普勇斌 劉曉敏 陶相宜 崔向朋 李海濱 柳 蹊 徐 瑞 唐 彬

（云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650021）

急性肺損傷（ALI）是在嚴(yán)重感染、休克、創(chuàng)傷及燒傷等非心源性疾?。?］過程中等各種肺內(nèi)、肺外致病因素導(dǎo)致的急性彌漫性炎癥性肺損傷，進(jìn)而引起急性呼吸衰竭，以肺血管通透性增高、肺泡腔滲出富含蛋白質(zhì)的液體、肺水腫及透明膜的形成為主要病理特征，臨床上表現(xiàn)為進(jìn)行性低氧血癥和呼吸窘迫，肺部影像學(xué)上表現(xiàn)為非均一性的滲出性病變［2］。ALI是多系統(tǒng)器官功能不全（MODS）的一個組成部分，也是非常重要的的一個始動環(huán)節(jié)，且病情兇險，預(yù)后惡劣。解毒扶正顆粒是云南省中醫(yī)醫(yī)院據(jù)趙淳教授驗方制成的院內(nèi)制劑，臨床運用于肺系疾病治療［3-4］，取得較好療效。本研究觀察解毒扶正顆粒對ALI小鼠的影響?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級健康雌性Wistar小鼠，體質(zhì)量22～24 g。由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（川）2015.030，飼養(yǎng)于云南省中醫(yī)醫(yī)院實驗中心SPF級實驗室。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實驗。

1.2 試藥與儀器 1）試驗藥物：清熱解毒扶正顆粒為國家級名老中醫(yī)趙淳教授經(jīng)驗方（大黃、翼首草、菲牛蛭、葶藶子、黃芪等），藥材均由云南省中醫(yī)醫(yī)院中藥房提供，按原方比例水煎后濃縮成含生藥3 g/mL，放置在4℃冰箱保存?zhèn)溆谩游锝o藥前以蒸餾水倍比稀釋成含生藥3、1.5、0.75 g/mL 3個不同劑量。2）陽性組藥物：地塞米松（DEX）（浙江仙琚制藥股份有限公司）。3）試劑：內(nèi)毒素（LPS）（批號：055：B5，美國 Sigma 公司）。4）儀器：血氣分析儀由美國雅培公司提供，型號ISTAT 300-G。

1.3 造模與分組 采用一次性腹腔注射LPS（5 mg/kg）復(fù)制ALI模型，模型滿足ALI組織病理特點。按隨機(jī)數(shù)字表法將70只小鼠分為6組，即：空白對照組、模型組、陽性藥物組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，分別稱體質(zhì)量并記錄。

1.4 研究方法 各組小鼠行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，各組別小鼠按照以下方法進(jìn)行處理?？瞻讓φ战M：正常飲食及飲水，第11天同其他組別一同處死。模型組：正常飲食及飲水，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。陽性藥物組：平時正常飲食及飲水，每日予地塞米松腹腔灌注每日1次，連續(xù)腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。中藥低劑量組：平時正常飲食及飲水，每日予解毒扶正顆粒低劑量溶液腹腔灌注每日1次，連續(xù)腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。中藥中劑量組：平時正常飲食及飲水，每日予解毒扶正顆粒中劑量溶液腹腔灌注每日1次，連續(xù)腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。中藥高劑量組：平時正常飲食及飲水，每日予解毒扶正顆粒高劑量溶液腹腔灌注每日1次，連續(xù)腹腔灌注10 d，第11天行LPS腹腔注射造模，6 h后處死。

1.5 標(biāo)本采集與檢測 1）動脈血采集。相應(yīng)的時間點麻醉，在隔絕空氣條件下采集動脈血2 mL，肝素抗凝，測動脈血氧分壓（PaO2）。2）肺組織病理學(xué)檢測。將小鼠解剖，取小鼠右上肺葉，置于體積分?jǐn)?shù)10%甲醛中固定，石蠟包埋制作5 μm切片，HE染色后顯微鏡觀察并照相。由云南省中醫(yī)醫(yī)院病理醫(yī)師讀片。3）動脈血氣分析。相應(yīng)的時間點麻醉，在隔絕空氣條件下采集動脈血2 mL，肝素抗凝，測動脈血PaO2。3）肺水含量計算。肺標(biāo)本脫水前后濕質(zhì)量與干質(zhì)量比值（W/D）表示肺組織含水量，開胸取肺，肺水含量測定各組于相應(yīng)的時間點麻醉處死動物，開胸取出右上肺，稱濕質(zhì)量后，置烤箱（80℃，48 h）烤至衡重，稱干質(zhì)量，計算濕/干質(zhì)量比。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，對計量資料進(jìn)行t檢驗和方差分析，計數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠肺W/D、動脈血PaO2水平比較 見表1。模型組W/D與空白對照組比較顯著升高（P＜0.01），與模型組比較，解毒扶正顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組肺濕/干質(zhì)量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中中劑量組下降最明顯（P＜0.01）。所有實驗大鼠的吸氧濃度均為21%，故以動脈血氧分壓PaO2代替氧合指數(shù)進(jìn)行比較，LPS可以誘導(dǎo)大鼠PaO2顯著降低 （P＜0.01），PaO2在模型組較對照組顯著降低（P＜0.01），解毒扶正顆粒各劑量組、陽性藥物組則較模型組顯著增加（P＜0.01）。

表1 各組大鼠肺W/D、動脈血PaO2水平比較（±s）

表1 各組大鼠肺W/D、動脈血PaO2水平比較（±s）

與空白對照組比較，*P＜0.01；與陽性藥物組比較，△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組 別 n W/D P a O 2（m m H g）空白對照組 6 3.9 5±0.5 1 9 5.5±8.7模型組 6 4.2 4±0.4 9* 6 0.7±1 1.0*陽性藥物組 6 4.0 9±0.4 8 8 9.0±1 0.5▲▲解毒扶正顆粒高劑量組 6 4.2 2±0.3 6△▲ 8 5.5±1 3.8△▲▲解毒扶正顆粒中劑量組 6 4.1 4±0.4 7△▲▲ 8 7.0±1 6.9△▲▲解毒扶正顆粒低劑量組 6 4.2 4±0.3 9△▲ 7 4.3±1 7.4△▲▲

2.2 各組小鼠肺病理組織觀察結(jié)果 見圖1，圖2。光鏡觀察：對照組肺泡結(jié)構(gòu)完整、清晰，肺泡間隔無水腫。模型組：毛細(xì)血管內(nèi)紅細(xì)胞較多，充滿管腔，肺泡腔纖維蛋白滲出較多，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細(xì)胞滲出，肺泡間隔增寬?？瞻讓φ战M：毛細(xì)血管可見少數(shù)紅細(xì)胞，纖維蛋白滲出充滿肺泡腔，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細(xì)胞滲出，肺泡間隔增寬。陽性藥物組：毛細(xì)血管可見少數(shù)紅細(xì)胞，纖維蛋白滲出充滿肺泡腔，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細(xì)胞滲出，肺泡間隔增寬。解毒扶正顆粒高劑量組：毛細(xì)血管可見少數(shù)紅細(xì)胞，肺泡腔少許纖維蛋白，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細(xì)胞滲出，肺泡間隔增寬。解毒扶正顆粒中劑量組：毛細(xì)血管可見少數(shù)紅細(xì)胞，肺泡腔少許纖維蛋白，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細(xì)胞滲出，肺泡間隔增寬。解毒扶正顆粒低劑量組：毛細(xì)血管可見少數(shù)紅細(xì)胞，肺泡腔少許纖維蛋白，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細(xì)胞滲出，肺泡間隔增寬。

3 討 論

目前ARDS/ALI是臨床危重癥治療的難點，膿毒癥及感染性休克時肺損傷最早出現(xiàn)，也常常是導(dǎo)致患者死亡的原因。感染的細(xì)菌多以革蘭陰性菌為主，細(xì)胞壁的主要成分為LPS，LPS的大量和持續(xù)釋放是導(dǎo)致ALI發(fā)生發(fā)展的重要因素。

圖1 各組大鼠右上肺葉病理形態(tài)比較（HE染色，10倍）

圖2 各組大鼠右上肺葉病理形態(tài)比較（HE染色，20倍）

ALI屬中醫(yī)“喘證”“結(jié)胸”“喘脫”“暴喘”等病的范疇。病位在肺，與心、腎、大腸相關(guān)。趙淳教授認(rèn)為ALI在發(fā)病早期的中醫(yī)病機(jī)主要是肺失宣降、氣機(jī)逆亂、毒邪壅滯。其中的毒邪包括熱、毒、痰、瘀等?；颊邿?、毒、痰、喘、瘀、閉的表現(xiàn)突出，宜運用清熱解毒、宣肺平喘、豁痰開竅、攻里通下等治法。趙淳教授指出，與此同時正邪相爭，導(dǎo)致正氣耗傷，表現(xiàn)為正氣虛衰，在肺即為肺氣虛。此時邪毒壅滯，呈現(xiàn)正虛邪實之征。出現(xiàn)臟腑虛損，陰陽逆亂，此即為急性虛癥［5］。天津市第一中心醫(yī)院急救醫(yī)學(xué)研究所王金達(dá)等［6-7］在20世紀(jì)80年代就提出了全身炎癥反應(yīng)綜合征導(dǎo)致膿毒癥的急性虛證的概念。不論外傷、邪毒、六淫、癘氣等原因?qū)е碌年庩?、氣血、臟腑功能迅速虛衰的證候，表現(xiàn)為“邪實未去，正氣已虛”，具有發(fā)病急、病情重、存活率低等特點，它的發(fā)生與機(jī)體免疫狀態(tài)高度相關(guān)。正盛邪退則病愈，正虛邪盛則病進(jìn)［8］。故救治ALI應(yīng)采取清熱解毒與控制感染、扶正祛邪與增強(qiáng)機(jī)體免疫力，活血化瘀與改善微循環(huán)等治則。趙淳教授經(jīng)驗方清熱解毒扶正顆粒具有益氣通絡(luò)、扶正固本、清熱解毒功效。趙淳教授認(rèn)為，血為氣母，氣為血帥；氣行則血行，氣虛、氣滯則血瘀，血瘀則水停；肺朝百脈，主氣而司呼吸，主宣發(fā)肅降，通調(diào)水道，并與大腸相表里。ALI，肺之臟真受損，肺氣虛弱，血脈瘀滯，水壅于肺，失其宣降之職，故發(fā)暴喘。治療上，當(dāng)以益氣活血，瀉肺平喘為法，或“肺實瀉大腸”，即用通腑瀉肺之法，在此法指導(dǎo)下，趙老創(chuàng)制解毒扶正湯一方，易方為顆粒，即解毒扶正顆粒，由大黃、翼首草、菲牛蛭、葶藶子、黃芪共奏，達(dá)益氣、活血、行水、瀉肺、平喘之效。該方中，菲牛蛭俗稱金邊螞蟥，其抗凝血作用、抗血栓作用優(yōu)于其他水蛭［9］。黃芪甘，微溫。歸肺、脾經(jīng)［10］，其有效成分皂苷類、黃酮類、多糖類、氨基酸、微量元素等，可以增強(qiáng)免疫功能［11］；抗自由基、調(diào)節(jié)代謝、保護(hù)線粒體［12］；對多種細(xì)菌有抑制作用［13］，組成該方中的大黃研究發(fā)現(xiàn)，大黃在抗炎方面，具有多靶點作用，對內(nèi)毒素性肺損傷有其獨特優(yōu)勢，大黃素是中藥大黃主要有效成分之一，現(xiàn)代研究證明，大黃素具有抑菌抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、保肝利膽、護(hù)腎利尿、改善微循環(huán)、松弛血管、促進(jìn)胃腸蠕動等作用［14-15］。葶藶子中的芐基芥子油具有廣譜抗菌作用，對酵母菌等20種真菌及數(shù)十種其他菌株均有抗菌作用［16］，有研究認(rèn)為葶藶子有改善ALI的效果，與其改善水通道蛋白5含量或者活性有關(guān)［17］。在臨床實踐中，該方可改善ALI患者的癥狀，減輕肺水腫、改善肺循環(huán)，提高肺的順應(yīng)性，從而改善肺通氣，提高氧合指數(shù)，對提高ALI患者的預(yù)后有積極作用。

本次研究中，模型組動物肺組織切片光鏡下提示毛細(xì)血管內(nèi)紅細(xì)胞較多，充滿管腔，肺泡腔纖維蛋白滲出較多，肺泡腔及間隔小灶狀中性粒細(xì)胞滲出，肺泡間隔增寬，提示復(fù)制ALI模型成功。

通過本實驗發(fā)現(xiàn)解毒扶正顆粒能顯著抑制LPS引起的ALI，表現(xiàn)在解毒扶正顆?？梢鹉Ｐ托∈蠓谓M織濕質(zhì)量/干質(zhì)量比的提高，同時高劑量組、中劑量組、低劑量組動物血PaO2較模型組明顯提高；病理結(jié)果也提示，解毒扶正顆粒不同劑量組動物，其肺病理切片能減少炎癥細(xì)胞的肺內(nèi)積聚，減少肺泡萎陷及肺毛細(xì)血管滲出。根據(jù)本實驗結(jié)果，可以證實解毒扶正顆粒對肺損傷有保護(hù)作用，為進(jìn)一步研究提供了實驗依據(jù)。

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