葉小玲,趙 瑩,張聲源,黃詩玲,聶 華

(嘉應(yīng)學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，廣東 梅州 514031)

香樟(Cinnamomumcamphora(L.)Presl)是一種四季常青的樟科植物。其廣泛分布于廣東、湖南等亞熱帶地區(qū)。由于其枝葉中富含右旋龍腦，使它成為提取右旋龍腦的重要原材料。右旋龍腦又名天然冰片[1]，即可外用又可內(nèi)服，外用可清熱止痛，抑菌止癢，內(nèi)服有開竅醒腦之功效，如今很多方劑中都含有冰片的成分。作為高級香料，天然冰片香氣飄逸，清香撲鼻，令人心曠神怡，素有植物麝香之美稱[2]。就目前而言，可查文獻(xiàn)中鮮有報道關(guān)于香樟揮發(fā)油的皮膚外用制劑[3-4]。就此本實(shí)驗(yàn)用水蒸氣蒸餾法提取梅州產(chǎn)香樟葉子中揮發(fā)油成分，通過氣質(zhì)聯(lián)用儀(GC-MS)分析梅州香樟揮發(fā)油中所含成分，并將其制成脂質(zhì)體凝膠供皮膚用制劑，為梅州香樟的藥用開發(fā)提供科學(xué)參考。

1 儀器與試藥

RE-5298旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞容生化儀器廠)；SHZ-D(Ⅲ) 循環(huán)水真空泵(上海東璽制冷儀器設(shè)備有限公司)；舜宇恒平FA2104S電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；明澈-D24UV純水系統(tǒng)；安捷倫6820-氣相色譜儀(長沙科美分析儀器有限公司)；粒經(jīng)分析儀(美國產(chǎn))； 5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Aglient公司)。

新鮮香樟樹葉(梅州產(chǎn))；右旋龍腦對照品(購自中國藥品生物制品鑒定所)；卵磷脂(HSPC)(上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)；膽固醇(CHS)(上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)；羧甲基纖維素鈉(北京貝麗萊日用化工廠)蒸餾水。

2 方法

2.1 水蒸氣蒸餾法制備梅州香樟揮發(fā)油[5]

采集新鮮梅州香樟樹葉粉碎，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油。稱取180g新鮮梅州香樟樹葉，水蒸氣蒸餾3.5h，收集餾出物后，加入過量無水硫酸鈉并充分振蕩，靜置20min。使用循環(huán)水式真空泵抽濾裝置對混合物進(jìn)行抽濾，得不含水分透明液體置于蒸發(fā)皿中，待溶劑揮發(fā)即得晶體。稱量，計算揮發(fā)油的得率。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析香樟揮發(fā)油成分

取2.1項(xiàng)下香樟揮發(fā)油溶解于適量正己烷，采用GC-MS分析其主要成分，各組分相關(guān)濃度通過峰面積歸一化法計算求出各化合物的峰面積相對含量。

2.3 香樟揮發(fā)油脂質(zhì)體凝膠的制備[7]

2.3.1 香樟揮發(fā)油脂質(zhì)體的制備[8-9]

精密稱取氫化大豆磷脂40mg，膽固醇6.6mg，梅州香樟揮發(fā)油5.35mg至250mL茄形燒瓶中，加入13mL的氯仿，將燒瓶置于50℃的超聲儀中溶解3min后置于常溫40℃真空120r·min-1的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1h使之均勻成膜。成膜后加入5mL的PBS緩沖溶液，繼續(xù)水化30min，再將燒瓶置于50℃的超聲儀中分散5min，靜置冷卻后定容至5mL，0.45μm微孔濾膜過濾，即得香樟提揮發(fā)油脂質(zhì)體。

2.3.2 香樟揮發(fā)油脂質(zhì)體包封率的測定[10]

2.3.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：ZB-WAX毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱流量：2.0 mL·min-1；檢測器：氫火焰離子化檢測器(FID)；載氣：N2，流量為45 mL·min-1；燃?xì)猓篐2，流量為40 mL·min-1；助燃?xì)猓嚎諝?，流量?50 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：280 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；分流進(jìn)樣。分流比為10∶1；程序升溫：初始溫度為120 ℃，保持10 min，以20 ℃·min-1升至200 ℃，保持4 min。在上述條件下，右旋龍腦峰與內(nèi)標(biāo)峰及其他雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離，分離度均>1.5，理論塔板數(shù)按右旋龍腦計算應(yīng)不低于2000。

2.3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密稱取干燥至恒重的右旋龍腦對照品0.1250 g于25 mL容量瓶中，加入無水乙醇定容至刻度，即得對照品母液。精密吸取上述對照品母液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分別置10 mL容量瓶中，各加上述內(nèi)標(biāo)液1 mL，再加無水乙醇至刻度，搖勻。取1 μL注入GC儀，最終結(jié)果以右旋龍腦濃度為橫坐標(biāo)，以右旋龍腦峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

2.3.2.3 包封率實(shí)驗(yàn)

精密吸取2.3.1項(xiàng)下所制備的脂質(zhì)體4.0mL在10000r/min的條件下離心30min，記錄上層清夜的體積，可測出游離藥含量w；取下層沉淀用1.5mL無水乙醇破膜，在5000r/min條件下離心15min，取上層清夜測含量W，并記錄體積。包封率計算公式如下：

包封率E=W/(w+W)×100%

2.3.3 香樟揮發(fā)油脂質(zhì)體粒徑的測定

將2.3.1項(xiàng)下所制備的脂質(zhì)體適量置于粒徑分析儀，測定脂質(zhì)體粒徑。

2.3.4 香樟揮發(fā)油脂質(zhì)體凝膠的制備

取適量CMC-Na，加入適量的乙醇和水，放置過夜，使其充分溶脹，攪拌均勻，得無色透明的膠狀物質(zhì)。取2.3.1項(xiàng)下脂質(zhì)體適量加入溶脹好的羧甲基纖維素鈉中，再加入2ml的甘油，研磨均勻，即得香樟提取物脂質(zhì)體凝膠。

3 結(jié)果與分析

3.1 梅州香樟揮發(fā)油的提取及其化學(xué)成分

采用水蒸氣蒸餾法對新鮮的梅州香樟樹葉進(jìn)行提取，計算出其提取率平均值為2.01%。

通過GC-MS鑒定出梅州香樟揮發(fā)油中主要含有右旋龍腦(78.56%)和樟腦油(21.07%)，還有極少量的桉葉油醇、alpha-松油醇和α-石竹烯。結(jié)果顯示，梅州香樟樹葉揮發(fā)油的右旋龍腦含量還是可觀的。

目前梅州地區(qū)廣泛生長的梅片植物，其樹葉揮發(fā)油中就富含天然右旋龍腦，含量達(dá)70.81%，且揮發(fā)油提取率為0.58%。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與梅片樹葉相比，采用同樣的水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，梅州香樟輸液中揮發(fā)油的提取率更高達(dá)到2.01%，且揮發(fā)油中右旋龍腦的含量更高，達(dá)到78.56%。加上香樟這種植物在環(huán)境中生長區(qū)域廣，因此香樟可作為梅州生產(chǎn)右旋龍腦的重要原材料。

3.2 梅州香樟揮發(fā)油脂質(zhì)體凝膠的制備結(jié)果

3.2.1 外觀

經(jīng)薄膜分散法制備的梅州香樟揮發(fā)油脂質(zhì)體為乳白色液體，加藥后進(jìn)一步制得含藥凝膠為無色透明的半固體凝膠狀。

3.2.2 包封率

按2.3.2.2項(xiàng)下方法測定，以右旋龍腦濃度為橫坐標(biāo)，以不同濃度右旋龍腦峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸得Y=0.5611X+0.0085(r=0.9996，n=6)。結(jié)果表明右旋龍腦濃度在0.2～0.7 mg/mL-1范圍內(nèi)藥物濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。按2.3.2.3項(xiàng)下方法測定藥物濃度，平均包封率為84.6%(n=3)。

3.2.3 粒徑

按2.3.3項(xiàng)下方法測得含藥脂質(zhì)體粒度大小均勻，平均粒徑為135.1nm。將脂質(zhì)體冷藏1周后測定，外觀、包封率和粒徑無變化。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)取材于梅州地區(qū)生長的香樟植物，取其新鮮樹葉通過水蒸氣蒸餾法提取樹葉揮發(fā)油，并采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析所得揮發(fā)油的化學(xué)組分及其含量，進(jìn)一步將梅州香樟揮發(fā)油制成脂質(zhì)體凝膠。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，梅州香樟樹葉揮發(fā)油水蒸氣蒸餾法提取率可達(dá)到2.01%；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)合分析可知，該揮發(fā)油主要含有右旋龍腦(78.56%)和樟腦油(21.07%)；進(jìn)一步制得該揮發(fā)油脂質(zhì)體凝膠包封率為84.6%(n=3)，平均粒徑為135.1nm。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明梅州香樟可以作為生產(chǎn)天然右旋龍腦原材料來源，而且可進(jìn)一步加工制成脂質(zhì)體凝膠制劑應(yīng)用皮膚科疾病治療，具有廣闊的應(yīng)用前景。

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