陽(yáng)小勇

(滇西科技師范學(xué)院 生物技術(shù)與工程學(xué)院,云南 臨滄 677009)

云南酸木瓜是薔薇科、木瓜屬植物果實(shí)[1]。云南省是我國(guó)乃至世界酸木瓜的主產(chǎn)區(qū),年產(chǎn)量在5000噸以上[2]。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)酸木瓜的化學(xué)成分進(jìn)行深入的研究,發(fā)現(xiàn)酸木瓜中含有豐富的有機(jī)酸、黃酮類、萜類、多糖類以及鞣質(zhì)等[3],這些成分對(duì)人體及食品工業(yè)有著重要的意義:鞣質(zhì)是鎮(zhèn)痛消炎、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的活性物質(zhì)[4];蘋(píng)果酸及其鈉鹽、反丁烯二酸對(duì)小白鼠艾氏腹水癌有較高的抑制率;三萜類成分中的齊墩果酸具有保肝作用；多酚類物質(zhì)、槲皮素衍生物是食品工業(yè)的重要抗氧化劑；等等。近年來(lái),國(guó)內(nèi)對(duì)酸木瓜浸膏的抗氧化性做了大量研究,但對(duì)云南臨滄(酸木瓜主產(chǎn)地)所產(chǎn)酸木瓜的抗氧化性研究較少。本文對(duì)云南臨滄特產(chǎn)——酸木瓜的抗氧化性進(jìn)行測(cè)定研究,以期為酸木瓜的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

UV6100紫外分光光度計(jì)、FA1004電子天平、恒溫水浴鍋、索氏提取器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、鼓風(fēng)干燥箱、粉碎機(jī)等。

1.2 材料

新鮮酸木瓜、磷酸二氫鉀(AR)、雙氧水(AR)、新鮮豬油、乙酸乙酯(AR)、硫代硫酸鈉(AR)、碘(AR)、碘化鉀(AR)、淀粉指示劑、鄰二氮菲(AR)、無(wú)水乙醇(AR)、硫酸亞鐵(AR)、DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)(AR),試驗(yàn)用水均為二次蒸餾水。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 酸木瓜浸膏制備

酸木瓜浸膏制備流程如圖1所示。

圖1 酸木瓜浸膏制備流程圖

1.3.2 酸木瓜浸膏的最佳提取條件優(yōu)化正交試驗(yàn)

以溶劑比、時(shí)間、料劑比、溫度為單因素,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上選取各因素中的最佳試驗(yàn)點(diǎn)作為正交試驗(yàn)點(diǎn)。以溶劑比、時(shí)間、料劑比、溫度為4個(gè)因素,每個(gè)因素確定3個(gè)水平,每組以8 g木瓜干粉原料計(jì),進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表1。

1.3.3 ·OH清除率測(cè)定[5]

將表1(序號(hào)1-9)中的浸膏配制成濃度為10.00 mg/mL的溶液。取11支試管,分別加入pH值為7.40、濃度為150.00 mmol/L的PBS溶液1.50 mL，濃度為0.75 mmol/L的鄰二氮菲溶液1.00 mL，充分混勻后再加入濃度為0.75 mmol/L的FeSO4溶液1.00 mL,并立即混合均勻。向其中9支試管分別加入表1(序號(hào)1-9)中的浸膏試樣溶液1.00 mL并搖晃均勻,然后在每支試管中加入1.00 mL 0.01%的H2O2。另2支分別為損傷管和未損傷管,均不加入酸木瓜浸膏試樣溶液。在損傷管中加入1.00 mL 0.01%的H2O2,未損傷管以蒸餾水補(bǔ)充相同體積。11支試管于37 ℃保溫1 h,在波長(zhǎng)536 nm處測(cè)A536,計(jì)算·OH 清除率,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2?！H清除率計(jì)算公式為:

A1:損傷管吸光度

A0：未損傷管吸光度

A2：加樣試液吸光度

表1 正交試驗(yàn)結(jié)果

1.3.4 DPPH·清除率測(cè)定[6]

取10支試管,其中1支加入濃度為0.20 mg/mL的DPPH乙醇溶液1.00 mL做空白, 第2-10支試管中分別加入濃度為0.20 mg/mL的DPPH乙醇溶液1.00 mL，再依次加入表1(序號(hào)1-9)中濃度均為10.00 mg/mL的浸膏試樣溶液1.00 mL, 每支試管用無(wú)水乙醇定容至5.00 mL?；靹蚝蠓胖?0 min,在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定每支試管溶液的吸光度,計(jì)算 DPPH·清除率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3。DPPH·清除率計(jì)算公式為：

A1:加入樣品溶液時(shí)的吸光度

A0：DPPH溶液的吸光度

1.3.5 對(duì)豬油的抗氧化作用研究[7]

稱取10份豬油, 每份30 g,一份留作空白,其他9份中分別添加表1(序號(hào)1-9)中的酸木瓜浸膏試樣。添加量為豬油的0.20%,充分?jǐn)嚢?。置?70±1 ℃)培養(yǎng)箱保存, 每隔6 h攪拌1次,每隔24 h測(cè)定POV值1次。采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009. 37—2003推薦的Na2S2O3-I2滴定法(碘量法)測(cè)定,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖4。

2 結(jié)果與分析

由表1可知:溶劑極性減少,浸膏得率也隨之降低,原因是酸木瓜中水溶性有機(jī)酸、多酚及多糖類含量較高。但當(dāng)V乙醇∶V乙酸乙酯=1∶3時(shí),浸膏得率未見(jiàn)明顯下降,估計(jì)溶劑萃取到更多的脂溶性黃酮化合物和棕櫚酸。從極差來(lái)看,影響得率的因素主要是溶劑比和溫度。溫度高,虹吸頻率加快,萃取效率就高,即使在料劑比為1∶6和浴溫90 ℃的條件下提取1.5 h，也能得到滿意的得率。

由圖2可知:所有浸膏對(duì)H2O2/Fe2+體系通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH都具有清除作用,清除率最高的是采用V乙醇∶V乙酸乙酯=1∶3的溶劑比制得的浸膏,其原因可能是溶劑極性較低,浸膏中具有抗氧化性的多酚類物質(zhì)含量增大。

由圖3可知:所有浸膏對(duì)DPPH·都具有清除作用,清除率最高的是采用V乙醇∶V乙酸乙酯=1∶3的溶劑比得到的浸膏。

據(jù)GB 10146—2005規(guī)定，動(dòng)物油脂的POV≤16 meq/kg[8]。從圖4可以看出,采用表1中V乙醇:V乙酸乙酯=3∶1的溶劑比所提取的浸膏,對(duì)豬油抗氧化效果最差,隨著溶劑中乙酸乙酯含量增加,所得浸膏的抗氧化性能逐漸提高。但隨著時(shí)間的延長(zhǎng),各種浸膏的抗氧化性能均明顯下降,可見(jiàn)浸膏中的抗氧化劑易被環(huán)境中的氧化劑氧化。

圖2 不同方法提取浸膏對(duì)·OH的清除率

圖3 不同方法提取浸膏對(duì)DPPH·的清除率

圖4 不同方法提取浸膏對(duì)豬油的抗氧化性能比較(POV)注：抑制率=[(空白油樣的POV增值-處理油樣的POV增值)/空白油樣的POV增值]×100%

3 結(jié)語(yǔ)

云南酸木瓜含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分,既可食用,又可入藥。它所富含的有機(jī)酸、多糖及黃酮類化合物還是綠色食品添加劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同配比的乙酸乙酯與乙醇溶液提取的酸木瓜浸膏均具有良好的抗氧性能,故在飲料、罐頭、果酒、果汁中添加一定量的酸木瓜浸膏,既能起到防腐作用,又可改善風(fēng)味與口感。本試驗(yàn)結(jié)論可作為酸木瓜食品開(kāi)發(fā)的參考依據(jù)。

[1]陳瑤,李坤明,陳偉,等.云南少數(shù)民族地區(qū)木瓜屬植物的開(kāi)發(fā)利用[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2013(6):52-54.

[2]董文明,董坤,邵金良.云南酸木瓜開(kāi)發(fā)利用現(xiàn)狀及其發(fā)展對(duì)策[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006(4).

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[4]吳冰,王成永.木瓜中鞣質(zhì)的含量測(cè)定[J].中醫(yī)藥臨床雜志,2008,20(2):190-191.

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[8]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì),中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).食用動(dòng)物油脂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn):GB10146-2005[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2005.