王貞杰 葉保民 常 青 陳四清① 劉長琳 胡建成 王志軍

(1. 農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實驗室 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島 266071；2. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院 上海 201306；3. 遼寧省海洋與漁業(yè)廳 沈陽 110000；4. 山東科合海洋高技術(shù)有限公司 威海 264500)

維生素C(Vitamin C)俗稱抗壞血酸，是動物生長、生產(chǎn)及維持正常的生理機(jī)能所必需的微量營養(yǎng)素，具有廣泛的生理和免疫調(diào)節(jié)作用，對動物快速生長起促進(jìn)作用(頡志剛等, 2003)。目前，針對魚類生長補(bǔ)充維生素的方法有2種，對于胚胎期和卵黃囊期的仔稚魚補(bǔ)充維生素等營養(yǎng)物質(zhì)的途徑為水體浸泡(季延濱等, 2007)；對于已經(jīng)開口攝食的魚類，可以在飼料中添加Vc。目前，關(guān)于Vc對魚類的生長和生理影響的研究報道均在成魚(謝全森等, 2008)，而研究在孵化水體添加 Vc對胚胎和卵黃囊仔魚的影響的報道較少。已有研究表明，適宜的Vc為受精卵提供營養(yǎng)補(bǔ)償，對魚類的早期發(fā)育有促進(jìn)作用，可以顯著提高受精卵孵化率和仔稚魚的成活率(李俊霞, 2007)。季延斌等(2007)研究表明，剛出膜的六須鯰(Silurus glanis)仔魚浸泡在添加40 mg/L的Vc孵化水體中，可以使仔魚開口攝食的時間提前8 h，其成活率也由自然孵化條件下的5%～20%提高至70%；薛凌展(2008)研究也表明，水體中添加0.09 g/L的Vc可使櫛孔扇貝(Chlamys farreri)的孵化率顯著提高?？梢?，胚胎及仔魚可以吸收孵化水體中的Vc，Vc可為魚類胚胎生長發(fā)育提供營養(yǎng)需求，促進(jìn)早期發(fā)育。熊鏵龍等(2014)研究表明，30 mg/L的Vc可顯著提高晉安銀鯽(Carassius auratus)的孵化率、成活率及卵黃囊仔稚魚的生長速度。

圓斑星鰈(Verasper variegatus)主要分布在我國的黃渤海，韓國和日本的北部沿海。圓斑星鰈肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，耐低溫，具有較強(qiáng)抗病力，生長速度快，是重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚種。由于人工飼育下的圓斑星鰈排卵周期不穩(wěn)定，受精率比其他魚種較低，對于提高孵化階段的孵化率和卵黃囊期的成活率有待提高。本研究將Vc添加到圓斑星鰈的孵化水體中，旨在探究Vc對圓斑星鰈早期發(fā)育的影響，為提高該魚的孵化率、成活率和營養(yǎng)消化能力提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗于2016年5月在山東科合海洋高技術(shù)有限公司進(jìn)行。選用全長為30～50 cm、體重為1.2～3.0 kg的4齡圓斑星鰈親魚。挑選可擠出乳白色精液的雄性親魚，用吸管取其精液，用0.9%生理鹽水稀釋；挑選腹部膨大、肛門突出的雌性親魚，擠出成熟卵。擠出的卵立即滴入數(shù)滴稀釋精液，輕輕攪拌，使精卵均勻混合，2～3 min后洗凈，將受精卵置于2 L燒杯中孵化。孵化水溫為(11.5±0.5)℃，出膜后水溫升高至(14.5±0.5)℃。每 8 h全部換同一溫度的新水。實驗Vc質(zhì)量濃度為0、20、25、30和35 mg/L，每組分別設(shè)3個重復(fù)。水體中受精卵的平均密度為1000粒/L，開口后投喂輪蟲。受精卵發(fā)育過程使用顯微鏡4倍下進(jìn)行連續(xù)觀察，并記錄發(fā)育的時間和時期。實驗的取樣點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)為50%的仔魚發(fā)育至某個時期。實驗仔魚的內(nèi)源營養(yǎng)期為1～5日齡仔魚，混合營養(yǎng)期為5～8日齡仔魚，外源營養(yǎng)期為9日齡仔魚。因此，在成熟卵、受精卵、原腸中期、晶體出現(xiàn)期、內(nèi)源營養(yǎng)期(2日齡)、混合營養(yǎng)期(6日齡)及外源營養(yǎng)期(9日齡) 7個時期分別取樣。將樣品置于1.5 ml的Eppendoff管中，于–80℃冰箱保存。

1.2 樣品制備

選取最優(yōu)仔稚魚出膜時間、出膜率和成活率的VC濃度 25 mg/L組和對照組的樣品進(jìn)行指標(biāo)測定。取不同胚胎時期的樣品加入10倍體積(W/V)預(yù)冷雙蒸水，冰浴勻漿，4000 r/min、4℃離心20 min后取上清液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?4 h內(nèi)測定完畢。

1.3 酶活測定

酶液蛋白濃度采用考馬斯亮藍(lán)法測定。脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)、胃蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均采用南京建成生物技術(shù)有限公司試劑盒測定?？傊富钚?GE)=脂蛋白脂酶活性+肝脂酶活性。

1.4 體重和全長的測定方法

用電子天平稱量體重，每次稱量100尾，取平均值。顯微鏡下通過目微尺測定全長，每次測量50尾，取平均值。體重和全長均測定3次。

1.5 數(shù)據(jù)分析

實驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因子方差分析(One-way ANOVA)，P＜0.05為差異顯著，采用Duncan氏多重比較檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Vc對圓斑星鰈出膜時間、孵化率和仔魚成活率的影響

隨著孵化水體中VC濃度的增加，圓斑星鰈仔魚的出膜時間縮短，孵化率和成活率得到提高(表1)。Vc濃度在 30 mg/L時，仔魚出膜時間最短，比對照組縮短了5.5 h；Vc濃度在20 mg/L時，孵化率顯著高于其他各組(P＜0.05)；Vc濃度在25～30 mg/L時，成活率顯著高于其他各組(P＜0.05)；當(dāng) Vc濃度大于30 mg/L時，高濃度Vc對圓斑星鰈胚胎及仔魚孵化率和成活率表現(xiàn)出抑制。

2.2 Vc對圓斑星鰈仔稚魚全長和體重的影響

Vc對圓斑星鰈仔稚魚全長的影響顯著(表2)。同一發(fā)育時期，隨 Vc濃度增加仔稚魚全長增加，Vc濃度高于30 mg/L時，全長增長速度表現(xiàn)出抑制。Vc濃度在25 mg/L時，仔稚魚各時期全長最長，并顯著高于對照組(P＜0.05)。隨著 Vc濃度增加，不同發(fā)育時期的全長增長幅度比對照組顯著增大(P＜0.05)，外源營養(yǎng)期的仔稚魚在25 mg/L時，全長增長幅度最大。Vc濃度高于30 mg/L時，增長幅度與對照組無顯著差異(P＞0.05)。由表3可知，隨著 Vc濃度的增加，體重呈上升趨勢。當(dāng)Vc濃度高于30 mg/L時，體重增加受到抑制。對于外源營養(yǎng)期的仔稚魚，體重在Vc濃度25 mg/L時最大并顯著高于對照組(P＜0.05)。

表1 VC對圓斑星鰈出膜時間、孵化率和成活率的影響Tab.1 The effect of vitamin C on the hatching time, hatching ratio and survival rate of V. variegatus larvae (n=3)

2.3 Vc對圓斑星鰈早期發(fā)育過程中總蛋白的影響

浸泡水體Vc濃度為30 mg/L時(表4)，在圓斑星鰈仔稚魚早期發(fā)育過程中，對照組的總蛋白含量呈下降趨勢，成熟卵總蛋白量為(0.775±0.012) mg/ml，發(fā)育到外源營養(yǎng)期時，總蛋白含量下降至(0.131±0.011) mg/ml。Vc組總蛋白含量也呈下降趨勢，但下降幅度顯著低于對照組。發(fā)育到外源營養(yǎng)期時，總蛋白含量下降至(0.225± 0.005) mg/ml，顯著高于對照組(P＜0.05)。

2.4 Vc對圓斑星鰈早期發(fā)育過程中消化酶的影響

浸泡水體Vc濃度在30 mg/L時圓斑星鰈早期發(fā)育過程中消化酶活性的變化見表5。從表5可以看出胃蛋白酶活性在外源營養(yǎng)期出現(xiàn)，Vc組顯著高于對照組(P＜0.05)。淀粉酶活性在混合營養(yǎng)期出現(xiàn)，并呈顯著上升趨勢，混合營養(yǎng)期和外源營養(yǎng)期間差異顯著(P＜0.05)。在混合營養(yǎng)期和外源營養(yǎng)期，Vc組均顯著高于對照組(P＜0.05)(表6)，Vc可顯著提高淀粉酶活性。在發(fā)育的各個時期，脂肪酶活性均呈顯著上升趨勢，Vc組脂肪酶活性均顯著高于對照組(P＜0.05)。胰蛋白酶在內(nèi)源營養(yǎng)期有較高活性，混合營養(yǎng)期活性下降，外源營養(yǎng)期有所升高。在混合營養(yǎng)期，胰蛋白酶活性Vc組和對照組差異不顯著(P＞0.05)；在混合營養(yǎng)期和外源營養(yǎng)期，Vc組均顯著高于對照組(P＜0.05)。

2.5 Vc對圓斑星鰈早期發(fā)育過程中2種酯酶的影響

圓斑星鰈發(fā)育的各個時期，LPL活性Vc組均高于對照組。成熟卵、受精卵和混合營養(yǎng)期2組差異不顯著(P＞0.05)，原腸中期、晶體期和外源營養(yǎng)期 Vc組顯著高于對照組(P＜0.05)。圓斑星鰈胚胎發(fā)育和卵黃囊仔稚魚HL活性均呈上升趨勢，且Vc組顯著高于對照組(P＜0.05)(表6)。

表2 Vc對圓斑星鰈仔稚魚全長的影響Tab.2 The effects of vitamin C on the full-length of Verasper variegatus larvae (n=3, mm)

表3 Vc對圓斑星鰈仔稚魚體重的影響Tab.3 The effects of vitamin C on the body weight of V. variegatus larvae (n=3, mg)

表4 圓斑星鰈早期發(fā)育過程中總蛋白含量變化Tab.4 The total protein content of V. variegatus during early development (mg/ml)

表5 圓斑星鰈早期發(fā)育過程中消化酶活性變化Tab.5 The digestive enzyme activities of V. variegatus during early development (U/mg prot)

表6 圓斑星鰈早期發(fā)育過程中脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)活性變化Tab.6 The specific activity and total activity of lipoprotein lipase and hepatic lipase of V. variegatus during early development (U/mg prot)

3 討論

3.1 Vc對圓斑星鰈早期胚胎發(fā)育的影響

本研究顯示，不同濃度Vc均可以縮短圓斑星鰈的出膜時間。在Vc濃度為25～30 mg/L時，出膜時間比對照組提前10 h，表明Vc浸泡對圓斑星鰈的胚胎發(fā)育有促進(jìn)作用。Vc是魚類的必需營養(yǎng)元素，為機(jī)體細(xì)胞提供營養(yǎng)，有研究報道，一定量的Vc不僅可以保護(hù)卵子避免氧化損傷，還能對早期發(fā)育中的卵內(nèi)物質(zhì)和能量代謝起到調(diào)控作用，進(jìn)而促進(jìn)胚胎發(fā)育(Terovaet al, 2008)。另外，不同濃度Vc也可對圓斑星鰈的孵化率和仔魚的成活率造成不同的影響，在VC為 25 mg/L時，孵化率、出膜率和成活率最高，孵化率和成活率比對照組分別高29.4%和14.8%，仔魚的全長和體重增重量最顯著，熊鏵龍等(2014)研究發(fā)現(xiàn)，30 mg/L的Vc可顯著提高晉安銀鯽的孵化率、成活率及卵黃囊仔稚魚的生長速度，與本實驗結(jié)果相吻合。不同的物種對同一營養(yǎng)物質(zhì)的利用率和機(jī)制也不同。VC對圓斑星鰈早期發(fā)育的影響至今還未見報道，本研究為 VC在圓斑星鰈孵化上的運(yùn)用提供了理論依據(jù)。Vc除了作為營養(yǎng)物質(zhì)為機(jī)體提供營養(yǎng)，還是魚體內(nèi)的抗氧化劑，具有清除有害自由基的作用，使胚胎免受氧化損傷，保護(hù)卵膜(Brownet al, 2001;Menezeset al, 2006)。體外實驗表明，Vc具有提高機(jī)體免疫力的作用(李桂峰等, 2005)。水體中的Vc進(jìn)入機(jī)體，提高胚胎及仔魚的免疫力，減少病害的發(fā)生，從而提高圓斑星鰈仔魚的出膜率和成活率。

當(dāng)Vc濃度高于30 mg/L時，圓斑星鰈仔魚的出膜時間、孵化率和成活率均受到抑制，原因可能是Vc水溶液呈酸性，當(dāng)Vc濃度過高時，水體的pH降低，不適宜胚胎的正常發(fā)育。因此，低于30 mg/L的Vc浸泡可促進(jìn)圓斑星鰈的早期發(fā)育。

Vc組仔魚的全長和體重顯著高于對照組，其原因一方面是Vc作為營養(yǎng)物質(zhì)促進(jìn)了其生長發(fā)育，另一方面Vc起抗氧化作用，使機(jī)體損傷率降低，發(fā)育過程中的正常代謝得到保障。

3.2 Vc對圓斑星鰈早期發(fā)育過程中總蛋白的影響

在圓斑星鰈胚胎期和卵黃囊期，卵黃物質(zhì)分解代謝，為胚胎提供能量，同時，也為機(jī)體組織、器官的形成提供原料。在圓斑星鰈胚胎及早期發(fā)育過程中，總蛋白含量整體呈下降趨勢。受精后至原腸中期下降的幅度較小，因為受精卵發(fā)育至原腸中期胚胎主要進(jìn)行細(xì)胞分裂和遷移，不需要消耗大量能量。從晶體期至出膜期，細(xì)胞大量增殖分化，胚胎組織逐漸形成，出膜時脫落的卵膜帶走部分蛋白質(zhì)(Selmanet al,2000)，因此，晶體期至出膜期總蛋白含量下降幅度增大。出膜后仔魚體內(nèi)尚未攝入食物，會大量分解蛋白質(zhì)以維持正常生命活動，所以總蛋白含量持續(xù)下降?；旌蠣I養(yǎng)期，仔魚雖然開口攝食，但攝食量很少，總蛋白含量仍下降。

本研究用25 mg/L的Vc浸泡圓斑星鰈胚胎及卵黃囊仔魚表明，總蛋白含量呈下降趨勢且下降幅度顯著小于對照組，表明Vc對機(jī)體發(fā)育起到積極的促進(jìn)作用。王文輝等(2006)在飼料中添加 Vc飼喂黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)，發(fā)現(xiàn)Vc可提高黃顙魚血漿總蛋白含量。本研究對圓斑星鰈胚胎及卵黃囊仔魚進(jìn)行Vc浸泡，在混合營養(yǎng)期和外源營養(yǎng)期，25 mg /L的 Vc使圓斑星鰈仔魚蛋白含量分別高于對照組61.14%和68.14%，說明對于開口攝食的仔魚Vc能促進(jìn)其攝食，加速蛋白質(zhì)的沉積，但機(jī)體具體的工作機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

3.3 Vc對圓斑星鰈早期發(fā)育過程中消化酶的影響

仔稚魚消化酶活性變化有兩個重要時期，一是未開口向開口攝食的轉(zhuǎn)變，二是開口后混合營養(yǎng)期向外源營養(yǎng)期的轉(zhuǎn)變(Cousinet al, 1987)。在圓斑星鰈胚胎發(fā)育過程中，在內(nèi)源營養(yǎng)期和混合營養(yǎng)期均沒有檢測到胃蛋白酶活性，在外源營養(yǎng)期開始檢測到微弱胃蛋白酶活性。初孵仔魚中胰蛋白酶活性最高，混合營養(yǎng)期降低。魚類在孵化6 d后胃區(qū)才稍膨大發(fā)育(王思鋒等, 2006)，胃蛋白酶屬于酸性蛋白酶，在仔魚發(fā)育期形成較晚，而堿性蛋白酶如胰蛋白酶在仔魚發(fā)育早期階段就具有較高的活性。因此，在仔魚發(fā)育早期，胰蛋白酶可以補(bǔ)償酸性蛋白酶缺乏的影響，這一結(jié)論已在無胃魚類和金頭鯛(Sparus aurata) (Moyanoet al,1996)中驗證。在開口攝食前，圓斑星鰈堿性蛋白酶如胰蛋白酶的活性較高，這與對半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)仔魚的結(jié)果一致(常青等,2005)。在仔魚的胃腺未形成時，對攝入食物的消化吸收主要依賴胰蛋白酶類，因此，在仔魚早期發(fā)育過程中，胰蛋白酶對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收起到重要作用(Suzukiet al, 2002)。在混合營養(yǎng)期出現(xiàn)淀粉酶活性并在外源營養(yǎng)期升高，表明圓斑星鰈的仔魚在由混合性營養(yǎng)向外源性營養(yǎng)轉(zhuǎn)變時，已具備消化多糖類食物的能力。在胚胎發(fā)育過程中，卵黃中的營養(yǎng)物質(zhì)被分解用于維持代謝和提供能量，首先分解代謝的是蛋白質(zhì)，其次是脂質(zhì)(Gunasekeraret al, 1999)。在圓斑星鰈初孵仔魚中，檢測到脂肪酶活性呈上升狀態(tài)，說明從內(nèi)源營養(yǎng)期仔魚生長發(fā)育加快，需要分解大量脂質(zhì)維持生命活動。初孵仔魚開口攝食前機(jī)體處于饑餓狀態(tài)，此時，脂質(zhì)被大量分解提供能量以維持其基礎(chǔ)代謝。對于混合營養(yǎng)期和外源營養(yǎng)期的卵黃囊仔魚，脂肪酶活性仍呈上升趨勢，說明仔魚出膜后發(fā)育代謝所需能源主要由脂類提供，這與在單斑重牙鯛(Diplodus sargus kotschyi) (Cejasaet al, 2004)仔魚發(fā)育過程一致。

胚胎發(fā)育是生命過程中最脆弱的環(huán)節(jié)，發(fā)育質(zhì)量好壞決定個體能否存活。生理代謝旺盛的胚胎期易產(chǎn)生大量氧化自由基，造成胚胎氧化損傷。Vc可有效清除自由基使胚胎免受氧化損傷，尤其是保護(hù)卵膜完整，提高卵的質(zhì)量(Bromageet al, 1992)。在鱸魚(Lateolabrax japonicas)和鯛魚(Pagrosomus major)的成熟卵中Vc積累較多后，能有效促進(jìn)魚的早期發(fā)育(Terovaet al, 1998)。當(dāng)Vc在受精卵中積累到一定量時，就可以對卵內(nèi)物質(zhì)與能量代謝起調(diào)控作用。六須鯰魚(Silurus glanis)卵黃囊仔魚進(jìn)行水體添加 Vc浸泡，Vc可有效促進(jìn)卵黃物質(zhì)被機(jī)體分解吸收，使仔魚開口時間提前(季延濱等, 2007)，說明Vc在六須鯰魚胚胎發(fā)育期進(jìn)入卵黃囊仔魚機(jī)體，誘導(dǎo)激活參與代謝卵黃物質(zhì)的消化酶加速分解卵黃物質(zhì)，同時，對魚類其他調(diào)節(jié)酶的合成與分泌起調(diào)節(jié)作用使機(jī)體達(dá)到新的代謝模式，從而適應(yīng)變化的營養(yǎng)環(huán)境(王文輝等,2006)。本研究采用25 mg/L的Vc對圓斑星鰈卵黃囊仔魚進(jìn)行浸泡，結(jié)果顯示，同一發(fā)育時期的蛋白酶、脂肪酶及淀粉酶活性相比對照組均顯著提高，說明在卵黃囊仔魚期Vc能有效提高消化酶活性促進(jìn)卵黃物質(zhì)的分解，從而為圓斑星鰈早期發(fā)育提供能源。

3.4 圓斑星鰈早期發(fā)育過程中LPL和HL活性變化特點(diǎn)

脂質(zhì)不僅是魚類的能量來源，也是必需的營養(yǎng)物質(zhì)。對于仔稚魚，脂肪的代謝直接關(guān)系到其能否存活(Keembiyehettyet al, 1998)。LPL和HL(合稱總脂酶)均是參與脂質(zhì)降解的關(guān)鍵酶，LPL是甘油三酯水解的限速酶，HL是血液循環(huán)內(nèi)源性甘油三酯代謝的關(guān)鍵酶。姚俊杰(2006)對羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)的研究表明，胚胎發(fā)育過程中原腸期機(jī)體調(diào)控機(jī)制由母型調(diào)控轉(zhuǎn)變?yōu)楹献有驼{(diào)控，同時，這一時期自身的mRNA也開始合成。本研究顯示，在圓斑星鰈的成熟卵可以檢測到脂酶活力，說明脂酶合成源于母體，成熟卵中的脂酶為最初胚胎發(fā)育提供了營養(yǎng)物質(zhì)保障。在胚胎發(fā)育過程中，LPL活性呈上升趨勢，在原腸期其活性顯著提高，說明原腸期合子基因開始表達(dá)合成水解酶。這與內(nèi)源營養(yǎng)期器官形成分化、仔魚破膜孵出、細(xì)胞增殖組織構(gòu)建大量耗能有關(guān)(Selmanet al,2000)。這一現(xiàn)象與淡水魚類相一致(Cejaset al,2004)。在混合營養(yǎng)期，LPL活性下降。原因可能與混合營養(yǎng)期的仔魚攝食及消化器官發(fā)育均不完善，攝食和消化能力較弱有關(guān)(姚俊杰等, 2013; 蔣左玉等,2015)，此時，LPL缺乏底物，饑餓狀態(tài)的仔魚使LPL mRNA下調(diào)，導(dǎo)致LPL活力降低。這與朱俊華等(2014)對甌江彩鯉(Cyprinus carpiovar. color)的研究相一致。外源營養(yǎng)期后，攝食及消化能力加強(qiáng)，說明食物可誘導(dǎo)LPL mRNA表達(dá)，使LPL活性升高。

HL活性在圓斑星鰈早期發(fā)育中呈上升趨勢，在外源營養(yǎng)期活性最高。可能與外源營養(yǎng)期仔魚的器官及血液循環(huán)系統(tǒng)趨于完善，外界攝入的食物為HL提供底物有關(guān)(梁正其等, 2013)。其具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

本研究使用25 mg/L的Vc浸泡圓斑星鰈胚胎，測得胚胎的 LPL和 HL比活力變化趨勢與對照組一致，但其活性均顯著高于對照組。結(jié)果表明，適宜水平的Vc浸泡可以促進(jìn)魚體內(nèi)脂質(zhì)的代謝?？赡茉蛴袃蓚€：一是Vc在脂質(zhì)代謝中起到了抗氧化作用，使VE和β-胡蘿卜素水平較高，從而使脂肪的氧化鏈被阻斷，避免脂肪酸過氧化細(xì)胞膜受損，使機(jī)體免疫功能提高(Chienet al, 2001)。同時，機(jī)體中高水平的Vc可提供自由電子使谷胱甘肽由氧化型轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型，使酶系統(tǒng)的活性巰基得到保護(hù)，從而超氧化物歧化酶活性提高(Luoet al, 2003)，使脂質(zhì)膜避免過氧化。二是Vc與圓斑星鰈卵黃囊仔魚體內(nèi)肉堿合成有關(guān)，間接加速了脂質(zhì)代謝(頡志剛等, 2003)，進(jìn)而誘導(dǎo)LPL和HL的合成分泌，保證仔魚對脂質(zhì)的分解利用順利進(jìn)行。表明適宜水平的Vc可促進(jìn)脂質(zhì)代謝。

4 結(jié)論

低于30 mg/L的Vc浸泡可促進(jìn)圓斑星鰈的早期發(fā)育，25 mg/L的Vc浸泡下，圓斑星鰈的孵化率、出膜率和成活率最高，仔魚的全長和體重增加最顯著。25 mg/L的Vc能顯著提高圓斑星鰈仔魚胃蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，并可以促進(jìn)蛋白質(zhì)在魚體內(nèi)的沉積。適宜水平的Vc對圓斑星鰈早期機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的維持和代謝平衡具有重要作用。

Bromage N, Jones J, Randall C,et al. Broodstock management,fecundity egg quality and timing of egg production in rainbow throut (Oncorynchus mykiss). Aquaculture, 1992,100(1–3): 141–166

Brown M, Lavens P. Critical review of the concentration,interactions with other nutrients, and transfer of ascorbic acid in algae, crustaceans and fish. BocaRaton: CRC Press,2001: 167–189

Cejas JR, Almansa E, Jérez S,et al. Changes in lipid class and fatty acid composition during development in white seabream(Diplodus sargus) eggs and larvae. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology,2004, 139(2): 209–216

Chang Q, Zhang XM, Chen SQ,et al. Variations in digestive enzymes activities in tongue fishCynoglossus semilaevislarvae and juveniles. Advance in Marine Science, 2005,23(4): 472–476 [常青, 張秀梅, 陳四清, 等. 半滑舌鰨仔稚魚消化酶活性的變化. 海洋科學(xué)進(jìn)展, 2005, 23(4):472– 476]

Chien LT, Hwang DF. Effects of thermal stress and vitamin C on lipid peroxidation and fatty acid composition in the liver of thornfishTeraponjarbua. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology,2001, 128(1): 91–97

Cousin JCB, Baudin-Laurencin F, Gabaudan J. Ontogeny of enzymatic activities in fed and fasting turbotScophthalmus maximusL. Journal of Fish Biology, 1987, 30(1): 15–33

Gunasekerar M, Desilva S, Ingram BA. Early ontogeny-related changes of the fatty acid composition in the Percichthyid fishes trout cod,Maccullochella macquariensisandMurraycod,M. peeliipeelii. Aquatic Living Resources, 1999, 12(3):219–227

Ji YB, Chen CX, Wang X,et al. The application of vitamins in improving the seedling survival rate ofSilurus glanisLinnaeus. China Fisheries, 2007, 384(11): 60–61 [季延濱,陳成勛, 王祥, 等. 維生素在提高六須鯰育苗成活率中的應(yīng)用. 中國水產(chǎn), 2007, 384(11): 60–61]

Jiang ZY, Yao JJ, Xiong HL,et al. The effects of glucose and vitamin C on the gene expression of lipoprotein lipase and hepatic lipase during the development of the yolk-sac larva ofCarassius auratusgibelio. Progress in Fishery Sciences,2015, 36(6): 43–48 [蔣左玉, 姚俊杰, 熊鏵龍, 等. 普安銀鯽(Carassius auratus gibelio)卵黃囊期脂蛋白脂酶和肝脂酶基因的表達(dá)及葡萄糖、維生素 C對其的影響. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2015, 36(6): 43–48]

Jie ZG, Niu CJ. The study of important and application of vitamin C in fish nutrition and feed. Feed China, 2003, 13(2):29–32 [頡志剛, 牛翠娟. 維生素 C在魚類營養(yǎng)與飼料研究中的重要作用及應(yīng)用. 飼料廣角, 2003, 13(2): 29–32]

Keembiyehetty CN, Wilson RP. Effect of water temperature on growth and nutrient utilization of sunshine bass (Morone chrysops♀×Morone saxatilis♂) fed diets containing different energy/protein ratios. Aquaculture, 1998, 166(1):151–162

Li GF, Qian PF, Sun JJ,et al. Effect of vitamin C on cellular activities and serum factors ofClaris fuscus. Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni, 2005, 44(5): 75–83 [李桂峰, 錢沛鋒, 孫際佳, 等. 維生素C對胡子鯰細(xì)胞活性和血清因子的影響. 中山大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2005,44(5): 75–83]

Li JX. Effect of glucose, sucrose and NaCl to embryo development of zebrafish. Jinan: Shandong Normal University,2007 [李俊霞. 葡萄糖、蔗糖、氯化鈉對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響. 濟(jì)南: 山東師范大學(xué), 2007]

Liang ZQ, Yao JJ, Xiong HL,et al. Growth and development of larvae and juveniles in Puan silver crucian carpCarassius auratusLinnaeus. Fisheries Science, 2013, 32(7): 380–384[梁正其, 姚俊杰, 熊鏵龍, 等. 普安銀鯽仔稚魚的發(fā)育及生長研究. 水產(chǎn)科學(xué), 2013, 32(7): 380–384]

Luo X, Liu Z, Sun Y,et al. Lipophilic enhance of vitamin C protective activity against free-radical-induced damagein vivo. Chemical Research in Chinese Universities, 2003,19(4): 428–431

Menezes GC, Travares Dias M, Ono EA,et al. The influence of dietary vitamin C and E supplementation on the physiological response of Pirarucu,Arapaima gigas, in net culture.Comparative Biochemistry & Physiology, Part A: Physiology,2006, 145(2): 274–279

Moyano FJ, Diaz M, Alarcon FJ,et al. Characterization of digestive enzyme activity during larval development of gilthead seabream. Fish Physiology and Biochemistry, 1996,15(2): 121–130

Selman C, Mclaren JS, Himanka MJ,et al. Effect of long term cold exposure on antioxidant enzyme activities in a small mammal. Free Radical Biology and Medicine, 2000, 28(8):1279–1285

Suzuki H, Gabrielson E, Chen W,et al. A genomic screen for genes upregulated by demethylation and histone deacetylase inhibition in human colorectal cancer. Nature Genetics,2002, 31(6): 141–149

Terova G, Saroglia M, Papp ZG,et al. Ascorbate dynamics in embryos and larvae of seabass and seabream, originating from brood stocks fed supplements of ascorbic acid.Aquaculture Internet, 1998, 6(5): 357–367

Terova G, Saroglia M, Papp ZG,et al. Dynamics of collagen indicating amino acids, in embryos and larvae of sea bass(Dicentrarchus labrax) and gilthead sea bream (Sparus aurata), originated from brood stocks fed with different vitamin C content in the diet. Comparative Biochemistry &Physiology, Part A: Physiology, 1998, 121(2): 111–118

Wang SF, Zhang ZF, Zhang QQ,et al. Morphological and histological studies on development of digestive system inVerasper variegatusTemminck et Schlegel larvae prior to metamorphism. Journal of Fishery Sciences of China, 2006,13(1): 1–7 [王思鋒, 張志峰, 張全啟, 等. 圓斑星鰈仔魚變態(tài)前消化系統(tǒng)發(fā)生的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)研究. 中國水產(chǎn)科學(xué), 2006, 13(1): 1–7]

Wang WH, Wang JQ, Cheng X,et al. Effects of dietary vitamin C levels and sources on growth and immunity of juvenile yellow catfishPelteobagrus fulvidraco(Richardson). Journal of Fishery Sciences of China, 2006, 13(6): 951–958 [王文輝,王吉橋, 程鑫, 等. 不同劑型維生素C對黃顙魚生長和幾種免疫指標(biāo)的影響. 中國水產(chǎn)科學(xué), 2006, 13(6): 951–958]

Xie QS, Li JW, Yang ZC. Japanese flounder fish vitamins and trace elements in the nutritional needs of progress. Modern Agricultural Sciences, 2008, 15(12): 5–7 [謝全森, 李俊偉,楊振才. 鲆鰈魚類維生素及微量元素營養(yǎng)需求研究進(jìn)展.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 15(12): 5–7]

Xiong HL, Yao JJ, An M,et al. Effects of glucose and vitamin C on early development of Puan silver crucian carp (Carassius auratus gibelio). South China Fisheries Science, 2014, 10(6):88–92 [熊鏵龍, 姚俊杰, 安苗, 等. 葡萄糖、維生素C對普安銀鯽早期發(fā)育的影響. 南方水產(chǎn)科學(xué), 2014, 10(6):88–92]

Xue LZ. Effect of the change of environmental factors and nutritious factors on embryo and early larvae of tetraploidChlamys ferreri. Master′s Thesis of Fujian Normal University, 2008 [薛凌展. 環(huán)境和營養(yǎng)因子對四倍體櫛孔扇貝胚胎及早期幼蟲的影響. 福建師范大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文, 2008]

Yao JJ, Liang ZQ, Feng YN,et al. Histological studies on postembryonic development for digestive system ofCarassius auratus. Guizhou Agricultural Sciences, 2013, 41(11): 152–155 [姚俊杰, 梁正其, 馮亞楠, 等. 普安銀鯽消化系統(tǒng)胚后發(fā)育的組織學(xué)觀察. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 41(11): 152–155]

Yao JJ. Correlation between embryonic nutrition and morphorgenesis ofMacrobrachium rosenbergii. Doctoral Dissertation of East China Normal University, 2006 [姚俊杰.羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)胚胎營養(yǎng)與形態(tài)發(fā)生相關(guān)性的研究. 華東師范大學(xué)博士研究生學(xué)位論文,2006]

Zhu JH, Yao JJ, Feng YN,et al. Activities of two lipases and effects ofm-cresol on them during early development ofCyprinus carpiovar.color. Freshwater Fisheries, 2014, 44(1):32–35 [朱俊華, 姚俊杰, 馮亞楠, 等. 甌江彩鯉早期發(fā)育中兩種脂酶活性及間甲酚對其活性的影響. 淡水漁業(yè),2014, 44(1): 32–35]