吳國泰，杜麗東，王瑞瓊，王水明，劉峰林，任遠

（甘肅中醫(yī)藥大學，甘肅省中藥藥理與毒理學重點實驗室，甘肅蘭州 730000）

便秘是臨床最常見的復雜的消化道疾病，也是其他疾病的并發(fā)癥。隨著人們飲食結構和生活習慣的變化，便秘的發(fā)病率異常升高。便秘后機體會出現(xiàn)腹脹、精神倦怠、體重減輕、不思飲食、面色晦暗、色斑出怒、口臭，食欲減退等諸多病征，給患者帶來了極大現(xiàn)、反應遲緩、大便色黑，干燥。同患者也會伴有易的不適和痛苦，嚴重影響生活質量[1]。西醫(yī)現(xiàn)有治療便秘的藥物是瀉藥，近年來，部分便秘患者出現(xiàn)了藥物依賴性便秘的現(xiàn)象，便秘的治療難度明顯增加。中藥是中國的傳統(tǒng)瑰寶，越來越多地用于開發(fā)具有保健功能的食品，對臨床常見的慢性疾病輔助治療和康復具有非常重要的意義[2]，本研究按照傳統(tǒng)中醫(yī)理論組方制備當歸潤腸茶，當歸潤腸茶由當歸、枳殼、干姜、大棗和蜂蜜組成，具有養(yǎng)血溫陽、潤腸導滯的功能；主治血虛、寒凝、瘀滯之冷秘。本研究采用冰水混合物建立脾胃虛寒型小鼠便秘模型，用甲狀腺素和氫化可的松聯(lián)合建立陰虛血瘀型小鼠便秘模型，用復方地芬諾酯建立慢傳輸型小鼠便秘模型，從多種病理模型入手，通過研究當歸潤腸茶對模型小鼠排便時間、排便量、糞便含水量和腸推進率的影響，對當歸潤腸茶的潤腸通便功能進行評價，用最大給藥量法評價當歸潤腸茶的急性毒性，為后續(xù)開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

當歸潤腸茶，自制（處方：當歸3 g、枳殼0.25 g、干姜1 g、大棗4 g、蜂蜜16 g；制法：取當歸、枳殼、干姜、大棗（破）處方100倍用量，加10倍量水煎煮1 h，過濾，藥渣再加8倍量水煎煮40 min，合并藥液濃縮至500 mL，取250 mL藥液加蜂蜜800 g，得流浸膏，蒸餾水定容至1000 mL，備用）。

潤腸丸，自制（元·《丹溪心法》卷五處方：麻子仁30 g、當歸30 g、桃仁30 g、生地黃30 g、枳殼30 g；制法：取處方10倍用量藥材，加10倍量水煎煮1 h，過濾，藥渣再加8倍量水煎煮40 min，合并藥液濃縮至1500 mL，備用）。

氫化可的松注射液，國藥集團容生制藥有限公司生產，批號 1507281；甲狀腺素片，上海長城藥業(yè)有限公司生產，批號20150103；復方地芬諾酯片，新鄉(xiāng)市常樂制藥有限責任公司生產，批號 1407025；活性炭粉末，天津市大茂化學試劑廠生產，批號20140106。

實驗動物為昆明種小鼠，SPF級，試驗開始體重為 18～22 g，雌雄兼用，由甘肅中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，合格證號 SCXK（甘）2015-0002-62003800000296。

1.2 主要設備與儀器

HX2001電子天平，由慈溪市天東衡器廠生產；SQP型分析天平，由賽多利斯科學儀（北京）有限公司生產；DHG-9123A電熱恒溫鼓風干燥箱，由上海齊欣科學儀器有限公司生產。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗動物的飼養(yǎng)與檢疫

飼養(yǎng)管理：實驗動物飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學實驗動物中心 SPF級動物房，動物實驗設施使用證號SYXK(甘)2015-0005。SPF級飼料(由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供)喂養(yǎng)，5只/大箱，群養(yǎng)，自由進食，自由飲水，室溫 25±0.5 ℃，相對濕度 55±5%，12 h燈光，12 h黑暗，適應3 d后開始實驗。

檢疫：對購入動物檢疫3 d。期間每日檢查動物一次，未發(fā)現(xiàn)不健康的動物，全部動物納入實驗。

1.3.2 動物的造模、給藥與檢測指標

脾胃虛寒型便秘小鼠模型[3]：取60只小鼠，隨機抽取10只為正常組，其余50只用活性炭冰水混合物（0～2 ℃）灌胃3 d后隨機分為模型組、陽性組，當歸潤腸茶高、中、低劑量組，共6組。陽性組、當歸潤腸茶高、中、低劑量組分別灌胃潤腸丸(25.0 g生藥/kg體重，相當于臨床成人日用量的10倍)、當歸潤腸茶（40.4、20.2、10.1生藥/kg體重，分別相當于推薦人用量100倍、50倍和25倍），正常組和模型組灌胃等量蒸餾水，給藥容量為20 mL/kg體重，每天1次，連續(xù)3 d。第2 d給藥后記錄首次排便時間和6 h內排便總重量，第 3 d在藥液中加入活性炭（終濃度為10%），灌胃20 min后處死，解剖，測量小腸總長和炭末推進距離，計算腸推進率。

腸推進率=炭末在小腸內的推進距離(cm)/小腸總長度(cm)×100%

陰虛血瘀型便秘小鼠模型[4,5]：取60只小鼠，隨機分為6組，設正常組、模型組、陽性組、當歸潤腸茶高、中、低劑量組，每組10只，除正常組外，其余各組小鼠每天灌胃甲狀腺素150 mg/kg和皮下注射氫化可的松2.0 mg/kg，連續(xù)7 d。造模第3 d，陽性組、當歸潤腸茶高、中、低劑量組分別灌胃潤腸丸(劑量同上)、當歸潤腸茶（劑量同上），正常組和模型組灌胃等量蒸餾水，給藥容量為20 mL/kg體重，每天1次，連續(xù)7 d。給藥第7 d，灌胃60 min后，各組小鼠灌胃10%活性炭1.0 mL/只，單籠飼養(yǎng)，記錄各小鼠首次排黑便時間，并記錄6 h內排便總粒數(shù)，稱糞便濕重，80 ℃烘干4 h，稱糞便干重，計算糞便含水量，糞便含水量=（糞便濕重-糞便干重）/糞便濕重×100%。給藥第8 d，禁食不禁水12 h，各組小鼠灌胃60 min后，各組小鼠灌胃10%活性炭1.0 mL/只，30 min后，處死小鼠，摘自幽門部到回盲部的全部腸管，在光滑桌面鋪直，觀察腸道形態(tài)，測量腸管全長、炭末在腸管內推進距離，計算腸推進率。

腸推進率(%)=炭末推進距離(cm)/腸道總長(cm)×100%

慢傳輸型便秘小鼠模型[6,7]：取60只小鼠，隨機分為6組，設正常組、模型組、陽性組、當歸潤腸茶高、中、低劑量組，每組10只。陽性組、當歸潤腸茶高、中、低劑量組分別灌胃潤腸丸(劑量同上)、當歸潤腸茶（劑量同上），正常組和模型組灌胃等量蒸餾水，給藥容量為20 mL/kg體重，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥后各小鼠隔夜禁水不禁食20 h，除正常組外，其余各組小鼠分別灌胃復方地芬諾酯10 mg/kg，正常組灌胃等量蒸餾水，30 min后，各組小鼠給藥1次并灌胃10%活性炭1.0 mL/只。立即單籠飼養(yǎng)，記錄各小鼠首次排黑便時間，6 h內排便總粒數(shù)，稱糞便濕重，80 ℃烘干4 h，稱糞便干重，計算糞便含水量。處死小鼠，摘自幽門部到回盲部的全部腸管，在光滑桌面鋪直，觀察腸道形態(tài)，測量腸管全長、炭末在腸管內推進距離，計算腸推進率。

腸推進率（%）=炭末推進距離（cm）/腸道總長（cm）×100%

1.3.3 當歸潤腸茶的急性毒性試驗[8]

預實驗無法測定當歸潤腸茶的小鼠經口LD50，另取小鼠40只，雌雄各半，隨機分為對照組和受試組，每組20只，禁食不禁水12 h，受試組小鼠按40 mL/kg體重的容量灌胃（10 g當歸潤腸茶膏溶于20 mL蒸餾水），共2次，間隔6 h，對照組小鼠灌胃等容量蒸餾水。觀察各小鼠的飲食、活動、精神狀態(tài)、皮毛膚色、大小便、體重變化及死亡情況，連續(xù)觀察14 d，頸椎脫臼處死小鼠，大體解剖，觀察肝、腎、肺、脾、心等臟器形態(tài)和色澤，并計算小鼠1日最大給藥量相當于臨床成人日用量的倍數(shù)。

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

2 結果與討論

2.1 當歸潤腸茶對脾胃虛寒型便秘小鼠的影響

如表1所示，模型小鼠出現(xiàn)豎毛，少動，蜷曲，行動遲緩，被毛干枯、色暗，尿液呈現(xiàn)黃色，大便干硬、排便次數(shù)減少，解剖發(fā)現(xiàn)結腸內糞便多呈球狀或串珠狀，質輕干硬。與正常組比較，模型組小鼠排便時間顯著延長、排便量和腸推進率顯著減小(p<0.01，p<0.05)；與模型組比較，潤腸丸組和當歸潤腸茶高、中劑量組排便時間顯著縮短、排便量和腸推進率顯著增加（p<0.01，p<0.05），當歸潤腸茶低劑量組組間差異無統(tǒng)計學意義；結果提示脾胃虛寒型便秘在體質特征方面表現(xiàn)為畏寒肢冷，喜靜屈曲，長期導致胃腸動力減弱，引發(fā)便秘，當歸潤腸茶組方中含有干姜、當歸等溫熱性中藥，能全面調理機體體征狀態(tài)，從而改善胃腸功能，促進排便。

表1 當歸潤腸茶對脾胃虛寒型便秘小鼠排便情況和腸推進率的影響Table 1 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in SSD mice

2.2 當歸潤腸茶對陰虛血瘀型便秘小鼠影響

如表2所示，實驗期間小鼠均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，與正常組小鼠比較，造模組小鼠精神亢奮，喜動，活動時間長；與正常組比較，模型組小鼠排便時間顯著延長、排便量顯著減少、糞便含水量顯著減少、腸推進率顯著減?。╬<0.01，p<0.05）；與模型組比較，陽性組、當歸潤腸茶高、中、低劑量組小鼠排便時間顯著縮短（p<0.01），陽性組和當歸潤腸茶高劑量組排便量、糞便含水量和腸推進率均顯著增加（p<0.01，p<0.05），當歸潤腸茶中、低劑量組組間差異無統(tǒng)計學意義；結果提示陰虛血瘀型便秘表現(xiàn)為津枯腸燥，五心煩熱，當歸潤腸茶能滋陰養(yǎng)血、養(yǎng)陰生津，從而潤腸通便。

2.3 當歸潤腸茶對慢傳輸型便秘小鼠的影響

如表3所示，正常組小鼠反應靈活，糞便稀軟，不成形；模型小鼠出現(xiàn)煩躁不安，排便量減少，大便質硬；當歸潤腸茶各劑量組和陽性組有所改善；與正常組比較，模型組小鼠首次排黑便時間顯著延長、排便量顯著減少、便含水量和腸推進率顯著降低(p<0.01，p<0.05)；與模型組比較，陽性組、當歸潤腸茶高、中、低劑量組的首次排黑便時間均顯著縮短、排便量顯著增多(p<0.01，p<0.05)，當歸潤腸茶高、低劑量組小鼠糞便含水量均顯著增加(p<0.01)，當歸潤腸茶高、中劑量組的小腸推進率均顯著升高(p<0.05)；結果提示，慢傳輸型便秘以胃腸動力障礙為基本病機，腸動力衰弱導致腸內容物滯留，水分重新收引發(fā)腸燥，大便干結，當歸潤腸茶方中含有蜂蜜、當歸等調節(jié)胃腸動力兼潤下導滯，從而促進排便。

表2 當歸潤腸茶對陰虛血瘀型便秘小鼠排便情況和腸推進率的影響Table 2 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in YDBS mice

表3 當歸潤腸茶對慢傳輸型便秘小鼠排便情況和腸推進率的影響Table 3 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in GSTC mice

2.4 當歸潤腸茶的急性毒性

結果顯示，按最高濃度最大給藥容量灌胃后，各小鼠的飲食、自主活動均未出現(xiàn)異常，皮毛膚色未見異常，體重增加正常，大小便未見異常；持續(xù)觀察14 d，期間未見動物死亡；頸椎脫臼處死小鼠，大體解剖，肝、腎、肺、脾和心等臟器形態(tài)、色澤未見異常。經計算，當歸潤腸茶小鼠1日最大給藥量為40.0 g/kg體重，折合為臨床70 kg成人日用量（7 g）的400倍，對小鼠未見明顯急性毒性反應，口服安全性較高。

3 結論

研究結果表明潤腸茶具有一定的潤腸通便作用，可有效緩解脾胃虛寒型便秘、陰虛血瘀型便秘和慢傳輸型便秘體征，縮短小鼠排便時間，增加排便量，加快腸道推進速度，有潤腸通便功能，未見明顯急性毒性反應，為當歸潤腸茶進一步研究和開發(fā)奠定了基礎。

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