類鱘魚均低[3—8], 表明其抵抗力相對較弱。研究認為魚類活動能力越強, 紅細胞數比較高, 這與它們的生活習性相一致[19]。白細胞中以淋巴細胞為主, 數量最多, 其次是中性粒細胞和單核細胞, 酸性粒細胞數量極少,這與多數淡水養(yǎng)殖魚類一致[19]。粒細胞中未發(fā)現嗜堿性粒細胞, 這與達氏鰉、高首鱘、史氏鱘、淡水石斑(Cichlasoma managuense)等結果一致[2,6—8,20];而美國紅魚(Sciaenops ocellatus)、犬牙韁蝦虎魚(Amoya caninus)、斑點叉尾鲙(Ietalurus punetaus)、長鰭裸頰鯛(Lethrinus erythropterus)的外周血液中均發(fā)現嗜堿性粒細胞[2,21—23]。有學者認為嗜堿性粒細胞的嗜堿性顆粒極易溶于水, 制片過程中易解體難見到[20], 也可能與發(fā)育的不同時期以及生活環(huán)境有關, 對此需進一步研究。本結果顯示血栓細胞數量個體間波動極大, 受操作過程影響明顯, 且未見明顯的吞噬作用, 因此在白細胞分類計數時不予列入。

不同年齡的血細胞組成結果顯示, 18齡中華鱘紅細胞和白細胞均與其他齡組有差異, 可能與其接近性成熟或處于性腺快速發(fā)育時期有關, 該階段特殊營養(yǎng)需求及能耗水平導致血細胞組成差異性[1,2];野生成熟中華鱘、4齡中華鱘的白細胞組成分別與其他年齡組存在顯著差異, 分析野生成熟個體與人工養(yǎng)殖個體免疫機能差異顯著性, 而子二代中華鱘因技術、種質等因素免疫力更弱[9,12], 這也為我們養(yǎng)殖中如何提高魚體免疫提出更高要求。在本次結果中11齡中華鱘血細胞差異性可能與樣本數量有關, 需進一步研究。

中華鱘外周血細胞的測量結果顯示單核細胞和嗜中性粒細胞個體最大, 大小接近, 其次是嗜酸性粒細胞和大淋巴細胞, 酸性粒細胞的大小差異極小, 血栓細胞和小淋巴細胞最小。中華鱘血細胞個體明顯大于達氏鰉等幾種鱘魚[2—8], 以及黃顙魚、羅非魚、美國紅魚、淡水石斑等多數硬骨魚類[14,16,20,21]。脊椎動物中血細胞的大小與其進化程度高低相一致, 一般認為, 進化地位越高等的動物, 紅細胞越小,數量越多, 因為紅細胞體積的縮小會帶來表面積的增加, 起到提高呼吸機能的作用[15]。本次研究顯示中華鱘的細胞大于多數魚類及部分鱘魚, 細胞密度也較低, 表明其進化程度較其他鱘魚更低, 顯示其古老性。

3.2　血細胞形態(tài)與功能

魚類成熟紅細胞為橢圓形的中心凸出的細胞,具有細胞核。對魚類的研究結果顯示原紅細胞到成熟紅細胞, 胞體及胞核均由大變小, 形態(tài)由圓形變?yōu)闄E圓形, 核固縮濃染[14—24], 中華鱘外周血紅細胞多為橢圓形成熟紅細胞, 偶爾見到圓形的原紅細胞。對軍曹魚研究發(fā)現紅細胞直接分裂現象但甚少[24], 高澤霞等[10]在1齡中華鱘中觀察到該現象, 本次研究中極少見到, 可見個體間或不同生長階段有差異, 說明紅細胞主要由造血器官產生后釋放入外周血液, 極少數靠直接分裂產生。中華鱘紅細胞個體較其他魚類大, 數量少, 表明其攜氧能力相對低,這與本作者關于中華鱘的行為活動緩慢的研究結論一致[25]。中華鱘紅細胞胞質中?？梢妿讉€線粒體等細胞器, 表明其紅細胞的代謝活動水平相對較高, 其他魚類紅細胞胞質中多無細胞器[26], 一般認為是因為紅細胞在成熟的過程中, 血紅蛋白逐漸增多, 為獲得更多的空間, 細胞內的細胞器也逐漸退化消失, 這種結構特點可使紅細胞自身的代謝率大大降低, 利于相關氣體運輸, 由此可見中華鱘紅細胞氣體運輸能力相對較低, 進化等級低。

淋巴細胞是免疫細胞的重要組成部分, 本次研究發(fā)現中華鱘的淋巴細胞分為大淋巴細胞和小淋巴細胞2大類, 除了細胞直徑顯著差別外, 在形態(tài)結構上差別較小, 表面均有大量的偽足或突起, 且常見發(fā)生變形, 一般認為吞噬反應發(fā)生時細胞伸出偽足包圍細菌、衰老細胞等異物; W-G染色結果顯示大淋巴細胞核染色略淺, 胞漿更豐富, 且大淋巴細胞胞質中出現空泡的幾率高于小淋巴細胞, 而空泡主要為吞噬物被溶解后形成, 也顯示大淋巴細胞的活躍性更高, 該分類法與一些研究結果一致[7,14,15]。有些研究將淋巴細胞分為大、小2類分別描述[7], 本次研究認為中華鱘大小淋巴細胞可能代表了同種細胞的不同功能狀態(tài), 有學者表示當處于靜息不活躍狀態(tài)的小淋巴細胞遇到抗原刺激時, 將轉變成代謝活躍并能進行增殖的大淋巴細胞, 此時細胞核增大, 染色質致密, 細胞質增多, 重新分裂和分化進行免疫應答[27], 可見不同的形態(tài)結構決定了其不同的功能。

中華鱘粒細胞主要有嗜中性和嗜酸性2類, 核型種類較多, 有些魚類中性粒細胞核型單一, 少見到3葉及以上[15], 分析與細胞功能機制的進化地位有關系。中性粒細胞具有吞噬性, 存在于所有硬骨魚類血液中, 能做變形運動, 參與機體的炎癥反應,大多數出現在炎癥的初期, 其功能可能是產生細胞因子和補充免疫細胞到達損傷處[15,28,29]。吞噬作用在本研究中多有發(fā)現, 本次觀察中發(fā)現胞質中特殊顆粒有吞噬作用, 這點未見報道。中華鱘嗜酸性粒細胞形狀極規(guī)則, 直徑變異系數小, 數量穩(wěn)定, 未見到有吞噬作用的細胞, 分析嗜酸性細胞并非中華鱘主要免疫細胞。一般認為嗜酸性粒細胞與應激反應刺激—腎上腺皮質系統(tǒng)有關, 在寄生蟲感染和變態(tài)反應性疾病中, 還可能與吞噬異物有關[30]。

單核細胞存在于所有脊椎動物中, 擔負著非特異性免疫的重要作用。中華鱘單核細胞胞核形狀多樣, 細胞有較多的胞突和胞質含有空泡和吞噬物,說明其有較強的變形與吞噬能力, 這在鱖(Siniperca chuitsi)、鯉(Cyprinus carpio)、軍曹魚、歐洲鰻鱺(Anguilla anguilla)等多種魚類已得到證實[15,31—33]。本次研究顯示在外周血液中, 單核細胞和嗜中性粒細胞中出現吞噬作用的細胞所占比例高于淋巴細胞, 有研究顯示特異性反應的淋巴細胞較非特異性的單核細胞和粒細胞發(fā)揮作用遲[34]。

魚類血栓細胞在功能上與哺乳動物的血小板類似參與凝血過程, 在鯉、鱖等魚類的血栓細胞內發(fā)現有類似于血小板內血栓粒的顆粒存在[31,32], 但兩者在形態(tài)和來源上卻迥然不同, 魚類血栓細胞形態(tài)和淋巴細胞相似, 它的來源還沒有定論[24], 中華鱘未見相關報道。中華鱘血栓細胞形態(tài)多樣, 胞質中常形成細小的空泡結構, 這與軍曹魚等的研究結果較一致[26], 細小空泡及長偽足及黏連等超微結構均表明其參與凝血功能, 未觀察到吞噬作用, 對于血栓細胞是否具有吞噬性存在爭議[27,35,36]。其他功能可能存在種的差異性, 有待進一步研究。本次觀察到大量正在分裂或剛分裂形成的血栓細胞, 可見外周血中可直接形成。

魚類的血液學指標值不僅與魚的種類、生活環(huán)境和營養(yǎng)有關, 還與性別和健康狀況有關, 本文未對不同性別、不同發(fā)育階段或疾病異常狀況下的血細胞組成和大小進行研究, 需進一步完成。本次實驗結果可為中華鱘的健康監(jiān)測以及保育研究提供基礎依據, 同時豐富動物血細胞研究相關領域。

參考文獻：

[1]Zhou Y, Guo W C, Yang Z G. The progress of studies on fish blood cells [J]. Chinese Journal of Zoology, 2001,36(6)： 55—57 [周玉, 郭文場, 楊振國. 魚類血細胞研究進展. 動物學雜志, 2001, 36(6)： 55—57]

[2]Zinkl J G, Cox W T, Kono C S. Morphology and cytochemistry of leucocytes and thrombocytes of six species of fish [J]. Comparative Clinical Pathology, 1991, 1(4)：187—195

[3]Bahmani M, Kazemi R, Donskava P. A comparative study on hematological features in young reared sturgeons (Acipenser persicus and Huso huso) [J]. Fish Physiology and Biochemistry, 2001, 24(2)： 135—140

[4]Martinez-A′lyaarez R M, Hidalgo M C, Domezain A, et al. Physiological changes of sturgeon, Acipenser naccarii,caused by increasing environmental salinity [J]. Journal of Experimental Biology, 2002, 205(23)： 699—706

[5]Baker D W, Wood A M, Lityak M K, et al. Hematology of juvenile Acipenser oxyrinchus and Acipenser brevirostrum at rest and following forced activity [J].Journal of Fish Biology, 2005, 66(1)： 208—221

[6]Asad M Z, Mohammad A J, Mohammad S, et al. Hematology of great sturgeon (Huso huso Linnaeus, 1758) juvenile exposed to brackish water environment [J]. Fish Physiology and Biochemistry, 2010, 36(3)： 655—659

[7]Zhou Y, Pan F G, Li Y S, et al. Morphological study on peripheral blood cells of Kalugaa, Huso dauricus [J].Journal of Fishery Sciences of China, 2006, 13(3)： 480—484 [周玉, 潘風光, 李巖松, 等. 達氏鰉外周血細胞的形態(tài)學研究. 中國水產科學, 2006, 13(3)： 480—484]

[8]Liu H B, Hua Y P, Qu Q Z, et al. Microstructure and ultrastructure of peripheral blood cells of Amur sturgeon Acipenser schrencki Brandt [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2006, 30(2)： 214—220 [劉紅柏, 華育平, 曲秋芝,等. 史氏鱘外周血細胞的顯微及超微結構. 水生生物學報, 2006, 30(2)： 214—220]

[9]Wei Q W, Li L X, Du H, et al. Research on technology for controlled propagation of cultured Chinese sturgeon(Acipenser sinensis) [J]. Journal of Fishery Science of China, 2013, 20(1)： 1—11 [危起偉, 李羅新, 杜浩, 等. 中華鱘全人工繁殖技術研究. 中國水產科學, 2013, 20(1)：1—11]

[10]Gao Z X, Wang W M, Yang Y, et al. Morphological studies of peripheral blood cells of the Chinese sturgeon,Acipenser sinensis [J]. Fish Physiology and Biochemistry,2007, 33(3)： 213—222

[11]Zhang Y Z, Zhang X Y, Wang Y P. The bacteria distribution and sterilization effect of four kinds of natural baits for cultured Acipenser sinensis [J]. Freshwater Fisheries,2014, 44(3)： 90—94 [張艷珍, 張曉雁, 王彥鵬. 養(yǎng)殖中華鱘鮮餌細菌分布及滅菌效果的研究. 淡水漁業(yè), 2014,44(3)： 90—94]

[12]Zhang X Y, Du H, Wei Q W, et al. The post-spawned recovery of cultured Chinese sturgeon Acipenser Sinensis[J]. Acta Hyrobiologica Sinica, 2015, 39(4)： 705—713[張曉雁, 杜浩, 危起偉, 等. 養(yǎng)殖中華鱘的產后康復. 水生生物學報, 2015, 39(4)： 705—713]

[13]Barton B A, Iwama G K. Physiological changes in fish from stress in aquaculture with emphasis on the response and effects of corticosteroids [J]. Annual Review of Fish Diseases, 1991, 1(1)： 3—26

[14]Liu X L, Yan A S. Light and electron microscopic observations on the peripheral blood cells of yellow catfish,Pelteobagrus fulvidraco (Bagridae： Teleostei) [J]. Journal of Huazhong Agricultural University (Natural Science Edition), 2006, 25(6)： 659—663 [劉小玲, 嚴安生.黃顙魚外周血細胞的組成及其顯微與超顯微結構. 華中農業(yè)大學學報(自然科學版), 2006, 25(6)： 659—663]

[15]Chen G, Zhou H, Zhang J D, et al. Hematological study and observation on development of blood cells in Cobia Rachycentron canadum [J]. Acta Hyrobiologica Sinica,2005, 29(5)： 564—570 [陳剛, 周暉, 張健東, 等. 軍曹魚血液指標及血細胞發(fā)生的觀察. 水生生物學報, 2005,29(5)： 564—570]

[16]Fu L R, Chen X G, Li X C, et al. Comparative Observation of microstructure of peripheral blood cells in Oreochromis niloticu and hybrid tilapia [J]. Hubei Agricultural Sciences, 2008, 47(9)： 1065—1068 [傅麗容, 陳學光,黎學春, 等. 兩種羅非魚外周血細胞顯微結構比較觀察.湖北農業(yè)科學, 2008, 47(9)： 1065—1068]

[17]Zhang H F, Wang Y X, Lin L, et al. Study on hematic properties and biochemical indices of Epinephelus coioides [J]. Journal of South China Normal University(Natural Science Edition), 2004, 1： 102—107 [張海發(fā), 王云新, 林蠡, 等. 斜帶石斑魚血液性狀及生化指標的研究. 華南師范大學學報(自然科學版), 2004, 1：102—107]

[18]Olufayo M O. Haematological characteristics of Clarias gariepinus (Burchell 1822) juveniles exposed to derris elliptica root powder [J]. African Journal of Food Agriculture Nutrition and Development, 2009, 9(3)： 920—933

[19]Lin G H, Zhang F W, Hong Y J, et al. Hematological study of two years old silver carp Hypophthalmichthys molirtix and bighead carp Aristichthys nobilicx [J]. Acta Hyrobiologica Sinica, 1998, 22(1)： 9—16 [林光華, 張豐旺, 洪一江, 等. 二齡鰱和鳙血液的比較研究. 水生生物學報, 1998, 22(1)： 9—16]

[20]Gu S Y, Du Y. Observation of development of blood cells in jaguar guapote Cichlasoma managuense [J]. Fisheries Science, 2008, 27(4)： 179—183 [顧曙余, 杜寅. 淡水石斑魚血細胞發(fā)生的觀察. 水產科學, 2008, 27(4)：179—183]

[21]Chen G, Zhou H, Ye F L, et al. A hematological study and observation on development of blood cells in American red fish (Sciaenops ocellatus) [J]. Journal of Tropical Oceanography, 2006, 25(2)： 59—65 [陳剛, 周暉, 葉富良, 等. 美國紅魚血細胞觀察. 熱帶海洋學報, 2006,25(2)： 59—65]

[22]Ye N, Luo J, Cao F J, et al. Microscopic structures of the peripheral blood cells in the Amoya caninus [J]. Journal of Aquaculture, 2013, 34(1)： 32—36 [葉寧, 羅杰, 曹伏君, 等. 犬牙韁蝦虎魚外周血細胞的顯微結構. 水產養(yǎng)殖, 2013, 34(1)： 32—36]

[23]Shi S L, Cao F J, Chen S, et al. Microstructure of peripheral blood cells in Lethrinus erythropterus [J]. Marine Fisheries, 2014, 36(5)： 418—423 [師尚麗, 曹伏君, 陳思,等. 長鰭裸頰鯛外周血細胞的顯微結構. 海洋漁業(yè),2014, 36(5)： 418—423]

[24]Su Y L, Xu L W, Feng J, et al. Study on the morphology of peripheral blood cells of juvenile cobia Rachycentron canadum [J]. South China Fisheries Science, 2007, 3(1)：48—53 [蘇友祿, 徐力文, 馮娟, 等. 軍曹魚稚魚外周血細胞及其形態(tài)學觀察. 南方水產, 2007, 3(1)： 48—53]

[25]Zhang Y Z, Zhang X Y, Wang Y P, et al. Free-swimming velocity and respiratory frequency related to the age and gonadual development of Chinese sturgeon(Acipenser sinensis Gray 1835) in aquarium [J]. Chinese Journal of Zoology, 2017, 52(4)： 680—684 [張艷珍, 張曉雁, 王彥鵬, 等. 水族館不同年齡與發(fā)育狀況的中華鱘呼吸頻率及自發(fā)游速的觀察. 動物學雜志, 2017,52(4)： 680—684]

[26]Jin L, Zhao N, Huang L, et al. Structure and cytochemical characteristics of blood cells in Myxocyprinus Asiaticus [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2011, 35(3)：550—556 [金麗, 趙娜, 黃林, 等. 胭脂魚外周血細胞的顯微、超微結構與細胞化學觀察. 水生生物學報, 2011,35(3)： 550—556]

[27]Ellis A E. The leucocytes of fish： a review [J]. Journal of Fish Biology, 1977, 11(1)： 453—491

[28]Zhao F Q, Cao J L. Advance on development and analysis on economic outlook of blood cells in teleostean [J].Chinese Fisheries Economics, 2007, (3)： 30—33 [趙鳳岐, 曹謹玲. 硬骨魚血細胞發(fā)生的研究進展及經濟前景分析. 中國漁業(yè)經濟, 2007, (3)： 30—33]

[29]Rombout J M, Huttenhuish B T, Picchietti S, et al. Phylogeny and ontogeny of fish leucocytes [J]. Fish and Shellfish Immunology, 2005, 19(5)： 441—455

[30]Wu M Q. Diagnostic Manual of Veterinary Laboratory[M]. Jiangsu： Jiangsu Science and Technology Press.2009, 63—64 [吳敏秋. 獸醫(yī)實驗室診斷手冊. 江蘇： 江蘇科學技術出版社. 2009, 63—64]

[31]Yuan S Q, Zhang Y A, Yao W J, et al. Micro and ultrastructure of peripheral blood cells of the Mandarin fish,Siniperca chuatsi (Basilewsky) [J]. Acta Hyrobiologica Sinica, 1998, 22(1)： 39—47 [袁仕取, 張永安, 姚衛(wèi)建,等. 鱖魚外周血細胞顯微和亞顯微結構的觀察. 水生生物學報, 1998, 22(1)： 39—47]

[32]Feng H L, Li W W, Wang T H, et al. Observation on the micromorphological and supermicromorphological structures of the blood cell of carp [J]. Journal of Fisheries of China, 1991, 15(3)： 241—244 [馮懷亮, 李文武, 王鐵恒,等. 鯉魚血細胞顯微和亞顯微結構的觀察. 水產學報,1991, 15(3)： 241—244]

[33]Zhou Y, Guo W G, Yang Z G, et al. Microstructure and Ultrastructure of the peripheral blood cells of European eel (Anguilla anguilla) [J]. Acta Zoologica Sinica, 2002,48(3)： 393—401 [周玉, 郭文場, 楊振國, 等. 歐洲鰻鱺外周血細胞的顯微和超微結構. 動物學報, 2002, 48(3)：393—401]

[34]Shan H, Zhang Q Z, Liu Q P, et al. Changes of cell immunity index in blood of southern catfish, Silurus meridionalis, immunized by formalin-killed Aeromonas hydrophila [J]. Journal of Fishery Science of China, 2005,12(3)： 275—280 [單紅, 張其中, 劉強平, 等. 滅活菌苗免疫的南方鲇外周血液細胞免疫指標的變化. 中國水產科學, 2005, 12(3)： 275—280]

[35]Barber D L, Millis W J E, White M G. The blood cells of the antarcitic icefish Chaenocephalus aceratus Lonnberg：light and electron microscopic abservations [J]. Journal of Fish Biology, 1981, 19(1)： 11—28

[36]Ferguson H W, Claxton M J, Moccia R D, et al. The quantitative clearance of bacteria from the bloodstream of rainbow trout (Salmo gairdne) [J]. Veterinary Pathology,1982, 19(1)： 687—699

圖版Ⅰ　光鏡下血細胞形態(tài)圖PlateⅠ　The morphology of blood cells under Light Microscopic

圖版Ⅱ　電鏡下血細胞形態(tài)PlateⅡ　The morphology of blood cells under Electron Microscopic