王京麗

宮頸癌是女性發(fā)病率較高的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，手術(shù)聯(lián)合術(shù)后放化療是臨床應(yīng)用最多的治療方案，但針對(duì)不同病情特點(diǎn)的患者、治療方案存在差異[1]。Ezrin蛋白是近來(lái)研究較多的參與腫瘤增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)蛋白，已經(jīng)有研究明確其在胃癌、肺癌、食管癌腫瘤組織中呈異常高表達(dá)，且有學(xué)者認(rèn)為存在Ezrin蛋白高表達(dá)的患者預(yù)后不佳[2-3]。關(guān)于Ezrin蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)研究目前已經(jīng)有所開(kāi)展，但結(jié)果多局限于其表達(dá)量的變化，對(duì)Ezrin蛋白改變與腫瘤惡性行為間的內(nèi)在聯(lián)系研究涉及不多。本文對(duì)比宮頸癌組織、癌旁組織中的Ezrin蛋白表達(dá)情況，并進(jìn)一步探討Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性與腫瘤增殖、侵襲活性間的內(nèi)在聯(lián)系。

對(duì)象與方法

1.對(duì)象：選取2013年2月—2016年1月在本院接受手術(shù)治療的宮頸癌患者90例，經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診疾病、患者本人及家屬均簽署知情同意書(shū)。入組患者年齡41～70歲，平均(58.3±9.1)歲，腫瘤FIGO分期Ⅰ期26例、Ⅱ期45例、Ⅲ期19例；局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性32例、陽(yáng)性58例。入組標(biāo)準(zhǔn)為(1)首次確診疾病、術(shù)前無(wú)放化療史；(2)既往無(wú)宮頸疾病(炎癥等)手術(shù)史。排除標(biāo)準(zhǔn)為(1)合并其他組織臟器惡性腫瘤性疾病；(2)伴嚴(yán)重心肝腎功能不全；(3)伴嚴(yán)重自身免疫性疾病。

2.蛋白免疫組化：術(shù)中所得腫瘤組織、癌旁組織均置于4%甲醛溶液(上海博谷生物科技有限公司，貨號(hào)PT028)中固定，石蠟包埋后行連續(xù)切片(4.0 μm)、常規(guī)行脫蠟及水化。按照S-B試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行樣本DAB顯色，腫瘤樣本的不同切片中分別加入1：200稀釋的兔來(lái)源的Ezrin、p53、NF2、HDAC1、TUG1、Twist、Rab11多克隆抗體(美國(guó)Abcam公司，貨號(hào)PAJ01、批號(hào)20140721)、癌旁組織樣本中加入PBS液(南京森貝伽生物科技有限公司，貨號(hào)J373-4L，批號(hào)20141119)。在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行圖像攝影，記錄并觀察染色結(jié)果。染色得分標(biāo)準(zhǔn)[4]為(1)染色強(qiáng)弱。0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；(2)陽(yáng)性細(xì)胞比例。0分為<5%，1分為5%～10%，2分為10%～50%，3分為50%～75%，4分為≥75%。計(jì)算染色強(qiáng)弱評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分的乘積。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，癌旁組織、宮頸癌組織兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.Ezrin蛋白表達(dá)：宮頸癌組織中Ezrin蛋白乘積(8.9±1.1)，癌旁組織中Ezrin蛋白乘積(0.8±0.1)。宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)量顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)與腫瘤增殖活性的關(guān)系：宮頸癌組織中，增殖相關(guān)蛋白p53、NF2表達(dá)量均低于癌旁組織，Nanog表達(dá)量高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同宮頸組織中增殖相關(guān)蛋白積分比較

注：與癌旁組織比較，*P<0.05

3.宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)與腫瘤侵襲活性的關(guān)系：宮頸癌組織中，侵襲相關(guān)蛋白HDAC1、TUG1、Twist、Rab11的表達(dá)量均高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同宮頸組織中侵襲相關(guān)蛋白積分比較

注：與癌旁組織比較，*P<0.05

4.相關(guān)性分析：經(jīng)Pearson檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)量與腫瘤增殖相關(guān)蛋白p53、NF2的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.6、-0.7，P<0.05)，與Nanog的表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.7，P<0.05)；與侵襲相關(guān)蛋白HDAC1、TUG1、Twist、Rab11的表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.5、0.6、0.6、0.7，P<0.05)。

討論

Ezrin蛋白屬于細(xì)胞骨架與細(xì)胞膜間的連接蛋白，可調(diào)節(jié)細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，減少細(xì)胞表面E-cadherin表達(dá)而促使細(xì)胞脫落，聚集于CD44胞質(zhì)區(qū)而導(dǎo)致細(xì)胞骨架重建[5]。國(guó)內(nèi)外較多研究發(fā)現(xiàn)Ezrin蛋白在胃癌、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤中呈異常表達(dá)，通過(guò)參與腫瘤細(xì)胞吞噬、信號(hào)傳導(dǎo)途徑等影響腫瘤發(fā)生發(fā)展。本次研究中，宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)量高于癌旁組織，證實(shí)在宮頸癌組織中存在Ezrin蛋白的異常表達(dá)，參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。有研究認(rèn)為，陽(yáng)性表達(dá)的Ezrin蛋白是惡性腫瘤患者預(yù)后不良的標(biāo)志，但目前關(guān)于Ezrin蛋白表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤增殖、侵襲等惡性行為程度間的直接相關(guān)關(guān)系研究甚少。無(wú)限增殖是惡性腫瘤細(xì)胞的最主要特征之一，也是腫瘤體積增加、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生的物質(zhì)基礎(chǔ)，檢測(cè)相關(guān)增殖基因表達(dá)量可量化反映腫瘤增殖活性[6-7]。p53、NF2均屬抑癌基因，其表達(dá)減少甚至缺失是多種腫瘤發(fā)生的主要原因，楊杏[8]的研究也指出p53、NF2基因甲基化后，宮頸癌病情持續(xù)進(jìn)展。Nanog是維持胚胎干細(xì)胞自我更新的必需調(diào)控因子，大量研究顯示其過(guò)表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移直接相關(guān)。于愛(ài)清等[9]的研究證實(shí)，Nanog基因表達(dá)下調(diào)可減弱宮頸癌Hela細(xì)胞的惡性行為。本次研究對(duì)比不同宮頸癌組織中上述增殖相關(guān)蛋白表達(dá)積分差異，發(fā)現(xiàn)與癌旁組織比較，宮頸癌組織中p53、NF2表達(dá)量較低，Nanog表達(dá)量較高，說(shuō)明宮頸癌組織中存在增殖/抗增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)紊亂。進(jìn)一步采用Pearson檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)量與p53、NF2表達(dá)積分呈負(fù)相關(guān)，與Nanog表達(dá)積分呈正相關(guān)，證實(shí)Ezrin蛋白高表達(dá)可導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)。

侵襲是惡性腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、患者最終死亡的最直接原因，其本質(zhì)基礎(chǔ)是侵襲相關(guān)基因的異常表達(dá)[10]。HDAC1、TUG1、Twist、Rab11均屬侵襲基因，且在不同研究中被報(bào)道與宮頸癌的進(jìn)展相關(guān)。HDAC1可上調(diào)NF-κB基因表達(dá)、降低組蛋白乙酰化水平，故造成宮頸癌細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng)[11]；TUG1是p53的重要調(diào)控分子，在宮頸癌中也被發(fā)現(xiàn)其表達(dá)上調(diào)，可降低Hela細(xì)胞的凋亡能力；Twist是調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要轉(zhuǎn)錄因子，被發(fā)現(xiàn)在前列腺癌、食管癌、宮頸癌等多種惡性腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)[12]；闞巖巖等[13]的研究指出，下調(diào)Rab11基因表達(dá)可抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞遷移及侵襲。本次研究對(duì)比不同宮頸癌組織中上述侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)積分差異，發(fā)現(xiàn)與癌旁組織比較，宮頸癌組織中HDAC1、TUG1、Twist、Rab11的表達(dá)量較高，說(shuō)明宮頸癌組織中存在促侵襲相關(guān)蛋白的異常高表達(dá)。進(jìn)一步采用Pearson檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)量與HDAC1、TUG1、Twist、Rab11的表達(dá)積分呈正相關(guān)，證實(shí)Ezrin蛋白高表達(dá)可導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞侵襲活性增強(qiáng)。

綜上所述，宮頸癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率及陽(yáng)性強(qiáng)度均增加，且Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲活性呈正相關(guān)關(guān)系。檢測(cè)Ezrin蛋白表達(dá)可以成為判斷宮頸癌病情、指導(dǎo)臨床治療的可靠手段。

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