李超，房春林，楊海涵

（1.四川省新獸藥工程技術(shù)研究中心，四川 溫江 611130；2.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院，四川 溫江 611130）

目前，由大腸桿菌等細(xì)菌導(dǎo)致的腹瀉是畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)廣泛流行的疾病，腹瀉嚴(yán)重者甚至脫水死亡，給養(yǎng)殖戶造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。為防治畜禽細(xì)菌性腹瀉，常選用喹諾酮類、氨基糖苷類、硝基呋喃類、喹惡啉類及磺胺類等化學(xué)藥物。但由于長(zhǎng)期不規(guī)范用藥，造成臨床上產(chǎn)生了大量的耐藥菌，這給臨床控制此類疾病帶來(lái)巨大的困難，人們迫切需要療效較好、快速緩解癥狀、對(duì)腸道有較好保護(hù)作用，尤其能治療耐藥性細(xì)菌引起的畜禽腹瀉的藥物。三顆針顆粒是純中藥制劑，其主要有效成分為小檗堿，有清熱燥濕、抗菌消炎、瀉火解毒等功效。實(shí)驗(yàn)室前期臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，該中藥制劑對(duì)細(xì)菌性腹瀉和胃腸炎等有不錯(cuò)的療效。本試驗(yàn)旨在研究三顆針顆粒對(duì)小鼠的急性、亞慢性毒性，觀察該制劑的毒性作用，以對(duì)藥物的安全性做出客觀評(píng)價(jià)，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與設(shè)備 谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、尿酸氨（BUN）、肌酐（CRE）試劑盒，清洗液，稀釋液；主要設(shè)備包括BS-180全自動(dòng)生化分析儀、BC-2800Vet獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀。以上產(chǎn)品均來(lái)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)藥物 三顆針顆粒，含1g生藥/g顆粒，由四川省新獸藥工程技術(shù)研究中心自制。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明系小白鼠120只，雌雄各半，體重18～22g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所養(yǎng)殖研究室公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為：SYXK（川）2013-16。動(dòng)物檢疫馴化時(shí)間為7d，室溫20～25℃，相對(duì)濕度60%，自然光照。

1.4 急性毒性試驗(yàn) 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[1]，采用上下法測(cè)定三顆針顆粒的LD50，詳細(xì)記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)情況和死亡情況，用AOT425StatPgm軟件計(jì)算半數(shù)致死量（LD50）及其近似置信區(qū)間。

1.5 亞慢性毒性試驗(yàn)

1.5.1 劑量與分組 將小鼠隨機(jī)均分為4組，即三顆針顆粒高、中、低劑量組和生理鹽水對(duì)照組。根據(jù)三顆針顆粒的用藥原則，采用口服灌胃，按體重和分組計(jì)算給藥量并定時(shí)給藥，每日1次，連續(xù)給藥42d，要及時(shí)按體重變化調(diào)整給藥量。具體劑量和分組見表1。

表1 亞慢性毒性試驗(yàn)分組

1.5.2 檢查項(xiàng)目 （1）一般指標(biāo)：每天觀察小鼠的采食、飲水及健康狀況，及時(shí)記錄和分析小鼠出現(xiàn)的各種變化。

（2）體重：飼養(yǎng)期間，每周稱量小鼠體重，詳細(xì)記錄。

（3）血常規(guī)和血清生化指標(biāo)：42d給藥結(jié)束后，測(cè)定紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、白細(xì)胞數(shù)（WBC）、血紅蛋白量（HGB）、紅細(xì)胞比積（HCT）、血小板數(shù)（PLT）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）和肌酐（CRE）。

（4）臟器指數(shù)：42d給藥結(jié)束后，對(duì)照組和高劑量組分別取5只雌鼠、5只雄鼠處死，稱重。剖檢處死的小鼠，取主要器官——心、肝、脾、肺、腎，稱重，計(jì)算各臟器的相對(duì)重量（臟器重/體重），即臟器指數(shù)。

（5）組織病理學(xué)：對(duì)取下來(lái)的小鼠心、肝、脾、肺、腎進(jìn)行取樣、包蠟、切片，進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。

（6）數(shù)據(jù)處理：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)條件下，三顆針顆粒對(duì)小鼠灌胃給藥的LD50為149.9g生藥/kg，95%的近似置信區(qū)間為88～175g生藥/kg。給藥后，小鼠的急性毒性癥狀主要表現(xiàn)為自發(fā)活動(dòng)減少、俯臥、呼吸急促，嚴(yán)重的死亡，解剖和病理檢查發(fā)現(xiàn)主要臟器無(wú)異常。

2.2 亞慢性毒性試驗(yàn)

2.2.1 一般狀況 試驗(yàn)期間，藥物各個(gè)劑量組和陰性對(duì)照組的小鼠，其外觀體征、行為活動(dòng)、糞便性狀均正常，口、耳、眼、生殖器無(wú)異常分泌物，也未見其他異常癥狀，未出現(xiàn)死亡。體重與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05），結(jié)果見表2。

表2 亞慢性毒性試驗(yàn)中小鼠的體重變化g

2.2.2 血常規(guī)及血液生化指標(biāo) 42d給藥結(jié)束后，三顆針顆粒各劑量組小鼠的血常規(guī)和血液生化指標(biāo)與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果見表3。

表3 亞慢性毒性試驗(yàn)中小鼠血常規(guī)和血清生化指標(biāo)的變化情況

2.2.3 剖檢觀察和臟器指數(shù) 42d給藥結(jié)束后剖檢小鼠，未發(fā)現(xiàn)可疑病變，三個(gè)不同劑量組的各臟器指數(shù)與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果見表4。

表4 亞慢性毒性試驗(yàn)中小鼠的臟器指數(shù)變化

2.2.4 組織病理學(xué) 將三顆針顆粒高劑量組和對(duì)照組小鼠的心、肝、脾、肺、腎組織進(jìn)行病理學(xué)切片檢查，發(fā)現(xiàn)各器官形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，無(wú)異常的病理學(xué)變化。

3 討論

3.1 急性毒性試驗(yàn) 急性毒性試驗(yàn)是指短時(shí)間內(nèi)對(duì)動(dòng)物單次或多次給藥，觀察給藥后動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況，引起半數(shù)致死的劑量為半數(shù)致死劑量，用LD50表示，這是評(píng)價(jià)獸藥急性毒性的常用方法[2]。進(jìn)行藥物急性毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)就是評(píng)價(jià)半數(shù)致死量與藥物毒性大小的相關(guān)性[3]，本次試驗(yàn)LD50為149.9 g生藥/kg，大于15 g生藥/kg，根據(jù)毒性物質(zhì)等級(jí)劃分，屬于無(wú)毒性。

3.2 亞慢性毒性試驗(yàn) 評(píng)價(jià)某種藥物的毒性，除了進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)外還要進(jìn)行亞慢性毒性試驗(yàn)。通過(guò)該試驗(yàn)可獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多日接觸較大劑量藥物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)，為臨床使用提供參考依據(jù)[4]。體重和臟器指數(shù)值的升高或降低可以不同程度地反映藥物對(duì)動(dòng)物的影響，也是衡量藥物毒性的一個(gè)重要指標(biāo)。在連續(xù)用藥42d后，各組小鼠的體重與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異（P＞0.05），說(shuō)明三顆針顆粒對(duì)小鼠體重和臟器指數(shù)的影響很小。

血常規(guī)檢測(cè)主要是對(duì)血液中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板這三個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行量和質(zhì)的檢測(cè)與分析，是最基本的血液檢驗(yàn)，其數(shù)值高低能反映動(dòng)物在營(yíng)養(yǎng)、感染或組織損傷方面的情況。肝臟和腎臟是機(jī)體重要的代謝器官，多數(shù)藥物都要經(jīng)過(guò)肝臟轉(zhuǎn)化然后經(jīng)過(guò)腎臟代謝排出體外，ALT、AST和TP活性是反映肝功能的重要指標(biāo)[5]，肌酐和尿素氮是反映腎功能的兩個(gè)重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中各給藥組小鼠的血常規(guī)和血液生化指標(biāo)跟對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異，各項(xiàng)指標(biāo)和藥物劑量也沒有呈現(xiàn)出規(guī)則變化，說(shuō)明三顆針顆粒對(duì)小鼠肝、腎無(wú)損傷。

4 結(jié)論

通過(guò)急性和亞慢性毒性試驗(yàn)，得出三顆針顆粒屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí)，說(shuō)明該中藥制劑在臨床長(zhǎng)期使用時(shí)不會(huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生毒性作用。

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[2] 農(nóng)業(yè)部獸藥審評(píng)委員會(huì).獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2012：84.

[3] 易愛玲，鄒福生，魏盈盈，等.復(fù)方金沙利膽顆粒藥效學(xué)及急性毒性研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2015，31（7）：560-562.

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