蔣梅香，李飛艷，李福元，陳 容，袁 媛

(湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)系，湖南 株洲 412012)

七厘散是骨傷科經(jīng)典方劑， 2010、2015版中國藥典一部均有收載，處方組成包括血竭、乳香、朱砂等8味中藥，具有化瘀消腫，止痛止血之功效，主要用于跌撲損傷，血瘀疼痛，外傷出血[1]。方中朱砂主要成分為HgS，作為含汞中藥，其對人體的毒性是巨大的和多方面的，關(guān)于朱砂或含朱砂中成藥的毒性已有不少研究報(bào)道[2-6]，并已日益引起人們的重視[7]。又由于國家及國際上對中藥中的重金屬限量有嚴(yán)格要求，限制了七厘散的廣泛使用及出口[8]?？寡鬃饔檬瞧呃迳⒒鱿[重要功效的藥理作用基礎(chǔ)之一，本項(xiàng)目對七厘散和去除朱砂的七厘散的抗炎作用進(jìn)行比較研究，為七厘散中的朱砂是否可以舍棄提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

(1)自制七厘散：處方由血竭500 g，乳香(制)75 g，沒藥(制)75 g，紅花75 g，兒茶120 g，冰片6 g，人工麝香6 g，朱砂60 g組成。以上八味，除人工麝香、冰片外，朱砂水飛成極細(xì)粉；其余血竭等五味粉碎成細(xì)粉。將人工麝香、冰片研細(xì)，與上述粉末配研，過篩，混勻，即得。(2)自制去朱砂七厘散：除不加朱砂外，其余組成與制法同七厘散。(3)陽性對照藥：阿司匹林腸溶片(規(guī)格：25 mg/片)，云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號：ZDA1609。

1.2 儀器與試劑

Mettler AE240電子分析天平(瑞士梅特勒公司)；PV-200足趾容積測量儀(成都泰盟軟件有限公司)； 9 mm 打孔器；二甲苯(純度：99%，廠家洛陽昊華化學(xué)試劑有限公司，批號061204)；雞蛋清。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物

KM小鼠，體重20±2 g，雄性；SD大鼠，體重180±20 g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)動物均為SPF級，購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動物合格證號SCXK(湘)2014-0011。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠耳腫脹法

選取雄性KM小鼠60只，體重20±2 g，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為模型對照組、阿司匹林組、七厘散低劑量組、七厘散高劑量組、去朱砂七厘散低劑量組、去朱砂七厘散高劑量組。模型對照組以蒸餾水灌胃，其他各組以相應(yīng)的藥物灌胃，灌胃體積為0.2 mL/10 g，灌胃劑量為阿司匹林組0.76 g/kg、七厘散低劑量組0.68 g/kg、七厘散高劑量組2.05 g/kg、去朱砂七厘散低劑量組0.64 g/kg、七厘散去朱砂高劑量組1.91 g/kg。連續(xù)用藥3 d，最后一次用藥30 min后，將致炎劑二甲苯涂在小鼠左耳前后兩面使致炎，右耳作對照。4 h后將小鼠斷頸椎處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用9 mm直徑打孔器分別在左右耳同一部位即原致炎部位取圓耳片，稱重，根據(jù)文獻(xiàn)方法[9-10]計(jì)算耳腫脹度(致炎耳重-未致炎耳重)、腫脹率(%)=100×(致炎耳重﹣未致炎耳重)/未致炎耳重。

1.4.2 大鼠足趾浮腫法

SD大鼠60只，雌雄各半，體量180±20 g，隨機(jī)分為6組，分組同“1.4.1”項(xiàng)下方法，灌胃體積為1 mL/100 g，模型對照組以蒸餾水灌胃，其他組用藥劑量分別為阿司匹林組0.52 g/kg、七厘散低劑量組0.47 g/kg、七厘散高劑量組1.42 g/kg、去朱砂七厘散低劑量組0.44 g/kg、七厘散去朱砂高劑量組1.32 g/kg。連續(xù)用藥3 d，第3天給藥前測量大鼠右腳足趾容積，用藥30 min后于大鼠后足趾皮下注射100%雞蛋清0.1 mL,分別在注射后1、2、3 h用足趾容積測量儀測量右足趾的容積，根據(jù)文獻(xiàn)方法[10]計(jì)算足趾腫脹率，腫脹率(%)=100×(炎后足趾容積﹣炎前足趾容積)/炎前足趾容積。

1.4.3 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 對小鼠耳腫脹的影響

與模型對照組比較，阿司匹林組小鼠的腫脹度和腫脹率均顯著降低；七厘散高劑量組、去朱砂七厘散高劑量組均能顯著降低耳腫脹度和腫脹率。與阿司匹林組比較，各給藥組腫脹度和腫脹率有升高的趨勢，但均無明顯差異。與七厘散高、低劑量組比較，去朱砂七厘散高、低劑量組均無明顯差異，結(jié)果見表1。

表1 含與不含朱砂的七厘散對小鼠耳腫脹的影響Tab 1 Effect of Qili San with or without cinnabar on the ear swelling in mice (±s，n=10 )

注：與模型對照組比較：▲P<0.05, ★P<0.01。note: vs the model group, ▲P<0.05, ★P<0.01。

2.2 對大鼠足趾腫脹的影響

與模型對照組比較，阿司匹林在致炎后3 h內(nèi)能顯著降低大鼠足趾腫脹率；除七厘散低劑量組在第3 h外，七厘散和去朱砂七厘散各劑量組在致炎3 h內(nèi)均能顯著降低大鼠足趾腫脹率。與阿司匹林組比較，七厘散和去朱砂七厘散各劑量組的大鼠足趾腫脹率有升高的趨勢，但均無明顯差異。與七厘散各劑量組比較，去朱砂七厘散各劑量組的大鼠足趾腫脹率均無明顯差異，結(jié)果見表2。

表2 含與不含朱砂的七厘散對大鼠足趾腫脹的影響Tab 2 Effect of Qili San with or without cinnabar on the paw edema in rats (±s，n=10 )

注：與模型對照組比較，▲P<0.05,★ P < 0.01。 note: vs the model group, ▲P<0.05, ★P<0.01。

3 討論

2015年版中國藥典規(guī)定，七厘散臨床用量為3～4.5 g/d，以4.5 g/d計(jì)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動物與人(成人按60 kg體重算)按體表面積比折算等效劑量的換算關(guān)系，得出大鼠等效劑量為0.47 g(藥物)/kg(體重)，小鼠的等效劑量為0.68 g(藥物)/kg(體重)。前期采用最大受試藥物量試驗(yàn)法完成的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，SD大鼠每日最大受試藥物量為灌胃七厘散2.08 g/kg(相當(dāng)于人臨床用藥量的4.4倍)，KM小鼠每日最大受試藥物量為灌胃七厘散6.07 g/kg(相當(dāng)于人臨床用藥量的8.9倍)，且均未出現(xiàn)死亡。根據(jù)人臨床用藥量，結(jié)合急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，決定本實(shí)驗(yàn)中等效劑量即為低劑量，高劑量與低劑量之比為1∶3。

齊江寧[7]等“含朱砂口服中成藥中汞的生物利用性及安全性評價”中采用體外消化透析法模擬人體胃腸消化，測出6種常用含朱砂中成藥在人工胃液中汞的溶出率在0.14%～1.96%范圍內(nèi)，小腸階段汞可接受率為0.0038%～0.0117%；再利用汞在人體半衰期和蓄積中毒量反推出汞的安全閾值為每人每天0.099 mg。而《中國藥典》七厘散的每日用量為3～4.5 g，朱砂在七厘散處方中比例為60 g(朱砂處方量)/917g(處方總克數(shù))=6.54%，由此推算每日朱砂用量為3～4.5 g×6.54% ≈196～294 mg，這大大超出了實(shí)驗(yàn)測得的汞的日安全閾值。所以從降低中成藥中重金屬的毒副作用出發(fā)，我們設(shè)計(jì)了該實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證朱砂是否對七厘散的化瘀消腫功效有影響。

實(shí)驗(yàn)表明七厘散、去朱砂七厘散均有一定的抗急性炎癥作用，不同劑量的七厘散和去朱砂七厘散的抗炎作用強(qiáng)度不同，在一定范圍內(nèi)隨劑量的增加抗炎作用增強(qiáng)。與七厘散各劑量組比較，去朱砂七厘散各劑量組的小鼠耳腫脹率和大鼠足趾腫脹率均無明顯差異，因此，單以抗炎作用而論，可以去掉七厘散中的朱砂。

本實(shí)驗(yàn)為七厘散舍棄朱砂提供了抗炎實(shí)驗(yàn)依據(jù)，至于在止痛、止血等功效方法，七厘散中朱砂能否去除，我們將繼續(xù)進(jìn)行研究。

[1] 中國藥典編委會.中國藥典2015年版，一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：458.

[2] 丁國華,楊 堃,孫 燕,等.大鼠口服朱砂的組織分布[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2009,27(7):1360-1361.

[3] 梁愛華,李春英,薛寶云,等.朱砂汞在大鼠體內(nèi)的蓄積性研究[J].中國中藥雜志,2009,34(33):3068-3071.

[4] 劉建璇,陳 穎,付 萍,等.朱砂中汞在大鼠體內(nèi)蓄積的研究[J].世界元素學(xué),2006,13(14):29-30.

[5] 康 永,李先榮,程 霞,等.朱砂對中樞神經(jīng)系統(tǒng)某些藥理作用的研究及其毒性觀察[J].時珍國醫(yī)國藥,1998,9(6):532.

[6] 陳 斌,肖 敏,李飛艷,等.朱砂妊娠用藥的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2013,19(2):99-100.

[7] 齊江寧,胡廣林,龐京團(tuán),等.含朱砂口服中成藥中汞的生物利用性及安全性評價[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(11):2749-2751.

[8] 范桂高,南 方.新加坡中藥管理評述[J].國外醫(yī)學(xué)：衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)分冊,2007,24(2):86-96.

[9] 羅 軍,馮麗華，李科元,等.新傷藥膏鎮(zhèn)痛、抗炎作用的試驗(yàn)研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(3):633-634.

[10] 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,1991:764-767.