齊亞靈 李 玥 隋洪玉 楊 哲 逄德志 張澤宇 向 雨 賈琳琳 王偉群

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154002)

腎細(xì)胞癌(RCC)占成人惡性腫瘤的3%，據(jù)統(tǒng)計(jì)該病每年新發(fā)150 000例，病死約為115 000例。RCC中腎透明細(xì)胞癌(RCCC)是最常見(jiàn)的亞型，比例高達(dá)85%〔1〕。炎癥反應(yīng)在腫瘤中有重要作用，當(dāng)免疫應(yīng)答不能精確地控制炎癥反應(yīng)時(shí)，可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞周期、DNA修復(fù)和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的變化，這些變化連同腫瘤微環(huán)境中的炎性細(xì)胞、免疫調(diào)節(jié)介質(zhì)等可共同影響腫瘤的進(jìn)程和轉(zhuǎn)移〔2〕。本實(shí)驗(yàn)探討炎性趨化因子CXC配體(L)3在 RCCC中的重要作用。

1 材料與方法

1.1主要材料及試劑 組織芯片(上海芯超生物有限公司)；兔抗CXCL3單克隆抗體(Immunoway,美國(guó))；免疫組化二抗(SABC)試劑盒(博士德，武漢)；光學(xué)顯微鏡(奧林巴斯,日本)；3，3′-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑(博士德，武漢)。

1.2組織芯片信息 組織芯片包括30例RCCC組織和30例相應(yīng)的癌旁組織。

1.3免疫組織化學(xué)染色 組織芯片常規(guī)脫蠟入水；芯片置于10 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液中(pH6.0)用微波進(jìn)行抗原修復(fù)20 min；待冷卻后，芯片置于3%過(guò)氧化氫中室溫?fù)嵊?0 min以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；用正常兔血清室溫封閉20 min，勿洗；滴加兔抗CXCL3單克隆抗體(1∶150)于4℃冰箱撫育過(guò)夜； Tris鹽酸緩沖鹽溶液(TBS)清洗芯片3次×5 min;滴加生物素標(biāo)記山羊抗小鼠IgG，37℃撫育30 min；TBS清洗3次×5 min;滴加SABC，37℃撫育30 min；TBS清洗4次×15 min;滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑，鏡下觀察染色情況；待出現(xiàn)著色后立即用自來(lái)水終止顯色；行蘇木素復(fù)染、分化、脫水及封片。

1.4結(jié)果分析 CXCL3蛋白染色強(qiáng)度用以下兩個(gè)參數(shù)評(píng)分:(1)染色強(qiáng)度：無(wú)染色計(jì)0分；輕度染色計(jì)1分；中度染色計(jì)2分；強(qiáng)染色計(jì)3分。(2)陽(yáng)性細(xì)胞百分比：無(wú)著色計(jì)0分；1/100著色計(jì)1分；1/10著色計(jì)2分；1/3著色計(jì)3分；2/3著色計(jì)4分。用兩個(gè)參數(shù)得分之和代表CXCL3蛋白表達(dá)量。

1.5統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1RCCC與癌旁組織CXCL3表達(dá)情況 RCCC組織CXCL3表達(dá)水平顯著低于癌旁組織；RCCC組織和癌旁組織腎透明細(xì)胞癌Ⅲ級(jí)組織CXCL3表達(dá)水平均顯著高于Ⅱ級(jí)(P<0.05)。見(jiàn)表1和圖1。

表1 RCCC與癌旁組織CXCL3表達(dá)差異

與Ⅱ級(jí)比較：1)P=0.044，2)P=0.037

圖1 CXCL3在RCCC與癌旁組織表達(dá)(DAB，×200)

2.2CXCL3表達(dá)與RCCC臨床病理參數(shù)關(guān)系 CXCL3表達(dá)水平與RCCC臨床病理參數(shù)如腫瘤大小、性別、年齡不具有相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 CXCL3表達(dá)與RCCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討 論

腫瘤微環(huán)境(TME)中含有腫瘤細(xì)胞及不同類型的多種細(xì)胞，這些細(xì)胞可經(jīng)細(xì)胞間復(fù)雜的信號(hào)交流網(wǎng)絡(luò)參與腫瘤進(jìn)程。在這其中，細(xì)胞間相互通訊的重要調(diào)控分子之一就是趨化因子。在TME中，腫瘤相關(guān)宿主細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞會(huì)釋放一系列趨化因子，從而招募和激活不同類型的細(xì)胞，影響抗腫瘤和促腫瘤之間的平衡。此外，趨化因子也參與腫瘤的其他進(jìn)程，如腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和血管生成等〔3～5〕。

前列腺癌中CXCL3的相關(guān)研究結(jié)果顯示，外源性CXCL3可顯著促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的遷移，但對(duì)細(xì)胞的增殖沒(méi)有影響，進(jìn)一步研究表明外源性CXCL3可調(diào)節(jié)前列腺癌細(xì)胞腫瘤相關(guān)基因細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)、腫瘤蛋白(TP)73、細(xì)胞內(nèi)適應(yīng)蛋白(NUMB)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2相關(guān)X蛋白(BAX)和N-myc下游調(diào)節(jié)蛋白(NDRG)3的表達(dá)〔6〕。隨后，應(yīng)用免疫組化實(shí)驗(yàn)觀察到前列腺癌組織中CXCL3蛋白表達(dá)量顯著高于非癌組織〔6〕。本研究表明與前列腺癌相同，CXCL3表達(dá)量也隨RCCC的發(fā)展和演進(jìn)而逐漸增高。腫瘤微環(huán)境中的腫瘤上皮細(xì)胞、正常上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及趨化炎性細(xì)胞可分泌多種趨化因子，它們可經(jīng)自分泌和旁分泌途徑作用于腫瘤細(xì)胞膜上的相應(yīng)趨化因子受體而影響腫瘤的增殖和存活〔7〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示CXCL3可能主要由癌旁組織分泌，然后經(jīng)微環(huán)境作用于癌組織的相應(yīng)受體而參與RCCC進(jìn)程，即在RCCC 中CXCL3可能主要經(jīng)旁分泌途徑發(fā)揮調(diào)節(jié)功能。

1Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics〔J〕.Cancer J Clin，2013;63(1):11-30.

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3Chow MT，Luster AD.Chemokines in cancer〔J〕.Cancer Immunol Res，2014;2(12):1125-31.

4齊亞靈，王偉群，張建華，等.CXC 趨化因子配體 5 對(duì)前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2014;34(11):3035-6.

5曲修勝，劉媛媛，孫華威，等.趨化因子CXC配體12/CXC受體4在前列腺癌細(xì)胞的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖的作用機(jī)制〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2017;37(7):1568-70.

6Gui SL，Teng LC，Wang SQ.Overexpression of CXCL3 can enhance the oncogenic potential of prostate cancer〔J〕.Int Urol Nephrol，2016;48(5):701-9.

7Balkwill F.Cancer and the chemokine network〔J〕.Nat Rev Cancer，2004;4(7):540-50.