虞順年　魏小嵐,　韋芳三　肖雅元　李純厚

(1. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所, 農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 510300; 2. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院, 上海 201306; 3. 貴州省水產(chǎn)研究所, 貴陽(yáng) 550025)

黑鯛(Sparus macrocephalus)屬鱸形目、鯛科、鯛屬, 俗稱有海鮒、黑立、烏格等, 為近岸暖水性魚類, 廣泛分布于我國(guó)沿海, 其營(yíng)養(yǎng)豐富, 肉質(zhì)鮮美, 是大亞灣主要優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟(jì)魚類之一。因其具有適溫、適鹽性強(qiáng), 食性廣, 生長(zhǎng)迅速, 移動(dòng)范圍小等特點(diǎn), 成為沿海增殖放流的優(yōu)良品種, 對(duì)生態(tài)修復(fù)和增加資源量都有重要作用[1,2]。

目前, 大量增殖放流實(shí)踐表明除了少數(shù)成功案例, 絕大多數(shù)漁業(yè)生物資源的增殖放流并沒(méi)有達(dá)到預(yù)期的效果[3], 造成這樣收效甚微的因素包括許多方面, 其中放流后魚種的存活率低是主要因素之一。游泳運(yùn)動(dòng)是魚類生存和繁殖決定性因素, 是其攝食、逃避敵害等行為的主要方式[4]。養(yǎng)殖生產(chǎn)繁育的苗種在集約化養(yǎng)殖條件下, 活動(dòng)空間受到了限制, 游泳活動(dòng)強(qiáng)度減少, 造成魚體脂肪累積、抗應(yīng)激能力和免疫力下降[5,6]等, 導(dǎo)致魚種在放流后無(wú)法快速適應(yīng)外界環(huán)境脅迫, 從而影響放流效果。因此, 如何增強(qiáng)放流生物的機(jī)體免疫機(jī)能對(duì)提高放流生物放流后在自然環(huán)境的生存能力具有重要意義。大量研究表明, 放流前對(duì)魚種進(jìn)行適度的游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能有效地改善魚體的生理機(jī)能, 增強(qiáng)免疫能力, 提高野外存活率[7—9]。中華倒刺鲃在1.0 bl/s流速下訓(xùn)練8周后, 免疫參數(shù)得到提高, 免疫細(xì)胞的數(shù)量及抗體含量均增加, 氧化應(yīng)激水平和炎癥水平則顯著降低, 從而增強(qiáng)魚體抗病毒感染的能力[10]。宋波瀾[11]在對(duì)紅鰭銀鯽的研究中發(fā)現(xiàn)一定強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)SOD的活性有顯著提升作用, 說(shuō)明適當(dāng)運(yùn)動(dòng)鍛煉有助于其抗氧化機(jī)能的提升。因此, 本研究以黑鯛為研究對(duì)象, 在不同水流強(qiáng)度下誘導(dǎo)其游泳運(yùn)動(dòng), 探討游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)其生長(zhǎng)、存活率、血清生化指標(biāo)和肝臟抗氧化機(jī)能的影響, 以期為提高漁業(yè)資源增殖養(yǎng)護(hù)效果提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　實(shí)驗(yàn)魚種

黑鯛來(lái)源于深圳南澳魚苗繁育基地同一批次孵化魚苗, 正式訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)開始前在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)暫養(yǎng)兩周。養(yǎng)殖水溫控制在(26±0.5)℃, 溶氧水平大于6 mg/L, 光照周期為12L∶12D。暫養(yǎng)期間每天在靜水中過(guò)量投喂人工飼料2次(9：00和17：00)(海水魚配合飼料, 廣東越群海洋生物研究開發(fā)有限公司), 飼料營(yíng)養(yǎng)成分： 粗蛋白≥45%、粗脂肪≥6%、粗纖維≤5%、粗灰分≤18%、鈣≥2.5%、總磷≥1.2%、水分≤12%、賴氨酸≥2.2%。

1.2　實(shí)驗(yàn)裝置

采用自行設(shè)計(jì)的循環(huán)水運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練裝置(圖1)。訓(xùn)練裝置分為上下兩層, 上層為環(huán)形魚類運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練區(qū)域, 下層為動(dòng)力區(qū)域。動(dòng)力由潛水泵提供, 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練區(qū)域有底部有兩條平分環(huán)形訓(xùn)練區(qū)域的反向噴水管, 水泵帶動(dòng)水流從噴水管流出, 產(chǎn)生穩(wěn)定環(huán)形水流, 實(shí)驗(yàn)中通過(guò)調(diào)控水閥控制水泵出水量來(lái)控制裝置內(nèi)水流速度, 流速大小用LS300-A型便攜式流速儀測(cè)定。

圖1　實(shí)驗(yàn)裝置示意圖Fig. 1　Schematic Diagram of the Experiment Set-up

1.3　實(shí)驗(yàn)方法

挑選健康及大小相當(dāng)?shù)暮邗燵體長(zhǎng)(6.75±0.03) cm,體重(11.56±0.15) g]分別置于水流速度為0.0、1.0、2.0和4.0 bl/s(體長(zhǎng)/秒)4個(gè)實(shí)驗(yàn)組中, 每組3個(gè)平行,每個(gè)平行30尾魚, 所有平行一起開始為期2周的實(shí)驗(yàn)。為了減少生理脅迫, 正式訓(xùn)練前逐步提高水流強(qiáng)度, 直至達(dá)到正式訓(xùn)練所需的游泳條件, 每天訓(xùn)練12h(8：00—20：00)。訓(xùn)練期間每天過(guò)量飼喂2次(9：00、17：00), 飼喂期間各組的水流環(huán)境保持靜水狀態(tài), 飼喂后1h清理訓(xùn)練區(qū)域內(nèi)的殘餌糞便, 然后各訓(xùn)練組訓(xùn)練區(qū)域水流速度恢復(fù)至對(duì)應(yīng)強(qiáng)度, 除水流強(qiáng)度不一致外, 其他條件保持一致。實(shí)驗(yàn)期間, 訓(xùn)練裝置日換水量約為馴化水體的15%, 實(shí)驗(yàn)水體水溫為(26±0.5)℃, pH為8.32±0.02, 溶氧為(6.4±0.3) mg/L。訓(xùn)練結(jié)束后, 對(duì)所有實(shí)驗(yàn)魚禁食1d, 每個(gè)平行組隨機(jī)選取4尾魚, 進(jìn)行體長(zhǎng)和體重測(cè)量, 然后用2.5 mL無(wú)菌注射器從尾靜脈抽血。血樣在4℃冰箱中靜置2h后, 以4℃ 3000 r/min離心10min, 吸取上層血清,-80℃保存。抽血后將魚置于冰上迅速解剖取其肝臟, 先在預(yù)冷的生理鹽水中洗凈血液, 并用濾紙吸干水分, 置于-80℃超低溫冰箱中保存。

1.4　生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

每天觀察并記錄魚的死亡數(shù)量。實(shí)驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組魚的體質(zhì)量, 分別按下式計(jì)算成活率(Survival rate)、特定生長(zhǎng)率(Specific growth rate)、增重率(Weight gain rate)、肝體比(Hepato somatic index)、臟體比(Viscero somatic index)、肥滿度(Conditlon factor)：

式中, N0為初魚尾數(shù); Nt為末魚尾數(shù); W0(g)為初體均重; Wt(g)為末體均重; t (d)為訓(xùn)練天數(shù); Wb(g)為每尾魚末體重; L (cm)為每尾魚末體長(zhǎng); Wh(g)為每尾魚末肝臟重; Wv(g)為每尾魚末內(nèi)臟重。

1.5　血液生化指標(biāo)測(cè)定

測(cè)定前取出在-80℃保存的血清在4℃條件下融化, 血糖(GLU)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)采用全自動(dòng)生化分析儀(7600型號(hào), 日本日立公司)測(cè)定。

總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、還原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、蛋白質(zhì)羰基、抑制羥自由基能力、溶菌酶(LZM)、過(guò)氧化氫(H2O2)采用試劑盒測(cè)定, 上述指標(biāo)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.6　肝臟生化指標(biāo)測(cè)定

取出在-80℃保存的肝臟組織塊與4℃自然解凍, 按1∶9 (g∶mL)的質(zhì)量體積比加入0.86%的預(yù)冷生理鹽水, 冰浴勻漿后于4℃以3000 r/min離心10min,取上清用于總抗氧化能力(T-AOC)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、還原型谷胱甘肽(GSH)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)的測(cè)定。上述指標(biāo)均使用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定。

1.7　統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA), 若組間存在顯著差異則再進(jìn)行LSD多重比較, 統(tǒng)計(jì)值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示, 顯著水平定為P＜0.05。

2　結(jié)果

2.1　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛生長(zhǎng)及存活率的影響

如表1所示, 黑鯛的初體均重為(11.56±0.15) g,在2周游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練結(jié)束后, 對(duì)照組的體質(zhì)量、特定生長(zhǎng)率(SGR)和增重率(WGR)都顯著大于其余3組(P＜0.05), 而各訓(xùn)練組間并無(wú)顯著性差異。不同的游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)肝體比(HSI)、臟體比(VSI)和肥滿度(CF)并沒(méi)有顯著性影響。訓(xùn)練期間, 除4 bl/s訓(xùn)練組外其余3組并未出現(xiàn)黑鯛死亡現(xiàn)象, 4 bl/s訓(xùn)練組的成活率僅為93.3%(P＜0.05)。

2.2　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛血清生化指標(biāo)的影響

經(jīng)過(guò)2周實(shí)驗(yàn)后, 黑鯛的血糖(GLU)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)均表現(xiàn)出相似的應(yīng)答模式, 總體呈現(xiàn)為隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加先下降后上升的趨勢(shì), 在2 bl/s組達(dá)到最小值,各組間差異均存在顯著性 (P＜0.05)。不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和球蛋白(GLB)的含量具有顯著性影響(P＜0.05), 1 bl/s組和2 bl/s組均顯著高于對(duì)照組, 而4 bl/s組則顯著低于對(duì)照組。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)對(duì)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的反應(yīng)趨勢(shì)一致, 均為先降低后升高, 各組差異性水平顯著(P＜0.05)。與GPT和GOT相反, 酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)則先升高后降低, 2 bl/s組最高, 4 bl/s最低, 與對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)(表2)。

2.3　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛血清抗氧化指標(biāo)的影響

游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)黑鯛血清總抗氧化能力(TAOC)有較為明顯的提升作用, 訓(xùn)練組T-AOC均高于對(duì)照組, 2.0 bl/s組與對(duì)照組具有顯著性差異(P＜0.05, 圖2A)。相比對(duì)照組, 3個(gè)訓(xùn)練組的超氧化物歧化酶(SOD)活性均出現(xiàn)不同程度的下降, 其中1 bl/s組顯著降低(P＜0.05), 訓(xùn)練組間沒(méi)有顯著性差異(圖2B)。隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加, 過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性也隨之上升, 較對(duì)照組分別提升了28.1%、34.5%和45.2%, 但差異并沒(méi)有達(dá)到顯著水平(圖2C)。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性和還原型谷胱甘肽(GSH)含量總體呈先上升后下降趨勢(shì), GSH-PX活性在2.0和4.0 bl/s組顯著高于其余兩組(P＜0.05, 圖2D), GSH含量在2.0 bl/s組最高, 顯著高于0 bl/s組和4.0 bl/s組(P＜0.05, 圖2E)。丙二醛(MDA)含量在 2.0 bl/s組最低, 各組間并沒(méi)有顯著性差異(圖2F)。

表1　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛生長(zhǎng)及存活率的影響Tab. 1　The effect of swimming exercise intensity on growth and survival rate of Sparus macrocephalus

過(guò)氧化氫(H2O2)含量在訓(xùn)練組均出現(xiàn)上升, 在4.0 bl/s組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05, 圖3A)。溶菌酶(LZM)活性的變化趨勢(shì)是先上升后下降, 在1.0 bl/s組活性最高, 訓(xùn)練組LZM活性均高于對(duì)照組, 但是差異不具有顯著性(圖3B)。2周運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練顯著提高了黑鯛血清抑制羥自由基能力, 3個(gè)訓(xùn)練組的抑制羥自由基能力顯著高于對(duì)照組(P＜0.05, 圖3C)。蛋白質(zhì)羰基含量在訓(xùn)練組均低于對(duì)照組, 各組間沒(méi)有顯著性差異(圖3D)。

2.4　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛肝臟免疫指標(biāo)的影響

黑鯛肝臟總抗氧化能力(T-AOC)在各處理組間無(wú)顯著性差異, 但訓(xùn)練組均高于對(duì)照組(圖4A)。還原型谷胱甘肽(GSH)含量在 4.0 bl/s組最高(P＜0.05),1.0 bl/s組和2.0 bl/s組均高于對(duì)照組, 但差異未達(dá)到顯著水平(圖4B)。堿性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)變化趨勢(shì)基本一致, 都是運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度增加活性增強(qiáng), AKP活性在4.0 bl/s組顯著高于其余三組(P＜0.05, 圖4C), ACP活性在2.0 bl/s組和4.0 bl/s組顯著高于其余兩組(P＜0.05, 圖4D)。CAT活性隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度增加呈上升趨勢(shì), 在4.0 bl/s組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05, 圖4E)。訓(xùn)練組MDA含量均高于對(duì)照組, 但差異未達(dá)到顯著性水平(圖4F)。

表2　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛血清生化指標(biāo)的影響Tab. 2　The effect of swimming exercise intensity on serum biochemical indices of Sparus macrocephalus

圖2　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛血清抗氧化指標(biāo)的影響Fig. 2　The effect of swimming exercise intensity on the serum antioxidant indices of Sparus macrocephalus

圖3　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛血清抗氧化指標(biāo)及溶菌酶活性的影響Fig. 3　The effect of swimming exercise intensity on the serum antioxidant indices and lysozyme activity of Sparus macrocephalus

圖4　游泳運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Fig. 4　The effect of swimming exercise intensity on the hepatic antioxidant indices of Sparus macrocephalus

3　討論

3.1　不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛生長(zhǎng)及存活率的影響

魚類游泳運(yùn)動(dòng)是其生活史的重要組成部分, 大量研究表明適度的游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)魚類的生長(zhǎng)具有積極的作用, 如缺簾魚(Brycon cephalus)[8]、金頭鯛(Sparus aurata)[12]、黃尾(Seriola lalandi)[13]、西伯利亞鱘(Acipenser baeri)[14]等在適宜強(qiáng)度訓(xùn)練下生長(zhǎng)率有了明顯提升。但是, 亦有研究表明運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練會(huì)抑制某些魚類的生長(zhǎng), 如真鯛(Pagrosomus major)[15]、劍尾魚(Xiphophorus montezumae)[16]、金帶籃子魚(Siganus rivulatus)[17]等, 本研究結(jié)果也表明運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練并不能促進(jìn)黑鯛的生長(zhǎng), 反而產(chǎn)生了抑制。推測(cè)魚類自身游泳能力與訓(xùn)練對(duì)其生長(zhǎng)的影響密切相關(guān), 黑鯛、真鯛和籃子魚屬于中下層魚類, 自身不太活躍活動(dòng)范圍較窄, 訓(xùn)練迫使其將大量能量消耗在游泳運(yùn)動(dòng)中, 用于生長(zhǎng)的能量分配減少, 從而生長(zhǎng)率低于對(duì)照組。自然界中黑鯛喜在巖礁和沙泥底質(zhì)避流生活, 本研究結(jié)果原因可能實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的訓(xùn)練強(qiáng)度過(guò)高, 若降低訓(xùn)練強(qiáng)度或許會(huì)有利于其生長(zhǎng); 此外, 訓(xùn)練設(shè)施、訓(xùn)練方式和訓(xùn)練時(shí)間等都與魚類生長(zhǎng)有密切關(guān)系, 以現(xiàn)有數(shù)據(jù)無(wú)法對(duì)其作出準(zhǔn)確解釋, 因此具體原因有待進(jìn)一步研究。研究表明, 過(guò)高的訓(xùn)練強(qiáng)度會(huì)使游泳成為不可持續(xù)和應(yīng)激性活動(dòng), 導(dǎo)致體內(nèi)能量過(guò)量消耗, 產(chǎn)生的有害物質(zhì)無(wú)法及時(shí)清除, 對(duì)魚體造成損傷, 最終導(dǎo)致魚死亡。Bengtso等[18]發(fā)現(xiàn)犬齒牙鲆(Paralichthys dentatus)在30—40 cm/s水流強(qiáng)度下的存活率顯著下降; Bagatto等[19]發(fā)現(xiàn)在5 bl/s強(qiáng)度下訓(xùn)練的斑馬魚仔魚(Danio rerio)存活率顯著降低, 本研究4.0 bl/s組結(jié)果與此一致, 表明4.0 bl/s的強(qiáng)度已經(jīng)超出黑鯛的承受范圍。

3.2　不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)能反映魚類生理代謝狀態(tài), GLU、TCHO、TG和LDL含量對(duì)監(jiān)測(cè)魚類生理健康狀況具有重要意義。已有研究表明, 適度有氧運(yùn)動(dòng)能調(diào)節(jié)GLU水平、降低TCHO、TG和LDL含量[20—22], 本研究結(jié)果也證實(shí)了適度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練(2.0 bl/s)具有調(diào)節(jié)血糖水平和降低血脂的作用。原因可能是在適宜的運(yùn)動(dòng)刺激下魚類的代謝加強(qiáng), 能促進(jìn)機(jī)體對(duì)血糖的利用和血脂的轉(zhuǎn)運(yùn); 而當(dāng)運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度(4.0 bl/s)超過(guò)魚體的負(fù)荷, 則會(huì)對(duì)機(jī)體造成損傷, 導(dǎo)致血糖和脂質(zhì)代謝功能紊亂, 從而血糖和血脂指標(biāo)上升, 影響魚類健康。血清蛋白濃度對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能有十分重要作用, 可反映機(jī)體蛋白質(zhì)代謝水平和抵抗力等[23], 本研究表明在2.0 bl/s水流強(qiáng)度下訓(xùn)練能顯著提高黑鯛血清蛋白濃度, 從而增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能。GPT和GOT主要存在于肝臟中, 只有當(dāng)肝臟受到損傷才會(huì)大量釋放到血液中, 因此其在血液中的活性升高則可能說(shuō)明肝臟受到了損傷[24]。已有研究表明, 中度有氧訓(xùn)練可以有效降低非酒精性脂肪性肝炎患者的血清GPT和GOT含量, 使其恢復(fù)正常水平[25]。在本研究中, 2.0 bl/s組GPT和GOT活性均顯著下降, 表明在該強(qiáng)度下運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能保護(hù)肝臟, 增強(qiáng)肝臟的機(jī)能。AKP和ACP的活性高低對(duì)機(jī)體代謝和免疫有重要影響, 在適宜范圍內(nèi)活性升高表明代謝機(jī)能加強(qiáng), 本研究表明2.0 bl/s運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度能顯著提高AKP和ACP活性, 有助于增強(qiáng)機(jī)體代謝和免疫機(jī)能。

3.3　不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛血清免疫指標(biāo)的影響

T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX、GSH、MDA等可以作為衡量機(jī)體免疫機(jī)能的重要指標(biāo)[26]。適度的有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可以顯著提高機(jī)體的T-AOC, 增強(qiáng)機(jī)體自由基代謝, 提高免疫機(jī)能[27], 這與本研究2.0 bl/s組的結(jié)果一致。研究表明, 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)SOD活性具有顯著增強(qiáng)作用[28], 本研究結(jié)果卻表明運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)黑鯛血清SOD活性沒(méi)有增強(qiáng)作用, 反而產(chǎn)生了抑制。原因可能是不同魚類對(duì)運(yùn)動(dòng)的響應(yīng)機(jī)制不一樣, 黑鯛在運(yùn)動(dòng)刺激下主要通過(guò)激活其他氧自由基清除途徑來(lái)達(dá)到清除氧自由基的目的。MDA和蛋白質(zhì)羰基作為脂質(zhì)過(guò)氧化和蛋白質(zhì)過(guò)氧化的敏感指標(biāo), 其含量能客觀反映機(jī)體氧化損傷的程度[29,30], 本研究結(jié)果表明中低強(qiáng)度的訓(xùn)練對(duì)MDA和蛋白質(zhì)羰基有降低作用。CAT和GSHPX對(duì)H2O2的清除具有重要作用, H2O2在體內(nèi)積累過(guò)多會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒害, 本研究中訓(xùn)練組H2O2含量均出現(xiàn)了不同程度的上升, 但MDA和蛋白質(zhì)羰基含量表明H2O2并未對(duì)機(jī)體造成氧化損傷, 說(shuō)明運(yùn)動(dòng)中產(chǎn)生的大量H2O2被活性增強(qiáng)的CAT和GSH-Px快速清除, 從而保護(hù)機(jī)體不受損傷。GSH作為主要非酶性抗氧化劑, 可以清除機(jī)體內(nèi)自發(fā)或酶促反應(yīng)產(chǎn)生的活性中間物質(zhì), 對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能起重要保護(hù)作用。在2.0 bl/s強(qiáng)度下GSH含量顯著上升, 表明該強(qiáng)度下的訓(xùn)練能有效提高黑鯛抗氧化能力。于麗娟等[31]研究表明運(yùn)動(dòng)對(duì)中華倒刺鲃GSH含量并無(wú)顯著影響, 關(guān)于運(yùn)動(dòng)后GSH含量的變化可能與魚的種類、習(xí)性等有關(guān)。LZM在魚類免疫防御系統(tǒng)中占有重要位置, LZM活性水平高低是評(píng)價(jià)環(huán)境對(duì)魚類非特異性免疫影響的有效參數(shù)。研究者發(fā)現(xiàn)紅鰭銀鯽LZM活性隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加顯著增強(qiáng)[11], 本研究中訓(xùn)練組LZM活性均有上升, 但差異不顯著, 原因可能是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的強(qiáng)度還不足以引起LZM活性變化。羥自由基是對(duì)機(jī)體組織細(xì)胞毒性最強(qiáng)的自由基, 可以直接損傷細(xì)胞膜。研究發(fā)現(xiàn), 長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可以有效降低羥自由基含量[32], 本研究同樣表明適度的運(yùn)動(dòng)可以顯著提高黑鯛機(jī)體抑制羥自由基能力, 從而顯著降低羥自由基含量, 減少肝臟組織細(xì)胞氧化損傷。

3.4　不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度對(duì)黑鯛肝臟免疫指標(biāo)的影響

肝臟是魚體物質(zhì)代謝和氧化反應(yīng)的中心, 其功能的正常維持是機(jī)體健康的保證[33]。研究表明,有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能顯著增強(qiáng)肝臟代謝水平和免疫機(jī)能[34,35]。研究認(rèn)為, 當(dāng)機(jī)體自由基含量增加時(shí), 機(jī)體自身的抗氧化能力也會(huì)隨之提升, 以此來(lái)抵御氧化損傷。于麗娟[10]的研究結(jié)果也支持該結(jié)論, 經(jīng)過(guò)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后中華倒刺鲃肝臟T-AOC的含量均有了不同程度的提升, 但各組間差異并不顯著。在本研究中, 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)黑鯛肝臟T-AOC并沒(méi)有顯著性影響, 表明黑鯛肝臟總抗氧化能力處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。GSH含量、AKP、ACP和CAT活性均隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加呈現(xiàn)上升的趨勢(shì), GSH對(duì)羥自由基、過(guò)氧化氫和單線態(tài)氧的直接清除作用對(duì)保護(hù)肝臟生物大分子有重要意義, 肝臟GSH含量的增加表明運(yùn)動(dòng)可以增強(qiáng)黑鯛肝臟對(duì)自由基的清除能力。在4.0 bl/s流速下肝臟AKP、ACP和CAT活性顯著高于對(duì)照組, 原因可能是在該強(qiáng)度下訓(xùn)練能促進(jìn)黑鯛肝臟相關(guān)酶的合成或分泌, 從而有利于肝臟代謝機(jī)能和抗氧化機(jī)能的提升。肝臟MDA含量同樣隨運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度升高而增加, 各組間無(wú)顯著性差異, 表明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度尚未對(duì)黑鯛肝臟造成明顯的氧化損傷。

對(duì)比分析發(fā)現(xiàn), 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)部分血清和肝臟抗氧化指標(biāo)均有顯著性影響, 血清抗氧化指標(biāo)在中等強(qiáng)度(2.0 bl/s)已經(jīng)出現(xiàn)明顯變化, 而肝臟抗氧化指標(biāo)則在高強(qiáng)度(4.0 bl/s)才出現(xiàn)顯著變化, 表明不同組織對(duì)運(yùn)動(dòng)刺激的響應(yīng)閾值不同, 血清相比肝臟對(duì)運(yùn)動(dòng)刺激敏感性更強(qiáng)。綜合考慮, 在水流強(qiáng)度為2.0 bl/s時(shí), 能顯著增加魚體的血清蛋白含量, 降低血脂水平, 增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。當(dāng)水流強(qiáng)度為4.0 bl/s時(shí), 運(yùn)動(dòng)組實(shí)驗(yàn)魚出現(xiàn)死亡, 雖然機(jī)體抗氧化機(jī)能有所增強(qiáng), 但是血糖、血脂水平、GOT和GPT顯著上升, 表明在高流速下機(jī)體的代謝機(jī)能已經(jīng)受到干擾。結(jié)果表明, 在放流前對(duì)黑鯛進(jìn)行適度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練(運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度2.0 bl/s), 有利于增強(qiáng)魚體健康和抗氧化機(jī)能, 提高抵抗力, 從而達(dá)到提高增殖放流效果的目的。

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