王愛毅，王建萍，王 翔，路兆軍，李保進

(1.龍口市環(huán)保局，山東 龍口 265700； 2.煙臺市農(nóng)業(yè)科學研究院，山東 煙臺 264000； 3.煙臺市林業(yè)科學研究所，山東 煙臺 264000)

一葉萩(Flueggeasuffruticosa(Pall.)Baill.)又名葉底珠、懶漢菜等，是大戟科白飯樹屬落葉灌木或小喬木。除西北尚未發(fā)現(xiàn)外，全國各省區(qū)均有分布，蒙古、俄羅斯、日本、朝鮮等地也有分布[1-2]。一葉萩繁殖能力強，觀賞價值高，抗寒抗旱，生長迅速，是荒山綠化和園林綠化的優(yōu)良樹種之一[3]；其嫩枝、葉及花富含一葉萩堿(securinine)和二氫一葉堿等多種生物堿，可入藥，有活血舒筋、健脾益腎等功效[4]。富含的一葉萩堿，可治面部神經(jīng)麻痹、嗜睡癥等癥。臨床試驗表明，一葉萩堿有較好的抗腫瘤活性，在臨床上有重要作用[5]。一葉萩幼嫩莖葉可以食用，營養(yǎng)價值高、口感好，是一種集藥用和食用于一身的新型野生蔬菜，近幾年已受到人們的重視，極具開發(fā)潛力[6]。

一葉萩通常采用播種和分株繁育，但存在育苗周期長、母株分離數(shù)量少等現(xiàn)實問題，不能滿足規(guī)?；缧枨?，限制了其推廣應(yīng)用。組織快繁則具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)高、保存親本優(yōu)良性狀等諸多優(yōu)點，可有效解決目前存在的突出問題，實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)苗木的規(guī)?；a(chǎn)需要。本試驗通過對一葉萩的組培快繁技術(shù)進行研究，探索出最佳初代、繼代、生根培養(yǎng)基以及移栽基質(zhì)，旨在為一葉萩的規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

以一葉萩莖尖和莖段為供試材料。取春季一年生新梢，去掉葉片，在自來水下沖洗1 h，然后在超凈工作臺上先用75%酒精浸泡40 s，然后用0.1%升汞浸泡9～10 min，最后用無菌水沖洗4～6次。在超凈工作臺上將消毒好的莖尖用解剖針仔細的將幼葉剝?nèi)?，接種到預先配制好的培養(yǎng)基上，莖段剪成1～2 cm的小段接種到培養(yǎng)基上，基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，蔗糖30 g·L-1，瓊脂7.0～7.3 g·L-1，pH值為5.8，光照強度1 500～2 000 lx，光照時間為14 h·d-1，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，空氣相對濕度為40%～70%。

初代外植體培養(yǎng)30 d左右，待分化成苗后，轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基上。在1/2MS增殖培養(yǎng)基中形成一定數(shù)量的試管苗，剪取高約1.5 cm以上的健壯幼苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，當生出3～4條1 cm左右的新根時，即可煉苗移栽。在自然光下馴化煉苗1周，然后進行透氣鍛煉，每天噴清水2～3次，3 d后取出幼苗，洗凈根部的培養(yǎng)基進行移栽。

2 結(jié)果與分析

2.1 莖段生長

由表1可以看出，濃度較高的6-BA與不同濃度的IBA組合，萌芽率較高，但生長細弱，有玻璃化現(xiàn)象，葉片表現(xiàn)畸形；IBA濃度較高時，與不同濃度的6-BA搭配萌芽率均不是很高。由此可見，高濃度IBA不利于一葉萩莖尖分化；較低濃度的6-BA與較高濃度的IBA搭配時，萌芽率均比較高；綜合萌芽率與芽的生長情況來看，最佳培養(yǎng)基是6-BA 0.50 mg·L-1+IBA 0.20 mg·L-1，萌芽率為96%，且長勢健壯；最差培養(yǎng)基為6-BA 1.00 mg·L-1+IBA 0.30 mg·L-1，雖然萌芽率較高，為71%，但芽生長細弱，且玻璃化現(xiàn)象嚴重。

2.2 莖尖生長

由表2可以看出，在不同濃度的培養(yǎng)基上，莖尖萌芽率與莖段表現(xiàn)出相似的規(guī)律，高濃度的6-BA芽生長細弱，有玻璃化現(xiàn)象；IBA濃度較高時莖尖萌芽率均比較低；最佳培養(yǎng)基也是6-BA 0.50 mg·L-1+IBA 0.20 mg·L-1；但是在同樣濃度的培養(yǎng)基中，莖尖萌芽率明顯低于莖段萌芽率，莖段最高萌芽率為96%，而莖尖最高萌芽率為57%，且最低萌芽率僅有21%，因此可以得出一葉萩莖段比莖尖更適于組織培養(yǎng)。

表1 不同培養(yǎng)基對一葉萩莖段生長的影響

表2 不同培養(yǎng)基對一葉萩莖尖生長的影響

2.3 增殖生長

由表3可以看出，GA3對一葉萩增殖生長影響較大，相同濃度的6-BA和IBA，添加GA3與不添加GA3增殖系數(shù)差距明顯；GA3濃度相同的條件下，IAA濃度越高增殖系數(shù)越高；IAA濃度相同的條件下，6-BA濃度越高，增殖系數(shù)越高，雖然叢生芽多，但是生長細弱，且葉片顏色發(fā)黃，不適合進行增殖培養(yǎng)；當培養(yǎng)為6-BA 0.5 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1+GA30.1 mg·L-1時，雖然增殖系數(shù)不是最高，但是生長健壯，葉片顏色綠色，因此認為是最佳增殖培養(yǎng)基。

2.4 生根

由表4可以看出，是否添加NAA均能生根，但較低濃度的NAA能更好的促進生根。當NAA濃度為0.10 mg·L-1時生根率最高，為88%，且平均根長最長，為1.7 cm；濃度繼續(xù)增加，生根率和根長均下降。當濃度為0.30 mg·L-1時，生根率僅為27%，平均根長只有0.1 cm，可見高濃度的NAA抑制一葉萩生根。

表3 不同培養(yǎng)基對一葉萩增殖生長的影響

表4 不同培養(yǎng)基對一葉萩生根的影響

2.5 煉苗與移栽

由表5可知，以蛭石為基質(zhì)成活率最高，為90%；蛭石+草炭土基質(zhì)次之，為87%；沙+蛭石基質(zhì)成活率也較高，為77%；草炭土成活率最低，僅為17%，且易爛根，這可能是由于透氣性差的緣故；在沙中成活率也較低，僅有25%，這可能是與沙保水性差有關(guān)。

表5 不同基質(zhì)對一葉萩試管苗移栽的影響

3 小結(jié)與討論

3.1 初代培養(yǎng)

黃烈健等[7]認為，外植體的選擇要考慮不同樹種的生理特點、遺傳因素等方面，不同樹種最佳外植體不同，與外植體的發(fā)生途徑有關(guān)。本試驗在相同濃度激素配比的情況下，一葉萩初代培養(yǎng)莖段和莖尖成活率分別為96%和57%，表明一葉萩最適宜進行組織培養(yǎng)的外植體為莖段。

形成一個完整植株要經(jīng)歷誘導期、增殖期、分化期、壯苗生根期等幾個時期，其生長過程主要受培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件等因素的共同影響，其中激素的種類和濃度是至關(guān)重要的[8]。初代培養(yǎng)表明，一葉萩最佳初代培養(yǎng)基為6-BA 0.50 mg·L-1+IBA 0.20 mg·L-1，較高濃度的6-BA能促進不定芽生成，但濃度高易引起玻璃化現(xiàn)象，這與周瑞金等[9]在對棗樹離體葉片再生植株的研究結(jié)果相同；關(guān)于6-BA、IBA使用效果的比較，報道不盡一致，只有適當?shù)募毎至阉睾蜕L素及其適宜的濃度配比才能獲得較高的不定芽再生效果，而本試驗中較高濃度的IBA則不利于不定芽的生成。

3.2 繼代培養(yǎng)

一葉萩最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.50 mg·L-1+IAA 0.20 mg·L-1+GA30.10 mg·L-1。研究發(fā)現(xiàn)，6-BA對愈傷組織和芽的增殖效果比其他細胞分裂素的效果要好[10]，本試驗增殖培養(yǎng)中6-BA濃度越高，增殖能力越強；但濃度過高，造成叢生芽比較細弱。本試驗中是否添加GA3差距明顯，這與王建萍等[11]認為赤霉素能促進櫻桃砧木吉塞拉不定芽及葉片的形成結(jié)果一致。

3.3 生根與移栽

生根培養(yǎng)結(jié)果表明，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.10 mg·L-1。不添加NAA也有根系生成，但效果相對添加NAA來說要差一些，這與劉鮮艷[12]在梨的研究中結(jié)果一致，但NAA濃度太高，對生根有抑制作用。移栽時采用蛭石作為基質(zhì)成活率最高，在蛭石+草炭土中成活率也較高，采用草炭土、沙作為基質(zhì)時成活率都比較差，因此試管苗移栽時須保證基質(zhì)的透氣性，否則易爛根，同時也要保證基質(zhì)的保水性，否則容易干枯死亡。

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