閆新玲 王?，| 古麗那爾·阿布拉江 馬遇慶1，（通訊作者）

（1新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病理教研室 新疆 烏魯木齊 830054）

（2烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院病理科 新疆 烏魯木齊 830000）

（3新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院病理科 新疆 烏魯木齊 830054）

我國每年死于食管癌的人數(shù)在15萬以上[1]，且呈逐年上升趨勢。新疆是哈薩克族聚居地，其食管癌發(fā)病率明顯高于其他民族[2]。近年研究表明Wnt/β-catenin信號通路在腫瘤細胞內與生長分化有關，是信號轉導障礙導致增值失控的重要因素[3]。有研究證實CK2在Wnt通路中可發(fā)揮正調節(jié)作用[4]。SFRP2在食管鱗癌中發(fā)揮抑癌基因的作用，其表觀遺傳沉默導致其抑癌作用喪失或削弱，從而可能影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。但關于CK2和SFRP2在ESCC及二者在新疆兩民族的研究很少，應用免疫組織化學法進行檢測，現(xiàn)報告如下。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選取2007年2月—2014年1月在新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院經手術病理證實的原發(fā)食管癌患者165例，術前均行鋇餐、局部活檢等確診原發(fā)食管癌，臨床表現(xiàn)為不同程度的進行性吞咽困難，并伴有營養(yǎng)不良，消瘦等癥狀。男性111例，女性54例，年齡：39～80歲，平均（53±6）歲。

1.2 檢測方法

1.2.1 免疫組織化學染色法 將組織玻片置于65℃烤箱中，2h后脫蠟水化，用PBS充分沖洗，孵育15分鐘，再次沖洗，用枸緣酸鹽溶浸潤玻片和切片架高溫加熱，冷卻后PBS沖洗3遍共10分鐘；加入1∶200的CK2和SFRP2一抗，置于4℃的環(huán)境下過夜；PBS沖洗，滴加二抗，孵育90分鐘，DNA顯色，常規(guī)脫水封片。

1.2.2 表達程度判定標準 免疫組化結果由兩位病理醫(yī)生共同判定。雙盲法在每張切片隨機選取10個高倍視野從細胞的染色強度和陽性細胞數(shù)進行判讀。3分為棕褐色，2分為棕黃色，1分為淡黃色，0分為無著色。陽性細胞數(shù)：4分為≥76%，3分為51%～75%，2分為11%～50%，1分為1%～10%。將兩項評分相乘得出最終結果：強陽性（+++）≥5分，中陽性（++）4分，弱陽性（+）3分，陰性（-）＜3分。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，進行Wilcoxon秩和檢驗，分析CK2及SFRP2表達與新疆兩民族ESCC患者的臨床參數(shù)的差異，以計數(shù)資料對比，采用卡方檢驗以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2.結果

2.1 兩民族ESCC的臨床病理特征

該實驗以患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、腫瘤類型、浸潤深度、淋巴結轉移情況，血管和神經的侵犯等狀況進行免疫組化法對照分析研究（表略）。

2.2 檢測結果

2.2.1 CK2的表達及臨床參數(shù)間的關系 CK2陽性表達定位于ESCC細胞漿和細胞核，鏡下呈褐色或黃褐色顆粒分布。CK2在165例ECSS中61.2%陽性表達；癌旁組織34.5%陽性表達,癌組織中的表達明顯高于癌旁；兩者陽性率之間的比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.01），見表1 CK2的表達與浸潤深度密切相關（P＜0.05），與其他臨床病理參數(shù)無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）CK2在ESCC中陽性表達哈薩克族56例，漢族50例,兩者比較差異沒有統(tǒng)計學意義（P=0.111）（表略）

表1 CK2在食管癌組織和癌旁正常組織中的表達

圖1 CK2的表達（免疫組化*400）

2.2.2 SFRP2的表達及臨床參數(shù)間的關系 （表2） SFRP2陽性表達定位于ESCC細胞漿和細胞核，鏡下呈褐色或黃褐色顆粒分布。SFRP2在165例癌旁組織中72.1%陽性表達；ECSS中27.2%陽性表達。SFRP2在癌旁組織中的表達明顯高于ESCC，兩者陽性率之間的比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。哈薩克族56例，漢族50例，兩民族陽性表達率比較其差異沒有統(tǒng)計學意義（P=0.111），F(xiàn)RP2與臨床參數(shù)無明確相關性（P＞0.05）（表略）SFRP2在ESCC的表達不存在民族差異性（表略）

表2 SFRP2在食管癌組織和癌旁組織中的表達

圖2 SFRP2在食管癌組織和癌旁組織中的表達（免疫組化*100）

2.3 CK2和SFRP2相關性

表3 CK2與SFRP2的表達與食管鱗狀細胞癌的相關性

經統(tǒng)計學χ2分析發(fā)現(xiàn)CK2在食管癌組織中的表達與SFRP2的表達之間無明確相關性（P=0.474），即差異無統(tǒng)計學意義。

3.討論

近些年，許多研究表明Wnt經典通路在ESCC的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮及其重要的作用，其中CK2及SFRP2為Wnt經典通路中的關鍵差異蛋白[6]。本研究中我們通過免疫組化實驗發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)：（1）CK2的陽性表達率在ESCC組織中明顯高于癌旁組織；（2）在哈薩克族ESCC患者中，CK2的表達與浸潤深度密切相關，但與其他臨床病理參數(shù)無關；（3）SFRP2是一種ESCC相關差異蛋白，與其發(fā)生呈負相關，其為一種抑癌基因。

CK2、SFRP2在ESCC與癌旁組織中的陽性表達存在統(tǒng)計學差異，提示兩者可能為相關差異蛋白，推測它們可能可以作為ESCC的診斷、治療標記物。然而CK2及SFRP2在ESCC中的相關研究尚未有太大進展，故進一步深入研究CK2及SFRP2在ESCC發(fā)生與進展中的作用機制，發(fā)現(xiàn)ESCC相關生物學標記物對臨床診斷與治療具有重要意義。

[1]韓立波，孫冬梅，豐立忠，等.蛋白激酶CK2β在食管癌組織中的表達及臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復，2013，50(10)18-20.

[2]王立芝等SFRP-2對人肝細胞株HepG1生物學行為的影響.重慶醫(yī)科大學，2007，25（2）220-223.

[3]路喆鑫，連鋒.分泌型卷曲相關蛋白2在心肌再生治療中的作用，中國胸心血管外科臨床雜，2012，19（4）220-222.

[4]王玉，唐海珍，畢芳芳，楊清，張淑蘭.蛋白激酶CK2α在人子宮內膜腺癌中的表達及意義[J].生物醫(yī)學工程與臨床，2012，65(1)99-102.

[5]齊健，朱尤慶，羅峻，等.結直腸腫瘤中SFRP基因的甲基化及表達調控[J].中華腫瘤雜志，2007，29(11):842-845.

[6]趙成海，卜獻民，張寧，等.Wnt拮抗因子SFRP2在胃癌中的甲基化和異常表達[J].中國病理生理雜志，2009，25(8):1617-1620.