王瑞深 陳藝強(qiáng) 陳 杰 梁柱良 鐘冠環(huán)

（1.深圳市光明新區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東深圳 518107；

2.深圳市光明集團(tuán)有限公司光明鴿飲食發(fā)展分公司，廣東深圳 518107）

疫苗免疫仍是預(yù)防禽流感的有效手段之一，被一些國(guó)家和地區(qū)采用。為滿足H7亞型流感疫情防控急需，國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室研制了重組禽流感病毒（H5-H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株 H7-Re1株）。作為一種新結(jié)合型疫苗，此二價(jià)苗在雞中的免疫已在兩廣推開，但在種鴿中的應(yīng)用還較少，缺少相關(guān)的資料，并且有相當(dāng)一部分鴿子養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)禽流感的防治不太重視，只免疫一次或只進(jìn)行飲水免疫，甚至不免疫?；诖?，為了探討此種新型二價(jià)滅活疫苗在種鴿中的免疫效果，本實(shí)驗(yàn)選擇了一個(gè)大型種鴿場(chǎng)進(jìn)行接種免疫試驗(yàn)，在接種免疫后隨機(jī)采集鴿血進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，通過免疫不同的劑量和免疫后各時(shí)間段的抗體水平對(duì)比，得出更為有效的免疫方案，以期為該疫苗在種鴿中的推廣使用提供參考。具體試驗(yàn)情況如下：

1 臨床試驗(yàn)基本信息

1.1 重組禽流感病毒（H5-H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株 H7-Re1株）疫苗說明：

疫苗名稱 作用與用途 用法與用量 貯藏與有效期重組禽流感病毒（H5-H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）2-8℃保存，有效期12個(gè)月批準(zhǔn)文號(hào) 生產(chǎn)批號(hào) 生產(chǎn)廠家 生產(chǎn)日期 有效期獸藥臨字080012297 2017028 哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司 20170630 20180629用于預(yù)防由H5亞型和H7亞型禽流感病毒引起的禽流感胸部肌肉或頸部皮下注射。2-5周齡雞，每只0.3ml；5周齡以上雞，每只0.5ml

1.2 臨床免疫情況

1.2.1 免疫對(duì)象：種鴿。

1.2.2 免疫數(shù)量：2100羽。

1.2.3 免疫方式：胸肌注射。

1.2.4 免疫劑量（分三組）：（1）未進(jìn)行免疫；（2）免疫0.3ml/羽；（3）免疫0.5ml/羽。

1.2.5 免疫后的應(yīng)激反應(yīng)：以未免組為參照。

（1）免疫0.5ml/羽的種鴿組第一個(gè)月死亡數(shù)量和死胎數(shù)量大幅度提高，產(chǎn)蛋數(shù)量同時(shí)大幅度下降，之后第二、第三個(gè)月死亡數(shù)量與參照組基本一致，死胎數(shù)量略高于參照組，產(chǎn)蛋數(shù)量開始回升，但對(duì)比參照組還是有著較大的下降。

（2）免疫0.3ml/羽的種鴿組在死亡數(shù)量和死胎數(shù)量上都高于未免參照組，產(chǎn)蛋數(shù)量同時(shí)下降，但對(duì)比免疫0.5ml/羽的種鴿組，免疫0.3ml/羽的種鴿組應(yīng)激反應(yīng)要輕微了許多。

1.3 血清采集

在免疫后21d、28d、60d、90d都分別隨機(jī)采集三組種鴿的血清樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)情況

2.1 檢測(cè)項(xiàng)目

H5亞型禽流感抗體、H7N9亞型禽流感抗體。

2.2 檢測(cè)方法

高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936-2003）：血凝與血凝抑制試驗(yàn)。

2.3 檢測(cè)試劑（抗原、陽(yáng)性血清）

2.3.1 試劑廠家：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司。

2.3.2 試劑批號(hào)：H5N1 Re-8株抗原（2017001），H5N1 Re-8株陽(yáng)性血清（2016002）；H7N9 H7-Re1株抗原（2017003），H7N9 H7-Re1株陽(yáng)性血清（2017002）。

2.4 儀器

90度V型血凝板，微量移液器，微量振蕩器，離心機(jī)。

2.5 主要試劑

0.1mol/L PBS（PH7.2），阿氏液，1%的雞紅細(xì)胞懸液。

2.6 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.6.1 未免組的檢測(cè)結(jié)果：在免疫后21d、28d、60d、90d采集的血清樣本經(jīng)H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株的抗體檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)有抗體。

2.6.2 免疫0.5ml/羽的檢測(cè)結(jié)果，見表1。

2.6.3 免疫0.3ml/羽的檢測(cè)結(jié)果，見表2。

3 結(jié)果分析與討論

（1）免疫0.3ml/羽的種鴿與免疫0.5ml/羽的種鴿經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，抗體水平有一定差異，免疫0.5ml/羽的抗體水平在免疫成功的種鴿中表現(xiàn)要稍微好些，但差異不大，而免疫0.5ml/羽的種鴿組在應(yīng)激反應(yīng)上表現(xiàn)得比較重，不利于企業(yè)的持續(xù)化生產(chǎn)，對(duì)企業(yè)造成了一定的影響，建議重組禽流感病毒（H5-H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）在種鴿中的免疫劑量以0.3ml/羽比0.5ml/羽為宜。

（2）通過免疫后不同時(shí)間段的對(duì)比，可以發(fā)現(xiàn)抗體水平在2個(gè)月后開始呈現(xiàn)顯著的下降，在三個(gè)月后已經(jīng)基本呈現(xiàn)在預(yù)警區(qū)，因此，只進(jìn)行一次免疫的種鴿，在抗體水平上難以長(zhǎng)時(shí)間保持在較高的水準(zhǔn)，建議應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)免疫，增強(qiáng)種鴿的抵抗力，且二次免疫時(shí)間應(yīng)當(dāng)間隔3個(gè)月以上。

（3）免疫二價(jià)苗后，種鴿H7N9的抗體水平在免疫后21d和免疫后28d都呈現(xiàn)較高的水準(zhǔn)；通過各時(shí)間段的對(duì)比，H7N9的抗體水平都基本比H5N1的稍高，但由于血清采集是從大群體中隨機(jī)抽取的，缺乏針對(duì)性，并且數(shù)量也不多，因此數(shù)據(jù)比對(duì)存在一定的偏差，并不能代表H5N1 Re-8株的免疫效果比H7N9 H7-Re1株的免疫效果差，也有可能與疫苗在制備過程中的抗原量配比有關(guān)。

表1

表2

（4）由于整個(gè)試驗(yàn)涉及面廣，施行過程中避免不了各方面因素的影響，試驗(yàn)結(jié)果會(huì)存在一定的偏差，因此，本次試驗(yàn)結(jié)果只作為參考用。