徐家付 許紅秦 趙 琴 鄭紹紅 白文順 戴劍濤 姜 夢(mèng) 楊亮宇**

（1.云南省曲靖市馬龍縣畜牧獸醫(yī)局，云南馬龍 655199；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650201）

雞球蟲(chóng)病是由艾美耳屬的多種球蟲(chóng)寄生于雞腸道引起的疾病，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。此病是一種分布廣泛，嚴(yán)重危害雞生長(zhǎng)發(fā)育的腸道原蟲(chóng)病[2]。目前防治禽球蟲(chóng)病仍以抗球蟲(chóng)藥為主[3]。青花雞原產(chǎn)于劍川自然條件復(fù)雜的少數(shù)民族集中邊遠(yuǎn)鄉(xiāng)村，由于其體格中等、肉質(zhì)風(fēng)味好、抗病力強(qiáng)、適應(yīng)性好等優(yōu)點(diǎn)備受當(dāng)?shù)厝嗣裣矏?ài)[4]。調(diào)查了解劍川地區(qū)雞球蟲(chóng)病發(fā)生因素、發(fā)展規(guī)律和感染狀況及目前防控現(xiàn)狀，對(duì)發(fā)展地方特色產(chǎn)業(yè)具有重要意義。

藥物防治本病是目前規(guī)模化雞場(chǎng)普遍采用的一種方法，在我國(guó)養(yǎng)雞生產(chǎn)過(guò)程中，大部分雛雞飼料中都會(huì)添加抗球蟲(chóng)病藥物，每年投入預(yù)防本病藥費(fèi)占雞病防治費(fèi)用的1/5～1/3[4]。隨著抗生素類(lèi)球蟲(chóng)藥物廣泛應(yīng)用，球蟲(chóng)耐藥性突出并且嚴(yán)重，多重耐藥性現(xiàn)象加上交叉耐藥性問(wèn)題使得藥物使用年限大大縮短。雖然人們對(duì)雞球蟲(chóng)病免疫預(yù)防進(jìn)行了一些研究，但目前及今后相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)，藥物防治仍是控制雞球蟲(chóng)病的主要手段[4]。了解地方品種青花雞球蟲(chóng)感染狀況及目前人們對(duì)此病防控探索，對(duì)科學(xué)防控球蟲(chóng)類(lèi)疾病和降低養(yǎng)殖成本具有重要意義。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選取劍川縣金華鎮(zhèn)、甸南鎮(zhèn)、沙溪鎮(zhèn)、馬登鎮(zhèn)、羊岑鄉(xiāng)34個(gè)自然村青花雞散養(yǎng)戶(hù)和5個(gè)青花雞養(yǎng)殖場(chǎng)中10～65日齡青花雞作為采樣對(duì)象。

1.1.2 試驗(yàn)試劑

重鉻酸鉀（K2Cr2O72.5%），瓊脂粉，蒸餾水、飽和鹽水、生理鹽水（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院公共實(shí)驗(yàn)室提供）。

1.1.3 主要儀器

無(wú)菌6寸自封塑料袋2000個(gè)，40目的銅網(wǎng)3個(gè)、燒杯10個(gè)、載玻片100片、260目的尼龍網(wǎng)3個(gè)、鐵絲圈5個(gè)（由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)公共實(shí)驗(yàn)室提供）。冰箱（海爾集團(tuán)）、低速離心機(jī)（上海珂淮儀器有限公司）、顯微鏡（北京世紀(jì)科信科學(xué)儀器有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 糞樣采集

2016年1月至2017年6月從劍川縣“四鎮(zhèn)一鄉(xiāng)”共34個(gè)自然村散養(yǎng)戶(hù)和5個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)作為調(diào)查采樣點(diǎn)。對(duì)每個(gè)自然村散養(yǎng)戶(hù)隨機(jī)采取糞樣20份，集中養(yǎng)殖場(chǎng)隨機(jī)采取新鮮糞樣724份，病死雞盲腸病樣14份，共計(jì)1418份。糞樣每份20～50g分別裝入無(wú)菌6寸自封袋，擠壓出袋內(nèi)空氣，并且編號(hào)、標(biāo)注日齡、地區(qū)，養(yǎng)殖方式及地址代碼等，并且放入4℃冰箱進(jìn)行保存待檢。分階段進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)并統(tǒng)計(jì)。

2.2 球蟲(chóng)卵囊收集和觀察

糞樣采用飽和鹽水漂浮法檢查蟲(chóng)卵，收集陽(yáng)性糞樣置并于4℃冰箱內(nèi)待進(jìn)一步分離和觀察卵囊。

2.3 卵囊分離培養(yǎng)及鑒定

2.3.1 卵囊分離培養(yǎng)

使用飽和鹽水和離心沉淀法進(jìn)行沉浮，分離糞內(nèi)卵囊。保存最底層沉渣（含卵囊）等待培養(yǎng)。

2.3.2 卵囊鑒定

根據(jù)卵囊形狀特征，參照有關(guān)文獻(xiàn)、圖譜進(jìn)行種類(lèi)鑒定。分析感染蟲(chóng)卵、陽(yáng)性率、地方主要蟲(chóng)卵。

3 結(jié)果與分析

3.1 自然村散養(yǎng)戶(hù)情況

表1結(jié)果表明：通過(guò)調(diào)查自然村散養(yǎng)戶(hù)，結(jié)果查出了柔嫩艾美爾球蟲(chóng)感染且平均陽(yáng)性率為14.00%，死亡率為1.06%。

3.2 中小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)情況

表1 自然村散養(yǎng)戶(hù)感染情況

表2 養(yǎng)殖場(chǎng)感染情況

表2結(jié)果表明：通過(guò)調(diào)查規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)，發(fā)現(xiàn)青花雞球蟲(chóng)感染源為柔嫩艾美爾球蟲(chóng)和毒害艾美爾球且平均陽(yáng)性率分別為22.34%、5.59%，死亡率為0.90%。

3.3 采用不同養(yǎng)殖方式感染情況

表3 不同養(yǎng)殖方式感染情況

表3結(jié)果表明：青花雞采用林間放養(yǎng)陽(yáng)性率12.78%；林間圈養(yǎng)陽(yáng)性率15.7%；地面籠養(yǎng)29.07%；立體網(wǎng)養(yǎng)陽(yáng)性率28.51%。

3.4 不同日齡感染情況

表4 不同日齡感染情況

表4結(jié)果表明：青花雞被球蟲(chóng)病感染日齡集中在15～45日齡，其中15～30日齡感染陽(yáng)性率最高為38.82%。46～65日齡的陽(yáng)性率為6.64%。

3.5 不同季節(jié)感染情況

表5 不同季節(jié)感染情況

表5結(jié)果表明：青花雞感染球蟲(chóng)集中在夏秋季且陽(yáng)性率分別為37.50%、37.01%。

4 討論

4.1 球蟲(chóng)感染情況

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，自然村散養(yǎng)戶(hù)球蟲(chóng)感染蟲(chóng)株為柔嫩艾美爾球蟲(chóng)，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)以柔嫩艾美爾球蟲(chóng)為主，同時(shí)還兼有毒害艾美爾球蟲(chóng)感染；林間放養(yǎng)感染最低，地面籠養(yǎng)和立體網(wǎng)養(yǎng)最高；球蟲(chóng)病感染日齡集中在15～45日齡，雞只在夏秋季易被感染。

球蟲(chóng)卵囊抵抗力強(qiáng)且在土壤中生活周期長(zhǎng)，可達(dá)15～18個(gè)月，當(dāng)氣溫適宜時(shí)一般只需要18～26小時(shí)，就可能成為感染性卵囊[5]。通過(guò)病死雞臨床解剖和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)球蟲(chóng)主要寄生于雞只盲腸和鄰近腸道組織，通過(guò)鑒定出在當(dāng)?shù)馗腥鞠x(chóng)源是柔嫩艾美爾球蟲(chóng)，在感染發(fā)病急性型病例中，解剖時(shí)表現(xiàn)典型臨床癥狀：兩側(cè)盲腸顯著腫大數(shù)倍，充滿(mǎn)凝固新鮮暗紅色血液，盲腸上皮變厚或脫落為主?？赡芤?yàn)榈胤狡贩N青花雞在15～30日齡還處于育雛階段，在脫溫舍內(nèi)生長(zhǎng)時(shí)溫度、光照、濕度以及飼養(yǎng)管理水平、飼料污染等條件影響，導(dǎo)致陽(yáng)性率普遍較高；46～65日齡是育成階段，此時(shí)在農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)和小型養(yǎng)殖企業(yè)中進(jìn)行育成，可能普遍采用林下圈養(yǎng)、林下放養(yǎng)和有規(guī)律藥物預(yù)防，導(dǎo)致陽(yáng)性率偏低。

雞球蟲(chóng)卵囊本身無(wú)感染性，但條件適宜（最適溫度在22℃～30℃；最適濕度在60%～75%；有充足氧氣等）具備孢子化條件即可完成孢子生殖，就能形成具有感染力的孢子化卵囊。這種卵囊被雞只食入，就可能造成球蟲(chóng)病發(fā)作。因?yàn)橄那锛竟?jié)，溫度、濕度具備卵囊孢子化增殖條件，所以夏秋季是雞只球蟲(chóng)病多發(fā)、易發(fā)季節(jié)。青花雞是地方品種土雞，生活于大山深處，覓食奔跑于鄉(xiāng)間林地，肌肉骨骼健壯，與本地其他品種土雜雞外來(lái)肉雞相比本身抗病力強(qiáng)，所以對(duì)球蟲(chóng)感染抵抗力較強(qiáng)，即使感染球蟲(chóng)而發(fā)病，死亡率也普遍偏低。

4.2 飼養(yǎng)管理情況

在當(dāng)?shù)剞r(nóng)村區(qū)域，飼養(yǎng)管理仍處于粗放狀態(tài)，人們對(duì)雞球蟲(chóng)病意識(shí)普遍淡薄，甚至忽視家禽寄生蟲(chóng)類(lèi)疾病。經(jīng)基層畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣人員長(zhǎng)期科普宣傳，狀況有所好轉(zhuǎn)。雖然青花雞抗病力強(qiáng)，抗感染強(qiáng)且平均陽(yáng)性率僅為14.00%，平均死亡率僅為1.06%，但外來(lái)帶蟲(chóng)雞只引進(jìn)混合飼養(yǎng)，還是會(huì)讓蟲(chóng)源持續(xù)存在于自然環(huán)境中而持續(xù)感染。青花雞球蟲(chóng)病在中小養(yǎng)殖場(chǎng)感染發(fā)病狀況和相關(guān)配套設(shè)施完善度、預(yù)防程序和飼養(yǎng)管理水平高低、外來(lái)帶蟲(chóng)雞只引進(jìn)混合飼養(yǎng)等有關(guān)，這些條件都可能為柔嫩艾美耳球蟲(chóng)持續(xù)感染發(fā)病創(chuàng)造條件。即使場(chǎng)內(nèi)長(zhǎng)期存在感染性蟲(chóng)源，只要在飼養(yǎng)管理上面面俱到，也可能控制雞群發(fā)病。

規(guī)?；B(yǎng)殖時(shí)對(duì)雞只采用網(wǎng)養(yǎng)或者籠養(yǎng)方式可以減少球蟲(chóng)病發(fā)生概率。在集約化養(yǎng)殖中雛雞飼料配方設(shè)計(jì)上要注重營(yíng)養(yǎng)全面，必須保證蛋白質(zhì)和維生素供給。平時(shí)養(yǎng)殖中注重及時(shí)除糞除污物，防止其對(duì)飲水、飼料、養(yǎng)殖場(chǎng)地環(huán)境污染。雞只時(shí)常接觸料槽、飲水設(shè)施，必須持續(xù)堅(jiān)持使用消毒液清洗，而后即刻擦拭干凈。每天能持續(xù)消毒，對(duì)廄舍地面采用 3%的火堿水噴灑。目前本地主要感染蟲(chóng)株還比較單一，所以飼養(yǎng)管理水平在規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)中防控此類(lèi)疾病顯得尤為重要。

5 球蟲(chóng)病藥物防控現(xiàn)狀

5.1 抗生素使用情況

規(guī)?；u場(chǎng)防治雞球蟲(chóng)病藥物自2 0世紀(jì)3 0年代，GrumblesLC[5]首先用磺胺類(lèi)藥物防治雞球蟲(chóng)病以來(lái)，采用化學(xué)藥物防治雞球蟲(chóng)病，逐漸成為控制該病的主要手段。目前，很多規(guī)?；u場(chǎng)在使用藥物來(lái)防治禽類(lèi)球蟲(chóng)病時(shí)，多數(shù)選擇化學(xué)合成類(lèi)、聚醚類(lèi)、離子載體類(lèi)藥物，少數(shù)選擇含有中草藥成分和中西復(fù)合劑類(lèi)藥物。隨著抗球蟲(chóng)病抗生素類(lèi)藥物廣泛應(yīng)用，球蟲(chóng)疾病中某些蟲(chóng)株對(duì)抗生素類(lèi)藥物敏感性呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)。

1974年已發(fā)現(xiàn)巨型艾美耳球蟲(chóng)對(duì)抗生素類(lèi)藥物產(chǎn)生了耐藥性；孔繁瑤等[7]分別對(duì)采自我國(guó)部分地區(qū)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)進(jìn)行調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)對(duì)莫能菌素、鹽霉素和拉沙菌素具有不同程度的抗藥性；黃兵等[8]對(duì)上海地區(qū)部分雞場(chǎng)雞球蟲(chóng)抗藥程度進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)分離球蟲(chóng)株對(duì)莫能菌素出現(xiàn)完全耐藥性比例高達(dá)67%～80%，對(duì)馬杜霉素出現(xiàn)中度耐藥和完全耐藥比例也高達(dá)50%。所以抗球蟲(chóng)類(lèi)抗生素藥物目前出現(xiàn)普遍耐藥現(xiàn)象。

劍川部分養(yǎng)殖場(chǎng)，青花雞和外來(lái)土雜雞混合飼養(yǎng)，目前感染蟲(chóng)株主要為柔嫩艾美爾球蟲(chóng)及少數(shù)毒害艾美爾球。不發(fā)病情況下多數(shù)采用抗生素間斷飼喂預(yù)防。調(diào)查發(fā)現(xiàn)：在中小規(guī)?；u場(chǎng)中存在使用抗球蟲(chóng)藥物時(shí)比較注重合理應(yīng)用且重視藥物療效的現(xiàn)象。一些養(yǎng)殖場(chǎng)采取抗生素聯(lián)合用藥、穿梭用藥和輪換用藥方式進(jìn)行預(yù)防且取得了一定效果，但是抗生素耐藥性的出現(xiàn)確實(shí)提高了養(yǎng)殖成本，也出現(xiàn)相同蟲(chóng)株在短時(shí)間內(nèi)重復(fù)感染狀況。這些現(xiàn)象的出現(xiàn)迫使人們?cè)趯?shí)踐中不斷探索。

5.2 新型藥物使用情況

目前，在養(yǎng)禽業(yè)中不斷探索抗生素替代藥，以減少耐藥性和降低養(yǎng)殖成本。楊桂連等人[7]使用乳酸菌等益生菌在雛雞抗柔嫩艾美耳球蟲(chóng)感染中的作用研究，于攻蟲(chóng)前后檢測(cè)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2、IgG和SIgA水平，結(jié)果表明了乳酸菌能顯著提高IFN-γ、IL-2、IgG、SIgA水平和外周血中T淋巴細(xì)胞數(shù)量，從而增強(qiáng)了機(jī)體細(xì)胞和體液免疫水平（P〈0.05）。此外，其研究還證實(shí)了乳酸菌能顯著性減輕雛雞對(duì)球蟲(chóng)感染，對(duì)球蟲(chóng)發(fā)病導(dǎo)致的雛雞增重也能顯著性降低，還能降低球蟲(chóng)卵囊排出量和對(duì)雛雞盲腸病理?yè)p傷率（P〈0.05），同時(shí)ACI值也達(dá)到了中等抗球蟲(chóng)水平，乳酸菌類(lèi)產(chǎn)品在養(yǎng)殖業(yè)中不斷實(shí)踐應(yīng)用且有望成為養(yǎng)雞業(yè)中球蟲(chóng)病防治新手段。

張濤[10]使用復(fù)合乳酸菌飼喂雛雞，研究乳酸菌抗球蟲(chóng)效果，結(jié)果表明飼喂復(fù)合乳酸菌組腸道上皮細(xì)胞內(nèi)球蟲(chóng)含量變得最少。其研究還表明給雛雞口服復(fù)合乳酸菌后，雞只在感染球蟲(chóng)后CD4+T和CD8+T細(xì)胞亞群與其他組相比顯著增高；在雛雞飲水或者飼料中添加復(fù)合乳酸菌制劑飼喂后能對(duì)雞只易感的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)有一定抑制作用，復(fù)合型乳酸菌制劑有望成為抗球蟲(chóng)藥物的替代產(chǎn)品。復(fù)合乳酸菌、復(fù)合微生態(tài)制劑在抗雛雞球蟲(chóng)病實(shí)踐應(yīng)用研究中逐步取得成效。

在本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)一些青花雞養(yǎng)殖場(chǎng)在預(yù)防球蟲(chóng)有新方法：一是利用堆糞發(fā)酵殺蟲(chóng)卵來(lái)控制感染源；二是利用離子酸化劑在育雛階段（15～35日齡）分批次有計(jì)劃適量投于飲水中飼喂控制球蟲(chóng)?。蝗抢脧?fù)合微生態(tài)制劑（乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌等）活菌劑量為2.75×107cfu/ml，在育雛階段分別于7日齡、15日齡、23日齡、35日齡添加于飲水中投喂，采用每次連續(xù)使用兩天的方法來(lái)控制球蟲(chóng)病。

總之，新型替代藥物的應(yīng)用和有效防控措施是未來(lái)預(yù)防球蟲(chóng)病的趨勢(shì)。

6 小結(jié)

通過(guò)本次調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)地方品種青花雞球蟲(chóng)病平均感染率約為21.5%，平均死亡率為1.50%，感染源為柔嫩艾美爾球蟲(chóng)和毒害艾美爾球蟲(chóng)。其中主要以柔嫩艾美爾球蟲(chóng)感染15～45日齡雞只，感染發(fā)病季節(jié)集中在夏秋季節(jié)。在用藥防控實(shí)踐中，養(yǎng)殖戶(hù)根據(jù)實(shí)際情況不斷探索新方法控制球蟲(chóng)病。這次調(diào)查結(jié)果為發(fā)展高原地方特色產(chǎn)業(yè)提供參考。

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