亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        遲緩愛德華氏菌對大菱鲆巨噬細(xì)胞相關(guān)生物效應(yīng)分子產(chǎn)生的影響

        2018-03-27 00:33:31孫玉英畢可然高迎莉
        水產(chǎn)科學(xué) 2018年2期
        關(guān)鍵詞:大菱鲆氏菌愛德華

        秦 蕾,孫玉英,畢可然,高迎莉

        (淮海工學(xué)院 海洋生命與水產(chǎn)學(xué)院,江蘇 連云港 222005)

        遲緩愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)是水產(chǎn)養(yǎng)殖魚類的一種極其重要的致病原。隨著全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展,因該菌引發(fā)的病害問題日益突出,給該產(chǎn)業(yè)帶來了很大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。魚類遲緩愛德華氏菌病難以防控的原因是多方面的。其中,遲緩愛德華氏菌是胞內(nèi)寄生菌,對其致病機(jī)理和胞內(nèi)寄生機(jī)制不清楚是主要原因之一。研究表明,魚類主要通過巨噬細(xì)胞參與對遲緩愛德華氏菌感染的炎癥應(yīng)答[2-5]。遲緩愛德華氏菌可以逃避巨噬細(xì)胞的吞噬并在巨噬細(xì)胞內(nèi)繁殖,最終導(dǎo)致宿主全身感染[6]。 遲緩愛德華氏菌與巨噬細(xì)胞的相互作用是該菌感染致病過程的重要環(huán)節(jié),針對其互作機(jī)制的研究,對魚類遲緩愛德華氏菌病的防治具有重要意義。

        目前較為集中深入的工作是關(guān)于遲緩愛德華氏菌各種毒力因子的研究,包括T3SS、T6SS、雙組份系統(tǒng)、溶血素和外膜蛋白等[7-12], 但對遲緩愛德華氏菌復(fù)雜的胞內(nèi)寄生機(jī)制仍缺乏足夠了解,對遲緩愛德華氏菌與巨噬細(xì)胞的互作關(guān)系也仍然不明確,這在很大程度上限制了對魚類遲緩愛德華氏菌病的防治。 巨噬細(xì)胞主要通過凋亡、產(chǎn)生活性氧和一氧化氮等效應(yīng)分子的方式來清除病原微生物[13-15]。本研究通過對不同毒力遲緩愛德華氏感染巨噬細(xì)胞后產(chǎn)生的Caspase-3、活性氧和一氧化氮等相關(guān)生物效應(yīng)分子進(jìn)行測定,探討不同毒力菌株對巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響,旨在為明晰遲緩愛德華氏菌的致病機(jī)理和胞內(nèi)寄生機(jī)制奠定基礎(chǔ),同時(shí)也為尋找根除魚類遲緩愛德華氏菌病的關(guān)鍵靶點(diǎn)開辟新的思路。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)材料

        試驗(yàn)用健康大菱鲆(Scophthalmusmaximus)取自江蘇贛榆某大菱鲆養(yǎng)殖場,充氧運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)3 d后用于分離巨噬細(xì)胞,遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株和弱毒株分離自不同養(yǎng)殖場患病的大菱鲆,其半數(shù)致死密度分別為3.2×102cfu/mL和1.7×106cfu/mL。

        1.2 試驗(yàn)試劑

        L-15培養(yǎng)基(Gibco);胎牛血清(Gibco);Percoll(Pharmacia);青鏈霉素、慶大霉素(碧云天);MS-222(杭州動物藥品廠);TrypLE(Invitrogen);Caspase-3檢測試劑盒(BioVision);活性氧(ROS)測試盒(南京建成);一氧化氮檢測(NO)試劑盒(碧云天)。

        1.3 大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)

        間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽麻醉大菱鲆,75%酒精消毒魚體剖取頭腎。用加有雙抗和慶大霉素的細(xì)胞洗滌液清洗頭腎,清洗后將其置于100目的細(xì)胞篩上研磨得到細(xì)胞懸液。利用31%/45%的Percoll密度梯度,400 g,20 min,水平離心分離巨噬細(xì)胞。收集位于梯度帶的巨噬細(xì)胞加入L-15培養(yǎng)基,200 g,5 min離心反復(fù)清洗兩次。獲得的巨噬細(xì)胞以1.5×106cfu/mL密度接種于24孔板,20 ℃培養(yǎng)24 h后換新培養(yǎng)基,以去除懸浮細(xì)胞,提高巨噬細(xì)胞純度。培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞TrypLE消化后計(jì)數(shù)并同時(shí)做細(xì)胞涂片,甲醛固定用于Giemsa染色觀察。

        1.4 遲緩愛德華氏菌侵染巨噬細(xì)胞

        巨噬細(xì)胞換新培養(yǎng)基后加入計(jì)數(shù)好的處于對數(shù)生長期的菌液進(jìn)行感染,感染復(fù)數(shù)采用50∶1 (設(shè)3個(gè)重復(fù)), 400 g離心5 min,孵育2 h,細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌3次,加入含有200 μg/mL的慶大霉素處理1 h,洗滌3次后繼續(xù)培養(yǎng),在指定的時(shí)間點(diǎn)取樣做各項(xiàng)檢測。同時(shí)設(shè)不加菌液的細(xì)胞作為對照。

        1.5 巨噬細(xì)胞Caspase-3活性檢測

        分別在感染后12 h和24 h取樣,按Caspase-3檢測試劑盒說明進(jìn)行操作,計(jì)數(shù)細(xì)胞1×106cfu/mL,用50 μL預(yù)冷的細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞,冰上孵育10 min,10 000 g離心1 min,測定上清液蛋白濃度,稀釋100 μg蛋白于50 μL細(xì)胞裂解液中,先后加入50 μL 2×反應(yīng)緩沖液(含10 mmol/L DTT)和5 μL 4 mmol/L DEVD-pNA底物(終濃度200 mmol/L),孵育2 h后酶標(biāo)儀讀數(shù)A405。

        1.6 巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧檢測

        活性氧檢測工作在菌液加入巨噬細(xì)胞后直接進(jìn)行。分別在感染后30 min和120 min添加DCFH-DA于細(xì)胞培養(yǎng)基中(工作濃度10 μmol/L),孵育30 min。TrypLE消化細(xì)胞2 min,培養(yǎng)基終止消化,600 g離心5 min收集細(xì)胞,預(yù)冷的 1磷酸鹽緩沖液洗2遍,離心收集細(xì)胞沉淀物,磷酸鹽緩沖液重懸后酶標(biāo)儀讀數(shù)A525。

        1.7 巨噬細(xì)胞一氧化氮分泌量測定

        于感染后6 h和24 h吸取上清培養(yǎng)液。按一氧化氮測定試劑盒操作分別加入Griess試劑,測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中巨噬細(xì)胞一氧化氮生成量。

        1.8 統(tǒng)計(jì)分析

        所有結(jié)果數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,與對照組比較;P<0.05,不同毒力感染組比較)。

        2 結(jié) 果

        2.1 大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞的Giemsa染色觀察

        培養(yǎng)的大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞經(jīng)Giemsa染色見圖1,可見細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,胞質(zhì)豐富,含有大小不等的空泡,胞核較小多偏向一端,符合巨噬細(xì)胞典型的形態(tài)特點(diǎn)。

        圖1 大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞的Giemsa染色(比例尺=10 μm)

        2.2 不同毒力遲緩愛德華氏菌誘發(fā)巨噬細(xì)胞Caspase-3活性的比較

        遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株和弱毒株分別感染巨噬細(xì)胞12 h和24 h后,胞內(nèi)Caspase-3的活性檢測結(jié)果見圖2。與對照組相比,兩株菌感染的巨噬細(xì)胞均能檢測到較高的Caspase-3活性,而且隨時(shí)間延長其活性逐漸增加,其中弱毒株感染組Caspase-3的活性在各時(shí)間點(diǎn)均顯著高于強(qiáng)毒株感染組(P<0.05)。

        2.3 不同毒力遲緩愛德華氏菌誘發(fā)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧的比較

        研究結(jié)果顯示,遲緩愛德華氏菌能夠誘發(fā)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧,感染后30 min,強(qiáng)毒株感染組和弱毒株感染組巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧差異不顯著(P>0.05);但感染后120 min,與弱毒株相比,強(qiáng)毒株能夠顯著抑制活性氧的產(chǎn)生(P<0.05),表明強(qiáng)毒株未能引發(fā)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的呼吸爆發(fā)(圖3)。

        圖2 遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株和弱毒株對巨噬細(xì)胞Caspase-3活性的影響

        圖3 遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株和弱毒株對巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧的影響

        2.4 不同毒力遲緩愛德華氏菌誘發(fā)巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮的比較

        遲緩愛德華氏菌能夠誘發(fā)大菱鲆巨噬細(xì)胞釋放一氧化氮,但與弱毒株感染組相比,在各時(shí)間點(diǎn)強(qiáng)毒株感染表現(xiàn)出對巨噬細(xì)胞釋放一氧化氮的抑制作用(P<0.05)(圖4)。

        圖4 遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株和弱毒株對巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮的影響

        3 討 論

        巨噬細(xì)胞不僅是執(zhí)行固有免疫重要的效應(yīng)細(xì)胞,同時(shí)作為抗原呈遞細(xì)胞也在適應(yīng)性免疫應(yīng)答中起重要輔助功能。其強(qiáng)大的吞噬能力能對病原菌造成很大的威脅,而病原微生物在與巨噬細(xì)胞的長期斗爭過程中會逐漸形成多種逃避殺傷的有效策略,使其得以在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活并增殖[16]。已有的研究證實(shí),遲緩愛德華氏菌能夠在巨噬細(xì)胞內(nèi)生存和繁殖[17-19],這說明遲緩愛德華氏菌具備適應(yīng)巨噬細(xì)胞殺傷的能力,并且能夠在巨噬細(xì)胞內(nèi)大量繁殖并導(dǎo)致隨后的全身性感染,而遲緩愛德華氏菌弱毒株卻能被巨噬細(xì)胞吞噬后逐漸清除顯示出較弱的致病能力[14]。

        Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中caspase-3是最關(guān)鍵的執(zhí)行分子,它在凋亡信號傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。在細(xì)胞凋亡的早期階段,Caspase-3被激活裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,最終導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡。Caspase-3的活化是細(xì)胞凋亡進(jìn)入不可逆階段的標(biāo)志[20]。巨噬細(xì)胞發(fā)生凋亡可殺死胞內(nèi)寄生菌,阻止細(xì)菌在宿主體內(nèi)的傳播擴(kuò)散,并能激活臨近未感染的巨噬細(xì)胞增強(qiáng)其對病原的殺傷力[21-22]。因此,對胞內(nèi)寄生菌而言,巨噬細(xì)胞的凋亡情況對其命運(yùn)至關(guān)重要。本研究發(fā)現(xiàn),不同毒力的遲緩愛德華氏菌侵染巨噬細(xì)胞后都能夠檢測到Caspase-3的活性,但與弱毒株相比,遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株能夠顯著抑制Caspase-3的活性。研究結(jié)果表明,遲緩愛德華氏菌能夠觸發(fā)巨噬細(xì)胞發(fā)生不同程度的凋亡,但強(qiáng)毒株能夠抑制巨噬細(xì)胞凋亡,從而在胞內(nèi)存活繁殖,而弱毒株則能誘發(fā)巨噬細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致其最終被清除。Okuda等[18]在遲緩愛德華氏菌感染鼠巨噬細(xì)胞的研究中也證實(shí),遲緩愛德華氏菌能夠通過上調(diào)NF-κB基因的表達(dá)來抑制巨噬細(xì)胞的凋亡從而來保護(hù)自己。 遲緩愛德華氏菌的這種抗凋亡能力可能為其逃離凋亡細(xì)胞之前提供足夠的時(shí)間以改變其毒力相關(guān)的表型,從而增強(qiáng)其感染寄生的能力。遲緩愛德華氏菌的抗凋亡機(jī)制目前仍不十分清楚,還有待進(jìn)一步研究。

        活性氧在巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中扮演著極其重要的角色,巨噬細(xì)胞受到刺激或進(jìn)行吞噬作用后能夠發(fā)生呼吸爆發(fā),產(chǎn)生大量活性氧,并通過活性氧清除吞噬的微生物。然而其產(chǎn)生的氧壓力同時(shí)對巨噬細(xì)胞本身也會產(chǎn)生重要的影響[23]。已發(fā)現(xiàn)遲緩愛德華氏菌能夠抑制藍(lán)曼龍頭腎巨噬細(xì)胞和牙鲆腹腔巨噬細(xì)胞活性氧的釋放[14,17]。同樣,本研究結(jié)果顯示遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株未能引起大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的呼吸爆發(fā),進(jìn)一步證實(shí)該菌株有能力阻止巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧,以達(dá)到保護(hù)自己和減少巨噬細(xì)胞受損從而為其提供更適居住場所的雙重目的。遲緩愛德華氏菌抑制活性氧產(chǎn)生的機(jī)制尚不十分明確。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)遲緩愛德華氏菌能夠上調(diào)RhoGDI蛋白的表達(dá)(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表), 該蛋白被證實(shí)能夠抑制活性氧的主要來源-NADPH氧化酶的活化[24],或許能夠解釋這一現(xiàn)象,但遲緩愛德華氏菌抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧的真正機(jī)制還有待探討。

        作為活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種重要的細(xì)胞效應(yīng)分子,一氧化氮能夠介導(dǎo)巨噬細(xì)胞抑制和殺傷細(xì)菌、病毒及寄生蟲等病原體,是巨噬細(xì)胞防御系統(tǒng)中的一個(gè)重要因子[25]。本研究發(fā)現(xiàn),與弱毒株相比,遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株能夠顯著抑制大菱鲆頭腎巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量一氧化氮。與之類似,強(qiáng)毒力結(jié)核桿菌也表現(xiàn)出對巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮的抑制作用[26]。 遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株表現(xiàn)出對巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的抑制作用可能是其能夠逃避巨噬細(xì)胞殺傷的重要原因之一。然而,Ishibe等[15]研究卻發(fā)現(xiàn)相較于弱毒株,遲緩愛德華氏菌強(qiáng)毒株能誘發(fā)牙鲆腹腔巨噬細(xì)胞更多的一氧化氮產(chǎn)生。不同來源的巨噬細(xì)胞對遲緩愛德華氏菌應(yīng)答出現(xiàn)部分差異,可能與巨噬細(xì)胞存在的異質(zhì)性有關(guān)[27],但也無法排除菌株之間的差異所導(dǎo)致的結(jié)果。

        本研究闡明了不同毒力遲緩愛德華氏菌感染對巨噬細(xì)胞應(yīng)激的調(diào)控作用,初步揭示了遲緩愛德華氏菌與巨噬細(xì)胞相互作用的機(jī)理,即強(qiáng)毒株和弱毒株分別對巨噬細(xì)胞的應(yīng)激發(fā)揮抑制和誘導(dǎo)作用,從而影響了細(xì)菌的生長,繁殖和宿主的發(fā)病,為闡明遲緩愛德華氏菌病的發(fā)病機(jī)制提供了理論依據(jù)。

        [1] Xu T T,Zhang X H.Edwardsiellatarda:an intriguing problem in aquaculture [J].Aquaculture,2014,431(2):129-135.

        [2] Darwish A,Plumb J A,Newton J C.Histopathology and pathogenesis of experimental infection withEdwardsiellatardain channel catfish[J].J Aquat Anim Health,2000,12(4):255-266.

        [3] Meagan E P,Peter E,Phelan Ⅲ,et al.Pathogenesis and inflammatory response toEdwardsiellatardainfection in the zebrafish[J].Dev Comp Immunol,2005,29(6):501-513.

        [4] Padrós F,Zarza C,Dopazo L,et al.Pathology ofEdwardsiellatardainfection in turbot,Scophthalmusmaximus(L.)[J].J Fish Dis,2006,29(2):87-94.

        [5] Qin L,Xu J,Wang Y G.Edwardsiellosis in farmedScophthalmusmaximus(L.),associated with unusual variant ofEdwardsiellatarda: a clinical,aetiological and histopathological study[J].J Fish Dis,2014,37(2):103-111.

        [6] Leung K Y,Siame B A,Tenkink B J,et al.Edwardsiellatarda-virulence mechanisms of an emerging gastroenteritis pathogen[J].Microbes Infect,2012,14(1):26-34.

        [7] 王波,莫照蘭.遲緩愛德華氏菌及其致病機(jī)理[J].海洋科學(xué)集刊,2007(48):138-144.

        [8] 賀揚(yáng),張曉華.遲緩愛德華氏菌致病相關(guān)因子的研究進(jìn)展[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2009,39(5):979-987.

        [9] 王斌,李軍偉,趙鳳梅,等.遲鈍愛德華氏菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)蛋白功能域預(yù)測[J].水產(chǎn)科學(xué),2013,32(7):385-390.

        [10] Hu Y H,Sun L.The global regulatory effect ofEdwardsiellatardaFur on iron acquisition,stress resistance,and host infection: a proteomics-based interpretation[J].J Proteomics,2016,140(5):100-110.

        [11] Chen H,Yang D H,Han F J,et al.The bacterial T6SS effector EvpP prevents NLRP3 inflammasome activation by inhibiting the Ca2+-Dependent MAPK-Jnk Pathway[J].Cell Host Microbe,2017,21(1): 47-58.

        [12] Liu F,Tang X,Sheng X,et al.Comparative study of the vaccine potential of six outer membrane proteins ofEdwardsiellatarda,and the immune responses of flounder (Paralichthysolivaceus) after vaccination[J].Veterinary Immunology & Immunopathology,2017,185(2):38-47.

        [13] Lancellotti M,Brocchi M,Silveira W D D.Bacteria- induced apoptos and approach to bacterial pathogenesis[J].Braz J Morphol Sci,2006,23(1):75-86.

        [14] Ishibe K,Osatomi K,Hara K,et al.Comparison of the responses of peritoneal macrophages from Japanese flounder (Paralichthysolivaceus) against high virulent and low virulent strains ofEdwardsiellatarda[J].Fish and Shellfish Immun,2008,24(2):243-251.

        [15] Ishibe K,Yamanishi T,Wang Y,et al.Comparative analysis of the production of nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor-[alpha](TNF-[alpha]) from macrophages exposed to high virulent and low virulent strains ofEdwardsiellatarda[J].Fish and Shellfish Immun,2009,27(2):386-389.

        [16] 羅云蔓,郭曉奎,姜敘誠.病原菌逃避單核-巨噬細(xì)胞殺滅策略的研究進(jìn)展[J].微生物與感染,2010,5(2):117-120.

        [17] Srinivasa R P S,Lim T M,Leung K Y.Opsonized virulentEdwardsiellatardastrains are able to adhere to and survive and replicate within fish phagocytes but fail to stimulate reactive oxygen intermediates[J].Infect Immun,2001,69(9):5689-5697.

        [18] Okuda J,Arikawa Y,Takeuchi Y,et al.Intracellular replication ofEdwardsiellatardain murine macrophage is dependent on the type Ⅲ secretion system and induces an up-regulation of anti-apoptotic NF-κB target genes protecting the macrophage from staurosporine-induced apoptosis[J].Microb Pathogenesis,2006,41(6):226-240.

        [19] Qin L,Sun Y Y,Zhao Y J,et al.In vitro model to estimateEdwardsiellatarda-macrophage interactions using RAW264.7 cells[J].Fish & Shellfish Immun,2017,60(1):177-184.

        [20] Porter A G,Janicke R U.Emerging roles of caspase-3 in apoptosis[J].Cell Death Differ,1999,6(2):99-104.

        [21] Vaux D L,H?cker G.Hypothesis: apoptosis caused by cytotoxins represents a defensive response that evolved to combat intracellular pathogens[J].Clin Exp Pharmacol Physiol,1995,22(11):861-863.

        [22] 史會連,孫東平,陳澍,等.結(jié)核桿菌毒力的研究進(jìn)展 [J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2012,32(4):378-380.

        [23] Pick E.Role of the Rho GTPase Rac in the activation of the phagocyte NADPH oxidase: outsourcing a key task[J].Small Gtpases,2014,5(1):e27952.

        [24] Abo A,Webb M R,Grogan A,et al.Activation of NADPH oxidase involves the dissociation of p21rac from its inhibitory GDP/GTP exchange protein (rhoGDI) followed by its translocation to the plasma membrane[J].Biochem J,1994,298(3):585-591.

        [25] O′brien L,Carmichael J,Lowrie D B,et al.Strains ofMycobacteriumtuberculosisdiffer in susceptibility to reactive nitrogen intermediates in vitro[J].Infect Immun,1994,62(11):5187-5190.

        [26] 劉丹霞,董偉杰,庹清章,等.不同毒力結(jié)核分枝桿菌對感染宿主巨噬細(xì)胞應(yīng)激的調(diào)控作用研究[J].中國病原生物學(xué)雜志,2013(3):217-219.

        [27] Forlenza M,Fink I,Raes,R G,et al.Heterogeneity of macrophage activation in fish[J].Dev Comp Immunol,2001,35(12):1246-1255.

        猜你喜歡
        大菱鲆氏菌愛德華
        愛德華·蒙克
        愛德華·馬奈
        幼兒100(2024年10期)2024-03-27 05:50:28
        我國華東與華南地區(qū)養(yǎng)殖魚類遲緩愛德華氏菌分離株的多樣性分析
        《剪刀手愛德華》(海報(bào))
        散文詩(2022年16期)2022-09-07 07:06:50
        黃海水產(chǎn)研究所“一種大菱鲆油乳化疫苗及其應(yīng)用”獲國家發(fā)明專利授權(quán)
        遼寧大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展形勢分析
        體外培養(yǎng)法探討不同蛋白源對大菱鲆腸道菌群的影響
        飼料維生素C含量對半滑舌鰨抵抗遲緩愛德華氏菌感染的影響
        染料木黃酮對大菱鲆生長、消化酶活力和腸道組織結(jié)構(gòu)的影響
        Tn7轉(zhuǎn)座子在大腸桿菌、遲鈍愛德華氏菌及鰻弧菌中的應(yīng)用
        色综合天天综合网国产成人网 | 久久久av精品波多野结衣| 国产一级特黄无码免费视频| 国产一区二区三区免费精品| 日韩精品久久午夜夜伦鲁鲁| 国产视频一区二区三区在线看| 少妇一区二区三区久久| 爆乳熟妇一区二区三区霸乳| 国产AV无码专区久久精品网站| 亚洲日本一区二区在线观看 | 无码人妻h动漫中文字幕| 亚洲熟妇无码av另类vr影视| 亚洲欧美日韩在线中文一| av一区二区在线免费观看| 国产在热线精品视频| 中文字幕无码不卡免费视频| 久久HEZYO色综合| 少妇太爽了在线观看免费| 亚洲人成77777在线播放网站| 综合网自拍| 国产日韩精品视频一区二区三区| av影片在线免费观看| 日本道精品一区二区三区| 正在播放淫亚洲| 亚洲天堂av一区二区三区不卡| 成人爽a毛片免费视频| 国产做无码视频在线观看浪潮| 亚洲一区极品美女写真在线看 | 免费人成网站在线观看| 欧美亚洲一区二区三区| 特级毛片a级毛片免费播放| 一本色道久久综合中文字幕| 天天射综合网天天插天天干| 内射少妇36p亚洲区| 国产免费播放一区二区| 国产精品自拍视频在线| 97久久综合区小说区图片区| 澳门精品无码一区二区三区| 在线观看国产av一区二区| 999国产精品999久久久久久| 国内少妇偷人精品视频免费|