張凌云，葉迪，樓招歡

（1.華南農(nóng)業(yè)大學園藝學院，廣東廣州 510642）（2.浙江中醫(yī)藥大學藥物研究所，浙江杭州 310053）

研究表明，有5%～15%的人群一生中會罹患腎結(jié)石，過去 25年里世界范圍內(nèi)腎結(jié)石的發(fā)病率不斷增加。飲食習慣的改變尤其是高脂和高動物蛋白飲食已損傷的機制與活性氧簇的大量生成有關，因此抗氧化治療可以作為結(jié)石防治的一個手段?？寡趸煼ㄊ悄拷?jīng)被證明增加了腎結(jié)石的發(fā)病率。模型動物與外體細胞化學誘導模型研究結(jié)果表明，由于腎小管上皮細胞前結(jié)石防治研究的新思路之一，但仍然需要更多的機理性的實驗研究進行證實和完善。

龍眼屬于無患子科龍眼屬，是熱帶喬木類果樹，原產(chǎn)于我國南部和越南北部的南亞熱帶區(qū)域。龍眼的醫(yī)藥價值早在《本草經(jīng)》中就有記載：“龍眼甘平、無毒、安志厭食，主治五臟之邪氣”。李時珍在《本草綱目》中也述及：“龍眼補虛、開胃、健脾、益智?！饼堁壑参锏母蚋ぁ淦?、果皮、葉或嫩芽、花、種子亦可供藥用。近年來，國內(nèi)外學者對龍眼的化學成分及其藥理活性進行了相關研究[1,2]。研究表明，龍眼葉中可能含有黃酮類、酚類、香豆素類、揮發(fā)油甾醇、糖類、苷類、鞣質(zhì)和有機酸等化學成分，并且黃酮類、多酚物質(zhì)具有非常強的抗氧化作用，在治療腫瘤、癌癥和降血糖等方面有著很好的療效[3～6]。我國南方民間關于龍眼葉治療腎結(jié)石疾病的驗方，但是具體原理尚不清楚。

本研究以龍眼葉水提取物為材料，采用灌胃乙二醇+氯化銨溶液建立腎結(jié)石大鼠模型，通過測定 24 h飲水量和尿量、尿常規(guī)指標、以及血清 Cr、BUN、UA、Ca2+、Mg2+、草酸水平，腎組織中Ca2+、Mg2+、草酸水平，以及觀察腎臟病理學改變和結(jié)晶情況，來評估龍眼葉水提取物抗腎結(jié)石作用效果，為龍眼葉深加工提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 實驗動物

SD大鼠，清潔級，72只，體重160～180 g。購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2012-0002，動物質(zhì)量合格證號：0225064。隨機設計分為6組，即：空白對照組、模型對照組、陽性對照組及三個試驗組（低劑量組、中劑量組、高劑量組，即：龍眼葉水提取物2.0、4.0、8.0 g/kg）。

1.1.2 實驗材料

受試原材料為脆肉石硤龍眼葉（由中山市東鳳鎮(zhèn)西罟脆肉石硤龍眼專業(yè)合作社提供）。取龍眼葉適量，于100 ℃提取3次，加水量分別為：30 BV、20 BV、20 BV，提取時間分別為90 min、60 min、45 min，濾取三次藥液，減壓回收并適當濃縮，得龍眼葉水提取物，藥液濃度1.0 g（生藥）/mL，臨用前用純水稀釋至所需濃度。陽性對照藥：（排石顆粒，批號：150909）；規(guī)格：20 g×10袋，用蒸餾水配制成濃度為0.6 g/mL溶液備用。

1.1.3 主要試劑

尿酸（UA）試劑盒、尿素氮（BUN）試劑盒、肌酐（Cr）試劑盒購自寧波美康生物科技股份有限公司；Ca試劑盒、Mg試劑盒購自南京建成生物科技有限公司；草酸試劑盒購自美國Bio Vision公司；URIT 11A尿試紙條購自桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司；伊紅和蘇木素購自南京建成科技有限公司；其余試劑為國產(chǎn)分析純。

1.1.4 實驗儀器

TBA-40FR全自動生化儀，日本東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會社；Powerwave340酶標儀，美國Bio-TEK公司；Heraeus Biofuge Stra冷凍離心機，德國 Heraeus；SAKURA Tissue-Tek VIP 5Jr自動脫水機（日本櫻花檢驗儀器株式會社）；MEIKO EC360包埋機（德國MEIKO公司）；LEICARM2245切片機（德國LEICA公司）；生物顯微鏡 B5-223IEP（Motic公司）；Adavance3.2圖像分析系統(tǒng)（Motic公司）。

1.2 方法

1.2.1 動物模型構(gòu)建及龍眼葉水提物干預實驗

選取健康雄性SD大鼠72只，隨機分為6組，即空白對照組、模型對照組、陽性對照組（排石顆粒）、低（2 g/kg）、中（4 g/kg）、高（8 g/kg）三個劑量組，每組12只；所有大鼠均給予基礎飼料，自由采食飲水。除正常對照組（以等體積的蒸餾水灌胃）外，其余各組大鼠均灌胃給予成石液（2.5%乙二醇+2%氯化銨），每日1次，灌胃容積1 mL/100 g，連續(xù)5周；第6周開始，除正常對照組（以等體積的蒸餾水灌胃）外，其余各組大鼠均給予 1%乙二醇自由飲用，2.5%乙二醇+2%氯化銨灌胃，每日1次，灌胃容積1 mL/100 g；第7周開始除空白對照組、模型對照組、陽性對照組外，其余3組連續(xù)12周按高、中、低劑量組（依重量計分別為2.0、4.0、8.0 g/kg）灌胃龍眼葉水提物，給藥體積為10 mL/kg（即1 mL/100 g體重），按體重的增減調(diào)整給藥量。

1.2.2 大鼠飲水量、尿量及尿液生化指標檢測

連續(xù)給藥9周后，測定大鼠飲水量及尿量方法如下；將大鼠分別放于代謝籠內(nèi)測定大鼠24 h飲水量并于收集24 h大鼠尿液。尿液生化指標檢測：采用試劑盒測定尿液中Ca2+、Mg2+水平和尿液分析儀檢測尿常規(guī)指標。

1.2.3 大鼠血清生化指標檢測

末次給藥后，各組大鼠禁食12 h，戊巴比妥鈉麻醉，下腔動脈取血，3500 r/min離心15 min，取上層血清按照試劑盒操作方法測定各組大鼠血清 Cr、BUN、UA水平，并檢測血清Ca2+、Mg2+水平。

1.2.4 大鼠腎臟結(jié)石觀察與生化指標檢測

切取各組大鼠雙腎，縱向剖開，取左腎用10%中性福爾馬林液固定，作常規(guī)石蠟切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，顯微鏡下觀察各組大鼠腎組織病理改變及腎組織草酸鈣結(jié)晶分布，并對每個病理切片樣本隨機選擇5個視野，放大100倍數(shù)下獲取圖片后，對各組大鼠腎組織病理切片進行分析；取右腎按照試劑盒操作測定腎組織Ca2+、Mg2+水平。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 16.0軟件包進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。計量資料數(shù)據(jù)以±SD表示，采用單因素方差分析進行多重比較，組間比較方差齊性采用LSD分析，方差不齊采用Bunnett’s T分析；p<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 龍眼葉水提物對大鼠24 h飲水量及尿量的影響

與正常對照組比較，模型對照組24 h飲水量及24 h尿量顯著增加（p<0.01），達到極顯著差異。說明造模比較成功，即腎結(jié)石模型大鼠在病態(tài)條件下飲水量和尿量都有大幅度增加。與模型對照組比較，陽性對照組的經(jīng)過排石顆粒藥物的治療飲水量和尿量有不同程度的下降，飲水量降低量達到顯著水平，說明藥物治療對腎結(jié)石有一定效果。而采用龍眼葉水提取物治療的大鼠24 h飲水量有降低趨勢；并且8 g/kg劑量龍眼葉水提取物能明顯降低大鼠24 h飲水量（p<0.05）；各劑量組大鼠24 h尿量均有降低趨勢（見表1），但模型對照組相比，沒有達到顯著差異，治療效果與排石顆粒類似。

表1 對大鼠24 h飲水量及24 h尿量的影響（±SD）Table 1 Effects of aqueous extract from longan leaves on urine volume and water intake in 24 h

表1 對大鼠24 h飲水量及24 h尿量的影響（±SD）Table 1 Effects of aqueous extract from longan leaves on urine volume and water intake in 24 h

注：與正常對照組比較，△p<0.05，△△p<0.01；與模型對照組比較，*p<0.05，** p<0.01。

組別 劑量/(g/kg) 飲水量/mL 尿量/mL正常組 - 47.50±4.33 7.40±3.03模型組 - 103.33±15.28ΔΔ 21.33±9.77ΔΔ陽性組 6 64.17±12.33* 16.50±5.63龍眼葉水提取物2 78.33±1.44* 18.70±7.99 4 86.67±16.65 17.00±7.31 8 77.78±8.43* 16.15±8.17

2.2 龍眼葉水提物對模型大鼠尿液生化的影響

如表2所示，與正常對照組相比，模型對照組尿液鈣離子、鎂離子濃度顯著比正常大鼠要低（分別為4.15±1.90 mmol/L和15.89±11.35 mmol/L），而草酸濃度明顯升高（p<0.05），與正常大鼠相比達到顯著差異（237.1±80.80 mmol/L 和443.1±196.2 mmol/L），說明造模非常成功。與模型對照組比較，低劑量龍眼葉水提取物能明顯升高大鼠 24 h尿液鎂離子濃度（p<0.05）；但對尿液中鈣離子濃度的影響效果不是很一致，如低劑量水提取物可以升高鈣離子濃度，可以達到5.17±2.77 mmol/L，效果超過陽性藥物；但是隨著劑量的增加，反而效果不如低劑量的效果好。與模型組相比較，各劑量龍眼葉水提取物均能降低模型大鼠24 h尿液草酸水平，其中8 g/kg劑量組具有顯著性差異（p<0.05），前者為443.1±196.2 mmol/L，后者為251.1±124.8 mmol/L，高劑量組已經(jīng)接近正常大鼠（237.1±80.8 mmol/L），說明高劑量組降低尿中草酸水平具有較好的效果。

表2 龍眼葉水提物對大鼠24h尿液Ca2+、Mg2+的影響（±SD）Table 2 Effects of aqueous extracts from longan leaves on the concentration of Ca2+ and Mg2+ in urine

表2 龍眼葉水提物對大鼠24h尿液Ca2+、Mg2+的影響（±SD）Table 2 Effects of aqueous extracts from longan leaves on the concentration of Ca2+ and Mg2+ in urine

注：與正常對照組比較，△p<0.05，△△p<0.01；與模型對照組比較，* p<0.05，** p<0.01；與低劑量組比，# p <0.05。

組別 劑量/(g/kg)Ca2+/(mmol/L)Mg2+/(mmol/L)草酸/(mmol/L)正常組 - 6.59±2.46 28.41±11.87 237.1±80.8模型組 - 4.15±1.90Δ 15.89±11.35Δ 443.1±196.2Δ陽性組 6 4.49±2.56 22.83±12.26 389.7±262.5龍眼葉水提取物2 5.17±2.77 34.49±16.94* 319.7±75.4 4 2.94±1.14# 23.44±9.35 388.0±165.3 8 3.94±1.69 16.47±10.55# 251.1±124.8*

2.3 龍眼葉水提物對血清生化的影響

從表3可以看出，與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清Ca2+、Mg2+、UA、BUN、Cr水平均顯著升高，對正常大鼠相比均達到極顯著水平（p<0.01）。采用陽性藥物排石顆粒治療后，血清中Ca2+、Mg2+水平有一定程度的降低，變化達到顯著差異。但是各劑量龍眼葉水提取物對血清 Ca2+、Mg2+水平無明顯影響，但能不同程度降低模型大鼠血清尿酸（UA）、尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）水平，降低效果不僅達到顯著水平（p<0.05），而且要比陽性對照藥物排石顆粒效果好。

上述結(jié)果表明，龍眼葉水提取物會不同程度的對腎功能具有保護作用，且達到一定濃度后（2 g/kg）降低血清中尿酸（UA）、尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）差異不大。

表3 龍眼葉水提物對大鼠血清生化指標的影響（±SD）Table 3 Effects of aqueous extracts from longan leaves on the biochemical index in serum

表3 龍眼葉水提物對大鼠血清生化指標的影響（±SD）Table 3 Effects of aqueous extracts from longan leaves on the biochemical index in serum

注：與正常對照組比較，△p<0.05，△△p<0.01；與模型對照組比較，* p<0.05，**p<0.01；與低劑量（2 g/kg）組比，# p<0.05。

組別 劑量/(g/kg) Ca2+/(mmol/L) Mg2+/(mmol/L) UA/(mmol/L) BUN/(mmol/L) Cr/(μmol/L)正常對照組 - 1.51±0.18 0.62±0.12 55.17±11.50 6.75±0.91 52.08±4.03模型對照組 - 1.76±0.12ΔΔ 1.04±0.23ΔΔ 85.88±27.04ΔΔ 20.64±8.75ΔΔ 104.86±31.93ΔΔ陽性對照組 6 1.57±0.21* 0.81±0.12* 70.50±11.31 15.73±8.13 83.56±27.14 2 1.74±0.14 1.08±0.30 61.40±17.26* 12.89±5.84* 77.00±24.54*龍眼葉水提取物4 1.78±0.24 1.01±0.13# 62.89±12.83* 12.16±4.53* 72.60±18.90*8 1.72±0.16 1.06±0.32 62.57±14.23* 12.92±7.21* 73.73±18.66*

2.4 龍眼葉水提物對尿液pH的影響

前人研究表明，代謝綜合征及其組成部分可以改變尿的生化環(huán)境以促進結(jié)石。尿pH值降低可能是因為腎近端小管泌氨減少從而導致可滴定算排出增多造成的。隨著代謝綜合征危險因素的增加尿pH值和尿氨可以顯著的減少[6]。Losito等[7]的研究也發(fā)現(xiàn)患有高血壓的腎結(jié)石人群比沒有高血壓的腎結(jié)石患者相比，尿枸櫞酸分泌減少，尿pH值下降同時尿中可滴定酸的排出增多。因此，尿液pH常作為腎結(jié)石代謝異常評估的指標之一。

本研究結(jié)果表明，正常大鼠尿液pH<6的比率為0%，即尿液pH都不低于6；而模型組大鼠尿液pH<6的比率為44.4%，由此可見，經(jīng)過藥物誘導處理的大鼠代謝出現(xiàn)一定程度的紊亂。與模型組相比，采用陽性藥物排石顆粒治療的大鼠尿液pH有一定程度的升高。

僅有10%的大鼠低于6，而中等劑量和高劑量組（4 g/kg和8 g/kg）尿液pH<6的大鼠均無發(fā)現(xiàn)，pH≥7的比率分別為40%和10%，上述兩組對腎結(jié)石的治療效果要超過排石顆粒。研究結(jié)果還說明，模型對照組大鼠尿液酸度升高，可能與尿草酸水平升高有關，而給予4、8 g/kg劑量龍眼葉水提取物后大鼠尿液酸度降低（見表4）。

表4 龍眼葉水提物對大鼠尿液pH的影響Table 4 Effects of aqueous extracts from longan leaves on pH of urine

2.5 對腎臟器系數(shù)及鈣、鎂離子、草酸水平的影響

臟器系數(shù)又稱臟體比，是試驗動物某臟器的重量與其體重的比值。正常狀態(tài)下，各臟器與體重的比值比較恒定。動物染毒后，受損臟器重量可能發(fā)生改變，故臟器系數(shù)也隨之而改變。臟器系數(shù)對動物所處環(huán)境的變化較為敏感，且測定方法簡便易行，因而是毒理試驗中常用的指標[8]。本研究中，與對照組相比，模型組腎臟器系數(shù)（Relative kidney weight，RKW）極顯著增加，但采用陽性對照藥物和龍眼葉水提取物治療后，RKW 降低，但未有顯著變化，而且各劑量龍眼葉和排石顆粒的效果近似（二者并無顯著差別，見表 5）。

而腎臟鈣離子含量的變化趨勢與 RKW 結(jié)果類似，但排石顆粒的治療要好一些，與龍眼葉提取物相比，仍未達到顯著差異。腎臟內(nèi)的鎂離子水平卻與鈣離子的變化顯著不同。與模型對照組比較，龍眼葉水提取物各劑量組均能顯著降低腎臟內(nèi)鎂子水平，而且降低效果要比陽性對照藥物要好很多；龍眼葉水提取物各劑量組間鎂離子含量的變化不明顯，也未顯出量效關系。與模型大鼠相比，龍眼葉治療的大鼠腎臟內(nèi)草酸水平呈降低趨勢，但未達到顯著水平。而草酸含量要比陽性對照藥物低（未達到顯著水平），說明龍眼葉要比排石顆粒更能影響草酸濃度。

表5 對大鼠腎臟系數(shù)及鈣、鎂離子、草酸水平的的影響（±SD）Table 5 Effects of aqueous extracts from longan leaves on RKW and levels of Ca2+, Mg2+ and oxalic acid in kidney tissue

表5 對大鼠腎臟系數(shù)及鈣、鎂離子、草酸水平的的影響（±SD）Table 5 Effects of aqueous extracts from longan leaves on RKW and levels of Ca2+, Mg2+ and oxalic acid in kidney tissue

注：與正常對照組比較，△p<0.05，△△p<0.01；與模型對照組比較，* p<0.05，** p<0.01。

組別 劑量/(g/kg) RKW/(mg/g) Ca2+/(mmol/g prot)正常對照組 - 0.048±0.01 0.086±0.02模型對照組 - 0.106±0.03ΔΔ 0.103±0.04陽性對照組 6 0.092±0.02 0.095±0.02 2 0.094±0.02 0.105±0.02龍眼葉水提取物4 0.093±0.02 0.108±0.02 8 0.096±0.03 0.128±0.02 Mg2+/(mmol/g prot) 草酸/(mmol/L)6.55±0.33 1271.8±326.8 12.36±2.32ΔΔ 1517.9±327.3 10.67±2.93 1371.0±350.0 9.92±2.32* 1455.2±452.8 9.72±1.91* 1307.7±327.3 9.56±2.35* 1361.2±281.9

2.6 龍眼葉水提物對腎臟組織形態(tài)學的影響

圖1 各組腎臟整體外觀圖Fig.1 Appearance of rat kidney in each group

圖2 腎臟HE染色（400×，箭頭所指為草酸鈣結(jié)晶）Fig.2 Figure representative microscopic images (400×, tubular calculi showed by arrows) of kidney tissues

采用乙二醇+氯化銨誘導的模型大鼠，腎臟會有不同程度的腫大。本研究中，將摘取的腎臟用肉眼觀察，可發(fā)現(xiàn)模型組大鼠腎臟不同程度腫大，顏色變淺或發(fā)白；與模型組相比，不同劑量龍眼葉水提取物均能有效減輕腎臟的腫脹度，改善腎臟形態(tài)（圖1）。HE染色顯示，正常對照組腎臟結(jié)構(gòu)正常，未見細胞水腫變性，腎小管腔內(nèi)無沉積物，未見草酸鈣結(jié)晶。模型組大鼠腎臟組織學改變表現(xiàn)為腎臟皮部多灶性結(jié)晶，腎小管顆粒狀變性，管腔明顯擴張，形狀不規(guī)則，可見大量草酸鈣結(jié)晶聚集（淡藍色晶體，不規(guī)則，折光率強）；部分腎小球血管球和腎小囊丟失，內(nèi)含草酸鈣結(jié)晶，炎性細胞浸潤明顯；各劑量龍眼葉水提取物均能不同程度地改善腎臟病變，減輕腎小管顆粒樣變性和腎小管草酸結(jié)晶狀態(tài)（呈零散單灶性及局部小灶性分布，結(jié)晶較松散），降低結(jié)石發(fā)生率；其中以8 g/kg劑量作用最為明顯（圖2）。雖然陽性對照物可以減輕腎結(jié)石的發(fā)生（見圖 2c），但各劑量龍眼葉提取物的抗結(jié)石效果都要比陽性對照物好，尤其是4 g/kg和8 g/kg劑量，已經(jīng)看不到結(jié)晶，說明龍眼葉抗腎結(jié)石效果是非常好的。

3 討論

3.1 腎結(jié)石是泌尿外科的常見疾病之一，在我國發(fā)病率較高，近年來，我國泌尿系統(tǒng)結(jié)石的發(fā)病率有增加趨勢，目前的手術或藥物療法效果并不理想，且存在諸多副反應[9,10]。乙二醇加氯化銨法誘導腎結(jié)石動物模型是較成熟且穩(wěn)定的造模方法。乙二醇是草酸代謝途徑中的代謝產(chǎn)物，乙二醇進入體內(nèi)后轉(zhuǎn)化成羥乙酸，后者在羥乙酸氧化酶的作用下直接轉(zhuǎn)化成草酸，也可以通過乳酸脫氫酶的催化轉(zhuǎn)化成乙醛酸。乙醛酸除可直接在非酶促作用下轉(zhuǎn)化成草酸外，主要是在羥乙酸氧化酶、黃嘌呤氧化酶及乳酸脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)椴菟?，羥乙酸及乙醛酸是內(nèi)源性草酸合成的兩個主要的前體。同時乙二醇和氯化銨有一定的毒性，會對腎臟造成明顯損害，尤其是腎小球濾過功能[11]。本實驗采用成石液（2.5%乙二醇+2%氯化銨）誘導法建立腎結(jié)石大鼠模型。模型大鼠24 h飲水量、24 h尿量、尿液鈣離子含量、尿液草酸含量、血清鈣離子、血清UA、BUN、Cr含量、腎臟臟器系數(shù)及腎臟鈣離子、草酸含量均明顯升高，說明本實驗模型是成功的。

3.2 在腎結(jié)石模型大鼠尿液中和腎臟中，草酸含量、尿酸度均升高，說明大鼠體內(nèi)草酸生成明顯增加，促進腎臟中草酸鈣結(jié)晶的形成。而龍眼葉水提取物高劑量組（8 g/kg）能一定程度上降低尿草酸和腎臟草酸含量，尿液酸度比模型組增加。我們的研究結(jié)果提示，龍眼葉水提取物能減少體內(nèi)草酸生成，降低腎草酸含量，進而抑制草酸鈣結(jié)晶的形成；其機制可能是龍眼葉水提取物抑制草酸在腸道內(nèi)吸收或抑制肝臟的內(nèi)源性代謝過程，抑制羥乙酸和乙醛酸向草酸的轉(zhuǎn)化，從而使草酸生成減少。本研究中，腎結(jié)石模型大鼠血清肌酐、尿素氮和尿酸水平均明顯升高，出現(xiàn)嚴重的腎功能受損。龍眼葉水提取物（8 g/kg）能在一定程度上降低血清肌酐、尿素氮和尿酸水平。這一結(jié)果說明，高濃度的龍眼葉水提取物能保護腎功能，改善腎小球排泄等作用。

3.3 正常情況下腎小管上皮細胞可很好地抵制晶體的粘附，當草酸濃度升高時，高濃度的草酸對腎細胞有直接毒性作用，腎上皮細胞受損，細胞凋亡增加，細胞通透性增加等，使腎小管上皮細胞失去其原有的抵制晶體粘附能力，導致晶體在其表面停滯、聚集，進而損壞其固有結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為細胞的水腫壞死，腎小管管腔擴張，炎性浸潤不斷惡化，反之各種損害結(jié)果再次加重了結(jié)晶體在其各個部位的粘附、聚集[12,13]。腎結(jié)石模型大鼠大體觀察出現(xiàn)腎臟腫大、顏色變淺或發(fā)白的現(xiàn)象，且腎臟系數(shù)明顯增大；光鏡觀察出現(xiàn)腎小管萎縮，官腔明顯擴張，上皮細胞水腫，腔內(nèi)可見大量草酸鈣結(jié)晶及上皮細胞壞死物等病理改變。而不同劑量的龍眼葉水提取物能降低腎臟系數(shù)，減輕腎臟草酸鈣結(jié)晶、炎性浸潤和腎小球等病理改變，減輕腎臟組織病理損傷和腎小管草酸鈣結(jié)晶的形成。綜上所述，脆肉石硤龍眼葉水提取物具有改善腎功能和良好的抗實驗性腎結(jié)石作用，各劑量龍眼葉提取物的抗結(jié)石效果都要比陽性對照物好，尤其是4 g/kg和8 g/kg劑量，已經(jīng)看不到結(jié)晶。

3.4 Cr、BUN在一定程度上可反映腎小球濾過功能的損傷程度。無機離子如鈣、鎂、磷等參與了結(jié)石的形成，其中高鈣含量是結(jié)石形成的重要因素，而鎂與鈣競爭結(jié)合草酸的結(jié)合位點，形成可溶性的草酸鎂，可減少不溶性草酸鈣的產(chǎn)生。因此鈣是結(jié)石形成的促進成分，鎂是結(jié)石形成的抑制成分[14]。人體血液中的鈣、鎂主要經(jīng)腎小球濾過，而大部分又會被腎小管重吸收。腎結(jié)石模型大鼠出現(xiàn)血清中鈣和鎂離子水平升高，尿液中鈣和鎂離子水平降低，腎臟鈣離子水平升高。這可能與模型大鼠腎功能受損，腎臟排泄鈣鎂離子能力減弱，使尿鈣和尿鎂含量減少。而鈣離子會在腎臟積聚，與草酸形成結(jié)晶。但本研究結(jié)果中，與模型對照組比較，低劑量龍眼葉水提取物能明顯升高大鼠24 h尿液鎂離子濃度，而且顯著降低腎臟內(nèi)鎂子濃度，而且降低效果要比陽性對照藥物要好很多；但是血清中鎂離子濃度變化不大。上述結(jié)果正好證明了龍眼葉通過調(diào)節(jié)鎂離子濃度來實現(xiàn)抑制結(jié)石的目的。

3.5 前人研究表明，草酸鈣結(jié)晶生成的病理過程主要是草酸鈣晶體刺激腎小管上皮細胞，激活煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的激活，產(chǎn)生活性氧，進而使親環(huán)蛋白D（Cyclophilin D）活化，繼而發(fā)生線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放，誘導線粒體坍塌，活性氧進一步增多，機體處于較高的氧化應激狀態(tài)，細胞色素C由坍塌的線粒體釋放繼而激活Caspase3，這些反應最終導致小管上皮細胞損傷乃至凋亡，改變細胞膜上磷脂酰絲氨酸的分布，從而促進晶體與小管上皮細胞的粘附，促成大量的腎結(jié)晶[15]。既往有關腎結(jié)晶的體內(nèi)、外研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)晶形成的過程中，隨著成石因素逐漸強于抑石因素，氧化應激水平增強，而機體本身的抗氧化能力逐漸減弱，如果能從外界給予機體抵抗氧化應激的支持，那么就可以減輕腎小管上皮細胞損傷，阻斷結(jié)晶的進一步生長[16]。有研究者從龍眼果提取物包括假種皮，果皮和種子，表現(xiàn)出了優(yōu)異的抗氧化能力和良好的抗酪氨酸酶和抗癌活性[3～5]。本研究的相關結(jié)果，也說明了龍眼葉水提物具有抗腎結(jié)石能力，其可能的機理是龍眼葉中所含有的黃酮類等活性物質(zhì)有關，其詳細機理還有待于進一步深入研究。

4 結(jié)論

本研究立足于龍眼葉的深加工與綜合利用，首次評估了龍眼葉水提物對腎結(jié)石大鼠模型抑制結(jié)石效果的影響，研究結(jié)果表明，各劑量龍眼葉水提取物能夠不同程度的降低大鼠24 h尿液草酸水平；各劑量提取物均能顯著降低血清中尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）濃度，能不同程度降低腎臟器系數(shù)和腎臟草酸水平，減輕腎小管上皮細胞凋亡及草酸結(jié)晶程度，改善腎臟病變，降低腎結(jié)石發(fā)生率。研究結(jié)果提示龍眼葉水提取物能抑制和減輕腎結(jié)石的發(fā)生。本研究結(jié)果可為龍眼葉綜合利用提供理論依據(jù)，也可為腎結(jié)石疾病的中藥防治提供參考。

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