祝丹陳啟蘭#祝光禮赫小龍夏益

1 浙江省杭州市中醫(yī)院 浙江 杭州 310007

2 浙江省杭州市富陽區(qū)中醫(yī)院 浙江 杭州 311400

缺血性心臟病是指心臟血流灌注減少，不能滿足心臟正常活動所需，進而導(dǎo)致心肌及其細胞能量代謝發(fā)生變化得一種病理狀態(tài)[1]。缺血性心律失常是其主要臨床表現(xiàn)之一。復(fù)方黃芪養(yǎng)心合劑（CAMYM）為我院院內(nèi)制劑（浙藥制字Z20100032），臨床運用中觀察到其具有一定的抗缺血性心律失常作用?，F(xiàn)將其抗缺血性心律失常的發(fā)生作用機制作一定探討。

1 材料與方法

1.1 動物：雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重180-200g，清潔級，無人畜共患疾病，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物許可證號：SCXK（滬）2013-0016。

1.2 藥品：中藥：CAMNH（黃芪20g（批號101010），黨參20g（批號101005），太子參20g（批號101013），苦參20g（批號101022），甘松20g（批號101019），炙甘草10g（批號101018），生山楂15g（批號101007）。單味中藥均由浙江省臨安市中藥藥材有限公司提供。西藥：琥珀酸美托洛爾（47.5mg阿斯利康制藥有限公司批號1312028），戊巴比妥鈉（25g/瓶，批號WS20080118）。生理鹽水（500ml/瓶杭州市中醫(yī)院）。

1.3 主要試劑和儀器：DH-150動物呼吸機，Medlab-U/4CS生物信號采集處理系統(tǒng)，低溫冰箱，酒精，蘇木素，中性樹膠，DAB試劑盒，戊巴比妥鈉，苦味酸，二甲苯，手術(shù)材料：眼科剪、手術(shù)剪刀（大、小）、血管鉗、持針器、針管、組織鑷、凍存管、刀片、生化管等。

1.4 實驗方法：分述如下。

1.4.1 實驗分組和給藥：將60只SD雄性大鼠隨機分為MSSRT組、CAMNH小劑量組、CAMNH中劑量組、CAMNH大劑量組、模型組、假手術(shù)組，每組10只。給藥劑量：MSSRT 7g/7ml/kg/d，CAMNH小劑量7g/7ml/kg/d，CAMNH中劑量14g/7ml/kg/d，CAMNH大劑量組28g/7ml/kg/d,模型組14g/7ml/kg/d(生理鹽水)，假手術(shù)組14g/7ml/kg/d(生理鹽水)。灌胃干預(yù)時間為兩周。

1.4.2 SD大鼠缺血性心律失常模型的制作：冠狀動脈左前降支高位結(jié)扎法[2]，具體操作方法參考《藥理實驗方法學(xué)》并稍作改進：大鼠稱重，麻醉，固定，消毒，分離頸部筋膜及肌肉，暴露氣管，將動物呼吸機插管插入氣管內(nèi)，固定，動物呼吸機選擇潮氣量3ml/100g，呼吸頻率60次/分，呼吸比2：1，此時可見大鼠胸部隨呼吸機起伏，證明氣管插管成功。接入大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖，通過Medlab-E觀察大鼠心電圖，連續(xù)記錄。消毒胸部皮膚，逐層頓性分離淺深筋膜及肌肉，暴露第3-5肋骨并剪斷，用鑷子輕輕撕破心包，充分暴露心臟血管。用5-0的線在左心耳下的左冠狀動脈前降支根部下2-3cm處結(jié)扎。結(jié)扎成功的標志為心電圖導(dǎo)聯(lián)上ST段抬高大于0.2mv以上。結(jié)扎時間為30min。結(jié)扎時間到后，取下心臟標本。MSSRT、CAMNH小劑量組、CAMNH中劑量組、CAMNH大劑量組、模型組造模方法同上，假手術(shù)組基本方法同上，但只穿線，不結(jié)扎。

2 檢測指標及方法

2.1 大鼠心肌酶譜測定：造模后取血，由杭州市中醫(yī)院生化檢驗科協(xié)助完成。

2.2 大鼠心肌組織病理切片常規(guī)HE染色：心肌組織石蠟包埋及組織切片（由杭州市中醫(yī)院病理科協(xié)助完成）。70°烤箱考片1h；二甲苯及各級酒精脫蠟（二甲苯（I）6min，二甲苯（II）6min，100%酒精3min，95%酒精3min，80%酒精2min，75%酒精2min，蒸餾水2min）；蘇木素染色10-15min，自來水沖洗；鹽水乙醇分化30-50s；自來水浸泡5-10min；伊紅液復(fù)染2min；常規(guī)脫水，透明(100%酒精（I）2min，95%酒精2min，100%酒精（II）2min，二甲苯石碳酸（3：1）1min，二甲苯（I）1min，二甲苯（II）1min)；中性樹脂封片；Olypmus顯微鏡讀片。

2.3 根據(jù)記錄到的心電圖進行室性心律失常（VA）評分：根據(jù)Ravingerova T等[3]的方法進行室性心律失常評分。無室性心律失?；蛴校?次的室性早搏，計0分；僅有≥5次的室性早搏計1分；僅有一陣＜60s的室性心動過速，計2分；有一陣≥60s或室性心動過速陣累計＜60s的室性心動過速計3分；多陣室性心動過速累計＞60s計4分；出現(xiàn)室性顫動計5分；出現(xiàn)持續(xù)5min以上的室性顫動或在觀察期間死亡計6分。

3 結(jié)果

3.1 實驗動物存活情況：SD雄性大鼠共60只，灌胃死亡2只，CAMNH小劑量組死亡1只，CAMNH中劑量組死亡2只。麻醉死亡2只，分別為MSSRT組和模型性組各一只。左前冠狀動脈結(jié)扎死亡5只，分別MSSRT組1只、CAMNH小劑量組2只、CAMNH中劑量組1只、CAMNH大劑量組1只。共死亡大鼠10只，存活50只，總體死亡率20%。

3.2 SD大鼠心肌酶譜CK、CK-MB的分析：造模后采取腹主動脈取血，利用血清檢查心肌酶CK、CK-MB（采用免疫抑制法檢測，具體操作由杭州市中醫(yī)院檢驗科生化室完成），根據(jù)檢測數(shù)據(jù)利用SPSS進行分析。與假手術(shù)組比較，模型組、MSSRT組、CAMNH小劑量組、CAMNH中劑量組、CAMNH大劑量組心肌酶譜中肌酸激酶（CK）、同工酶（CK-MB）均有升高，但與模型組相比藥物組心肌酶CK、CK-MB升高的程度相對少。見表1。

表1 SD大鼠心肌酶譜CK、CK-MB

3.3 缺血30min后心肌組織HE染色結(jié)果觀察：通過光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織缺血30min后經(jīng)HE染色心臟病理切片發(fā)現(xiàn)CAMNH組（大劑量組和中劑量組）和MMSRT組均無胞漿嗜酸性變、顆粒變性和凝固性壞死，而模型組在心肌缺血早期即出現(xiàn)典型的胞漿嗜酸性變、顆粒變性和凝固性壞死；CAMNH組（小劑量組）在缺血30min后亦出現(xiàn)了胞漿嗜酸性變和顆粒變性，但未出現(xiàn)凝固性壞死。見表2及圖1。

表2 心肌組織HE染色后

圖1 HE染色

3.4 VA評分：CAMNH組（大劑量組、中劑量組）和MMSRT組VA評分均低于模型組和假手術(shù)組（P＜0.05）；CAMNH組（小劑量組）VA評分低于模型組（P＜0.05）；但與假手術(shù)組比較無顯著性差異（P＞0.05）；CAMNH各組間比較無顯著性差異（P＞0.05）。見表3。

表3 VA評分

4 討論

中醫(yī)學(xué)并無心律失常的說法，因心律失常多表現(xiàn)為“心動悸、脈結(jié)代”，故心律失常在中醫(yī)學(xué)中歸于“心悸”范疇。心悸包括心悸與怔忡，多云“悸久怔忡”。其病位在心，與其它臟腑之病均有一定相關(guān)性。多屬本虛標實，虛實夾雜之證。虛者當分清氣、血、陰、陽虧虛，實者當辨別氣、火、痰、瘀血等不同病理因素。虛者多由氣、血、陰、陽虧虛，日久造成心失所養(yǎng)而致病。實者可為氣血運行不暢、痰火擾心、痰蒙神竅、水凌心肺等引起。而且，實證日久，必然引起正氣的虧耗，形成虛實夾雜。故心律失常的治療因從整體觀念出發(fā)，辨證論治。其治則應(yīng)當是陰陽并補、氣血兼顧、補泄并施。治法可以是寧心安神、養(yǎng)心安神、理氣通絡(luò)、活血化瘀、滋陰補血、化痰理氣、清熱解毒等等。

CAMNH作為本院院內(nèi)制劑，臨床應(yīng)用多年，由黃芪、黨參、太子參、苦參、甘松、炙甘草、生山楂組成。方中黃芪、黨參、太子參共同起到補益心氣；苦參清心經(jīng)之火；山楂活血祛瘀、養(yǎng)心安神；甘松理氣；炙甘草益氣和中，調(diào)和諸藥。全方配伍，共奏益氣活血、祛瘀清心之功效。臨床運用過程中我們發(fā)現(xiàn)它對于心律失?；颊撸捎行Ь徑饣颊咝貝炐赝?、氣短乏力、心悸、頭暈等癥狀。而在前期實驗研究中，CAMNH能使缺血再灌注室性早搏與室性心動過速出現(xiàn)時間提前，室性心動過速陣數(shù)減少，室性心律失?？傇u分降低，其有效改善大鼠缺血再灌注心律失常作用與β受體阻滯劑相近[4]。

本研究結(jié)果顯示，CAMNH能減少心肌缺血時心肌酶譜CK、CK-MB升高程度，對心肌組織在心肌缺血時能減輕損傷程度，能降低心肌缺血時VA評分，提示CAMNH具有抗缺血性心律失常的作用。

綜上，CAMNH具有抗缺血性室性心律失常作用，尤以CAMNH大劑量組和CAMNH中劑量組效果明顯，且CAMNH大劑量組與MSSRT抗缺血性室性心律失常作用接近。

[1]楊寶峰．藥理學(xué)[M].6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：208-220.

[2]劉濤，王偉，趙明鏡，等.左冠狀動脈前降支結(jié)扎法制作大鼠心肌梗死模型.實驗動物與比較醫(yī)學(xué)，2009，29（2）：120-123.

[3]Ravingerova T,Tribulova N,SlezakJ,etal.Brief,intermediate and prolonged is chemiain the isolated crystaloid perfusedrat heart∶relationship between susceptibity to arrhythmias and degree of ultras tructural injury[J].JMol Cell Cardiol,1995,27(9)：1937-1951.

[4]陳啟蘭,龔一萍,祝光禮,等.復(fù)方黃芪養(yǎng)心合劑對缺血再灌注大鼠室性心律失常的作用[J].浙江中醫(yī)雜志,2013,48（4）：267-269.