劉貴平 楊成萬(wàn)

[摘要] 宮頸癌是一種高發(fā)病率及死亡率的女性疾病，隨著對(duì)宮頸癌發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)miRNA在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著重要作用。對(duì)miRNA的研究有利于對(duì)宮頸癌的早期診斷治療及預(yù)后評(píng)估。近年來(lái)許多宮頸癌相關(guān)miRNA的研究取得了一些進(jìn)展，該文回顧宮頸癌相關(guān)miRNA的研究成果。

[關(guān)鍵詞] 宮頸癌；miRNA； 發(fā)病機(jī)制；診斷

[中圖分類號(hào)] R5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）01（b）-0189-03

[Abstract] Cervical carcinoma is a female disease with high attack and morality， with the deepening of the onset mechanism of cervical carcinoma， the miRNA plays a major role in the occurrence and development course， and the research on miRNA is conducive to the early diagnosis and prognosis and evaluation of cervical carcinoma， recently， many studies of cervical carcinoma related miRNA has made some progress， and the paper reviews the research results of cervical carcinoma related miRNA.

[Key words] Cervical carcinoma； miRNA； Onset mechanism； Diagnosis

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，它與HPV感染關(guān)系密切。據(jù)統(tǒng)計(jì)每年大約有50萬(wàn)新發(fā)病例，20萬(wàn)死于宮頸癌[1]，此外，宮頸癌5年生存率<40%，宮頸癌預(yù)后差是主要的公共健康問(wèn)題，導(dǎo)致高額的住院費(fèi)用。因此宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程成為研究重點(diǎn)，近年更多關(guān)注研究miRNA在宮頸癌的發(fā)生，發(fā)展，轉(zhuǎn)移過(guò)程的作用。MicroRNA（miRNA）是一種長(zhǎng)約18～25個(gè)核苷酸的非編碼RNA，研究表明miRNA與很多生理過(guò)程有關(guān)系[2]。miRNA的異常調(diào)節(jié)可以導(dǎo)致疾病的發(fā)生和發(fā)展，包括惡性腫瘤，它可以促進(jìn)或者抑制腫瘤的生長(zhǎng)，進(jìn)展及轉(zhuǎn)移。近來(lái)發(fā)現(xiàn)許多miRNA的表達(dá)和宮頸癌有關(guān)，在其發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到重要作用。

miRNA調(diào)控腫瘤的發(fā)病機(jī)制，表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄后水平上。miRNA通過(guò)催化mRNA裂解或抑制其翻譯調(diào)節(jié)基因表達(dá)。miRNA分為致癌和抑癌miRNA，在腫瘤內(nèi)常常伴隨致癌基因上調(diào)和抑癌基因下調(diào)。研究表明miRNA在宮頸癌發(fā)生、進(jìn)展和發(fā)展的每一個(gè)階段起作用。這些異常表達(dá)的miRNA影響各種致癌或抑癌蛋白的表達(dá)，進(jìn)而改變宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移潛能。

1 宮頸癌中miRNA表達(dá)的改變

大規(guī)模臨床標(biāo)本的miRNA微陣列分析對(duì)評(píng)估m(xù)iRNA表達(dá)的改變是很有效，這種分析用于比較正常組織和腫瘤組織，原發(fā)部位和轉(zhuǎn)移/復(fù)發(fā)部位，以及抗腫瘤治療以前和治療后的miRNA表達(dá)譜。大規(guī)模miRNA的微陣列分析表明特殊類型的腫瘤表達(dá)特定的miRNA。通過(guò)進(jìn)一步研究臨床標(biāo)本定量RT-PCR結(jié)果，提示miRNAs與癌癥之間存在一定關(guān)系。通過(guò)比較miRNA在正常組織與癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)很多miRNA伴隨癌特異性上調(diào)或者下調(diào)。

很多的致癌miRNAs已經(jīng)在宮頸癌中被發(fā)現(xiàn)。其中，miR-21在多種類型癌中過(guò)表達(dá)，還是腫瘤抑制物基因程序性細(xì)胞凋亡因子4（PDCD4）表達(dá)的一種負(fù)調(diào)節(jié)因子。PDCD4的表達(dá)與細(xì)胞凋亡有關(guān)，并且阻礙翻譯和抑制腫瘤生長(zhǎng)，因此miR21結(jié)合到PDCD4 3'UTR促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，miR-21也作用和調(diào)節(jié)趨化因子CCL20，后者與腫瘤的分化和轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。miR-20 增強(qiáng)TNKS2的表達(dá)，一旦TNKS2被抑制宮頸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲就會(huì)被抑制。然而， miR-20總是正調(diào)節(jié)TNKS2的，從而增強(qiáng)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲[4]。

很多的研究也檢測(cè)了腫瘤抑制因子miRNA。例如，miR-138 參與了端粒酶的調(diào)節(jié)，端粒酶是一種通過(guò)延長(zhǎng)染色體終端端粒從而導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)限增殖以及和癌變密切相關(guān)的酶。端粒酶的活性依賴于人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT），但是miR-138抑制hTERT的mRNA水平，并且降低端粒酶的活性。MiR-138在宮頸癌的表達(dá)明顯低于正常組織，從而增強(qiáng)了端粒酶的活性引起癌變[5]。MiR-17-5p作用于腫瘤蛋白—P53誘導(dǎo)核蛋白1（TP53INP1），從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并且引起細(xì)胞凋亡。TP53INP1 在細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)中扮演著很重要的角色，如果TP53INP1異位表達(dá)，那么miR-17-5p 誘導(dǎo)的細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制將被干擾。在宮頸癌的問(wèn)題上面，研究發(fā)現(xiàn)TP53INP1 和miR-17-5p存在相似的關(guān)系。因此， miR-17-5p 可能也是一個(gè)腫瘤抑制因子miRNA[6]。

2 宮頸癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNA

繼腫瘤發(fā)生和發(fā)展后，癌細(xì)胞開始侵襲和轉(zhuǎn)移。這個(gè)過(guò)程以穿透上皮基底膜開始，通過(guò)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）發(fā)展。在宮頸癌中多個(gè)調(diào)節(jié)器包括miRNA調(diào)節(jié)這一過(guò)程。例如在宮頸癌組織中miR-205通過(guò)EMT抑制細(xì)胞遷移和侵襲[7]。他們發(fā)現(xiàn)，miR-205 作用于CYR61和CTGF蛋白，通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面受體比如整合素受體和硫酸乙酰肝素蛋白多糖等從而在細(xì)胞增殖、黏附、遷移、血管生成和腫瘤發(fā)生等細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮不同作用[8]。同樣，體外實(shí)驗(yàn)證明miR-155的高表達(dá)與宮頸癌的遷移/浸潤(rùn)有關(guān)。方等表明在宮頸癌組織中miR-155表達(dá)明顯上調(diào)，而且還與宮頸癌FIGO分期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管侵犯相關(guān)。miR-155高表達(dá)的患者比那些低表達(dá)miR-155的整體存活率較差[9]。尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）， 是一種絲氨酸蛋白酶，啟動(dòng)金屬蛋白酶的激活以及纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白溶酶，因此賦予癌細(xì)胞降解周圍細(xì)胞外蛋白質(zhì)的能力[10]。致癌HPV-16 E6蛋白下調(diào)miR-23b，從而反過(guò)來(lái)增加uPA的表達(dá)誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞的遷移[11]。MUC4上調(diào)與宮頸癌的侵襲性密切相關(guān)。在Hela和Siha細(xì)胞中沉默MUC4能夠顯著降低其侵襲，也減少了其間充質(zhì)性。徐等通過(guò)生物信息學(xué)分析，他們觀察到miR-211是 MUC4一個(gè)潛在抑制物，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，miR-211可以直接靶向作用MUC4 3′UTR并抑制其在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，從而抑制宮頸癌細(xì)胞的侵襲[12]。

3 血清miRNAs與宮頸癌的診斷

釋放入血的RNAs在核糖核酸酶（RNases）的作用下很快就降解了。因此，最初并不認(rèn)為miRNAs存在于血清中，一般通過(guò)細(xì)胞內(nèi)miRNA進(jìn)行miRNA表達(dá)分析。然而，2007年循環(huán)于血液中的嵌入外泌體中分泌型miRNA和顆粒囊泡（granular vesicules）被發(fā)現(xiàn)。這樣的miRNA隨后被發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞通訊轉(zhuǎn)染以及經(jīng)胎盤和乳汁信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起作用[13]。

分泌到細(xì)胞外的miRNA在宮頸癌診斷和治療中也存在價(jià)值，因?yàn)榘┌Y病人分泌miRNA的水平和正常的志愿者存在著顯著差異。血漿和血清都可作為miRNA提取的試劑，miRNA的表達(dá)可通過(guò)微陣列分析和定量RTPCR檢測(cè)。檢測(cè)癌癥患者血漿和血清里的miRNA特異性表達(dá)改變使其有潛力成為診斷和判斷預(yù)后的生物標(biāo)記。miR-126 和 miR-21在血清里面被發(fā)現(xiàn)，并且與宮頸癌有關(guān)[14]。收集宮頸癌患者血清進(jìn)行分析，其它新的miRNA標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)。檢測(cè)到miR-21， miR-27a， miR-34， miR34a， miR-146a， miR-155， miR-196a， miR-203， 和 miR-221過(guò)表達(dá)， miR-21， miR-27a， miR-34， miR-34a， 和 miR-196a在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中明顯高表達(dá)[15]。這些結(jié)果表明，血清里的miRNA水平可用于宮頸癌的診斷，而且一些類型的miRNA可用于宮頸癌的組織學(xué)類型預(yù)測(cè)和早期診斷。

4 miRNA與宮頸癌治療

調(diào)節(jié)miRNA的表達(dá)水平可達(dá)到抗癌治療的效果。包括補(bǔ)充核酸序列或者減少實(shí)際表達(dá)水平，從而抑制在癌癥中過(guò)表達(dá)的miRNAs （癌基因miRs）功能。相比之下，補(bǔ)充miRNAs（抑癌miRs），它抑癌作用可能會(huì)恢復(fù)。miR-143對(duì)骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的抑制作用已被Osaki等證明[16]。給骨肉瘤細(xì)胞補(bǔ)充miR-143能抑制侵襲和轉(zhuǎn)移潛能。因此，miR-143是一種腫瘤抑制miRNA，其補(bǔ)充劑可能有助于宮頸癌的治療，L Liu[17]等人在宮頸癌細(xì)胞HeLa內(nèi)引入了miR-143，發(fā)現(xiàn)伴隨miR-143表達(dá)增強(qiáng)，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，細(xì)胞凋亡增加。相對(duì)于正常組織， miR-143低表達(dá)的組織Bcl2的表達(dá)增加。HeLa細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的miR-143下調(diào)Bcl2，反之低表達(dá)miR-143上調(diào)Bcl2。因此miR-143與BCL2有關(guān)聯(lián)，針對(duì)這一途徑使治療成為可能。

反義miRNA寡核苷酸（AMOs）是最常見的miRNA抑制劑。XM Wang等[18]將這種AMO引入宮頸癌細(xì)胞，實(shí)時(shí)檢測(cè)SiHa細(xì)胞中miR-21的表達(dá)，通過(guò)MTT比色法評(píng)估細(xì)胞的生長(zhǎng)以及通過(guò)膜聯(lián)蛋白-V-FITC/PI分析法評(píng)估細(xì)胞凋亡。用腫瘤生長(zhǎng)曲線和免疫組織化學(xué)評(píng)價(jià)AMO對(duì)腫瘤的抑制效果。與對(duì)照組比較，miR-21的表達(dá)下調(diào)與腫瘤生長(zhǎng)被AMO明顯抑制。AMO組抑制更加明顯，流式細(xì)胞檢測(cè)到明顯凋亡。在AMO組中8個(gè)病例只有3例檢測(cè)到腫瘤發(fā)生，而對(duì)照組8例中有6例。

miRNA在宮頸癌表達(dá)上調(diào)或下調(diào)，這些變化可以增加或減少對(duì)化療和放療的敏感性，miRNA可能在化療反應(yīng)起著重要作用。宋等人發(fā)現(xiàn)miR-25-3p可調(diào)節(jié)宮頸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）及化療敏感度，增加對(duì)順鉑的敏感性[19]。有一些miRNA與抵抗化療和放療有關(guān)，陳等人表明miR-181a通過(guò)負(fù)調(diào)控凋亡蛋白激酶（PRKCD）增加宮頸鱗癌細(xì)胞對(duì)放療的抵抗[20]，因此miR-181a可提前預(yù)測(cè)宮頸鱗癌患者對(duì)化療的敏感性。

對(duì)miRNA機(jī)制的詳細(xì)了解有助于我們基于miRNA的抑制或補(bǔ)充制定有針對(duì)性的治療策略， miRNA抑制劑或補(bǔ)充劑與化療或放療新的聯(lián)合治療方案值得進(jìn)一步研究。

5 結(jié)語(yǔ)

MiRNA在宮頸癌的發(fā)生、進(jìn)展以及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要而廣泛的作用， miRNA臨床應(yīng)用可能越來(lái)越被認(rèn)可。綜合分析多種miRNA可以幫助我們對(duì)宮頸癌的診斷和臨床分期以及判斷預(yù)后。通過(guò)研究不同的miRNA在宮頸癌中的過(guò)表達(dá)和表達(dá)降低，為利用miRNA進(jìn)行抑制或補(bǔ)充治療提供了分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2017-10-14）