遲 夏,李安婕,李美茜 (北京師范大學(xué)環(huán)境學(xué)院,水沙科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,水環(huán)境模擬國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京 100875)

生物柴油是一種可再生,環(huán)境友好型能源,與動(dòng)植物油脂相比,微生物油脂生產(chǎn)周期短,占用土地量小,可利用大量有機(jī)廢棄物,是降低生物柴油生產(chǎn)成本,避免“與人爭(zhēng)糧,與糧爭(zhēng)地”的重要途徑之一.利用廢水作為碳源生產(chǎn)微生物油脂不僅可以降低生產(chǎn)成本,還可以減少因廢水排放造成的環(huán)境污染.此外,把剩余污泥作為可再生資源實(shí)現(xiàn)能源回收,不僅能滿足嚴(yán)格的環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),還能持續(xù)提供可靠能源.近幾年已有研究者開展了市政廢水處理廠初沉池,二沉池活性污泥生產(chǎn)生物柴油的方法,含量以及組分的研究[1-3],但目前活性污泥中提取出的脂質(zhì)相對(duì)純菌培養(yǎng)較低,為了提高活性污泥提取油脂制備生物柴油的可行性,需要從提高活性污泥微生物產(chǎn)油能力入手.

好氧顆粒污泥是多種微生物在生存競(jìng)爭(zhēng)過程中自發(fā)形成的一種代謝互補(bǔ)緊密的營(yíng)養(yǎng)關(guān)系,具有相當(dāng)豐富的微生物相,通過調(diào)整好氧顆粒污泥培養(yǎng)條件很可能可以提高顆粒污泥混合菌群中產(chǎn)油微生物的比重以及油脂產(chǎn)量.顆粒污泥結(jié)構(gòu)致密且生物量大,有利于簡(jiǎn)化后續(xù)微生物油脂提取脫水步驟以及提高油脂產(chǎn)量,從而降低生物柴油生產(chǎn)成本.

曝氣量是污水好氧生化處理系統(tǒng)的重要工藝參數(shù)之一,影響著活性污泥中微生物的菌群結(jié)構(gòu)以及降解污染物效果[4].此外,曝氣系統(tǒng)也是污水處理廠運(yùn)行的主要能耗單元之一.已有研究表明曝氣量及溶解氧對(duì)微生物脂肪酸的組成會(huì)產(chǎn)生影響[5],因此,從節(jié)能降耗的角度出發(fā),研究曝氣量對(duì)顆粒污泥菌群結(jié)構(gòu)、油脂積累以及后續(xù)制備生物柴油產(chǎn)量及組分的影響,對(duì)于顆粒污泥制備生物柴油的工業(yè)化生產(chǎn)具有理論價(jià)值和實(shí)踐意義.

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)裝置和SBR運(yùn)行

以3個(gè)工作體積為1.2L的有機(jī)玻璃柱(直徑5cm,高60cm)作為SBR反應(yīng)器,分別設(shè)置不同的曝氣量(R1,42L/(min·m3);R2,167L/(min·m3);R3,667L/(min·m3)).在反應(yīng)器底部和中部分別設(shè)進(jìn)水口和排水口.進(jìn)水COD濃度為2000mg/L, COD:N:P=100:2:1,分別以葡萄糖和氯化銨作為碳源和氮源.反應(yīng)器每6h為一個(gè)周期,其中進(jìn)水5min,曝氣344min,沉淀 3min,出水8min.在運(yùn)行期間,通過投加NaHCO3,控制反應(yīng)器的pH值處于7.5～8之間.接種顆粒污泥濃度約為6.4g/L左右.運(yùn)行期間,測(cè)試的指標(biāo)包括葡萄糖和氨氮濃度,污泥生物量,污泥粒徑,污泥容積指數(shù),以反映污泥的變化.

1.2 顆粒污泥分析檢測(cè)方法

出水葡萄糖濃度采用苯酚-硫酸法測(cè)定[6],氨氮濃度采用國標(biāo)《水質(zhì)氨氮的測(cè)定納氏試劑分光光度法》[7]測(cè)定.污泥平均粒徑由激光粒度分析儀(Microtrac S3500,U.S.)測(cè)試.污泥特性監(jiān)測(cè)指標(biāo)包括總懸浮固體濃度 MLSS和污泥溶劑指數(shù)SVI[8].污泥中微生物菌群分布采用高通量測(cè)序獲得,細(xì)菌與真菌的分布比例采用熒光定量PCR分析.選用E.Z.N.A.? Bacteria DNA試劑盒(Omega Bio-Tek, Norcross, GA, U.S.),根據(jù)試劑盒說明提取微生物DNA,并分別對(duì)細(xì)菌16s的V3V4區(qū),真菌18s rRNA 進(jìn)行PCR擴(kuò)增,引物為16S Eub338 (ACTCCTACGGGAGGCAGCAG)/Eub518 (ATTACCGCGGCTGCTGG)和18S-F(CGGCTACCACATCCAAGGAA)/18S-R(GCTGGAATTACCGCGGCT).擴(kuò)增程序如下:95℃變性2min,然后在95℃變性30s,55℃復(fù)性30s,72℃延伸30s,循環(huán)25次,72℃終延伸5min.20μL 標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)體系:5×Fastpfu Buffer 4μL,2.5mM dNTPs 2μL,上下游引物(5mM)各0.8μL,Fastpfu聚合酶0.4μL,DNA模板10ng.每個(gè)樣本3次重復(fù),將同一樣本的PCR產(chǎn)物混合后用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),使用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒(Axygen Biosciences, Union City, CA, U.S.),將PCR產(chǎn)物用QuantiFluor?-ST藍(lán)色熒光定量系統(tǒng)(Promega, U.S.)進(jìn)行檢測(cè)定量.純化后的擴(kuò)增產(chǎn)物由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司在Illumina MiSeq PE300 平臺(tái)上進(jìn)行測(cè)序[9].

1.3 生物柴油制備和分析方法

生物柴油的制備方法:將1g 脫水污泥,7.5mL 5%硫酸甲醇及10mL正己烷在75℃條件下甲酯化反應(yīng)7h,使用5mL飽和氯化鈉溶液將錐形瓶中的混合物轉(zhuǎn)移至離心管,并用正己烷重復(fù)萃取3次,離心后提取上層正己烷層,在80℃條件下蒸干,獲得生物柴油.生物柴油在進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)前,存于-20℃冰箱.加入適量正己烷充分溶解樣品,并以1,3-二甲苯作為內(nèi)標(biāo),采用0.45μm的聚四氟乙烯(PTFE)濾膜過濾,利用安捷倫7890A氣相色譜儀進(jìn)行分析.色譜柱為30m×0.320mm×0.25μm HP-5毛細(xì)管柱(19091J-413,Agilent),其固定相為5%苯基甲基聚硅氧烷.柱箱溫度從50℃開始,保持2min,以10℃/min的速率提高到130℃,以4℃/min提高到200℃,以3℃/min升至220℃,最后以5℃/min升至270℃.氫氣,空氣和氮?dú)獾牧髁糠謩e是30,300和25mL/min.進(jìn)樣量為1μL,不分流模式.進(jìn)樣口和FID檢測(cè)器溫度分別設(shè)為200℃和270℃.用于脂肪酸甲酯定性定量分析的標(biāo)準(zhǔn)物包括含14種C8～C24的FAME混標(biāo)(18918-1AMP,Sigma-Aldrich,美國),兩種支鏈脂肪酸甲酯(12-甲基十四烷酸甲酯,14-甲基十五烷酸甲酯,Larodan Fine Chemicals AB,瑞典)和兩種奇數(shù)碳脂肪酸甲酯(十五烷酸甲酯,十七烷酸甲酯,AccuStandard, Inc.,紐黑文,美國).

2 結(jié)果與討論

2.1 曝氣量對(duì)SBR運(yùn)行情況的影響

曝氣量分別為42,167和667L/(min·m3)的條件下,SBR反應(yīng)器中的溶解氧濃度在一個(gè)運(yùn)行周期內(nèi)雖然會(huì)發(fā)生變化,但基本保持在3個(gè)不同水平,曝氣量較高的反應(yīng)器內(nèi)能長(zhǎng)時(shí)間保持較高的溶解氧濃度(圖1).進(jìn)水完成后,R1反應(yīng)器中的溶解氧略低,為4mg/L,R2和R3的溶解氧濃度為4.4mg/L.曝氣量為42L/(min·m3)時(shí),反應(yīng)器中的溶解氧在1h內(nèi)下降到2mg/L左右,之后有輕微下降趨勢(shì),并在第4h降為1.6mg/L,緊接著開始略有上升.R2中的溶解氧在進(jìn)水1h后,下降到3.7mg/L,之后呈逐漸上升的趨勢(shì),在曝氣結(jié)束時(shí)達(dá)到6.4mg/L.曝氣量為667L/(min·m3)時(shí),R3的溶解氧濃度在前2h迅速上升到8.7mg/L;后4h,R3的溶解氧雖然略有波動(dòng),但幾乎都在8mg/L以上.反應(yīng)器中溶解氧的回升表明顆粒污泥對(duì)葡萄糖和氨氮的降解接近完成,減少耗氧量,使得反應(yīng)器中的溶氧濃度增加.

曝氣量不同,不僅反應(yīng)器中的溶解氧濃度不同,顆粒污泥受到的剪切力也不同,因此顆粒污泥的生物量,沉降性能,平均粒徑均呈現(xiàn)出明顯差異(圖2).曝氣量為42L/(min·m3)時(shí),顆粒污泥的生物量在第一周內(nèi)幾乎不變,微生物生長(zhǎng)和衰亡的速率相當(dāng);曝氣量為167 和667L/(min·m3)時(shí),生物量有明顯上升,說明提高曝氣量有助于微生物的生長(zhǎng).但在后兩周.

反應(yīng)器R1和R2出現(xiàn)了生物量流失,MLSS逐漸下降.這是由于顆粒污泥粒徑較大,曝氣量低時(shí),所提供的剪切力不利于顆粒污泥結(jié)構(gòu)穩(wěn)定;并且曝氣量較低時(shí),反應(yīng)器中的溶解氧濃度也較低,在高有機(jī)負(fù)荷條件下,容易出現(xiàn)污泥膨脹.污泥發(fā)生膨脹后,有許多來不及沉降的污泥隨出水流出,使得反應(yīng)器中的MLSS下降.

圖1 不同曝氣量下的SBR反應(yīng)器溶解氧濃度Fig.1 The DO concentration in the three SBRs with different aeration rates

圖2b的結(jié)果也表明,曝氣量為42和167L/(min·m3)時(shí),顆粒污泥的SVI值明顯升高(大于150mL/g),污泥沉降性能惡化.污泥發(fā)生膨脹時(shí),顆粒污泥不再保持緊密結(jié)實(shí)的結(jié)構(gòu),反而變得蓬松,如圖2c所示,曝氣量為42和167L/(min·m3)的污泥粒徑明顯增加,而曝氣量為667L/(min·m3)下的污泥粒徑維持在570～730um范圍內(nèi),變化不大.當(dāng)曝氣量為667L/(min·m3)時(shí),反應(yīng)器中的溶解氧充足,并且微生物和底物的接觸更為均勻,顆粒污泥處于較穩(wěn)定的狀態(tài).在第14d時(shí),R3反應(yīng)器中的MLSS達(dá)到(17.74 ± 0.16)g/L.并保持很好的沉降性能,其SVI在35mL/g以下.顆粒污泥的粒徑在前兩周逐步上升,第三周有所下降,這可能是由于生物量太高時(shí),污泥負(fù)荷降低,引起顆粒污泥輕微解體.雖然曝氣量對(duì)顆粒污泥的生長(zhǎng)和性狀有很大影響,但它們對(duì)葡萄糖均有很好的降解效果.曝氣量為42L/(min·m3)時(shí),顆粒污泥對(duì)氨氮的降解效果不如曝氣量較高時(shí)的情況,剩余氨氮約為5mg/L.當(dāng)曝氣量較高時(shí),剩余氨氮低于1mg/L.

觀察污泥的形態(tài)特征,發(fā)現(xiàn)顆粒污泥在較低曝氣量下運(yùn)行時(shí),形態(tài)發(fā)生了顯著的改變(圖3).當(dāng)曝氣量為42和167L/(min·m3)時(shí),污泥的顏色從初始的黃色變成灰白色,在邊界上出現(xiàn)絨毛狀微生物.第14d時(shí),由于較小的絮狀物更容易被排出,反應(yīng)器中留下的多是連接成片狀的污泥或是被灰白色微生物包裹的顆粒污泥.雖然有許多絲狀菌附在顆粒污泥的表面,但膨脹后顆粒污泥內(nèi)部黃色的區(qū)域仍然易于辨認(rèn).當(dāng)曝氣量為667L/ (min·m3)時(shí),顆粒污泥除了在數(shù)量上明顯增多外,在外觀上與接種顆粒污泥無明顯差別,均保持密實(shí)的結(jié)構(gòu),而且顆粒污泥呈黃色,并無明顯膨脹的現(xiàn)象.

圖2 曝氣量對(duì)SBR反應(yīng)器中顆粒污泥生物量、沉降性能和平均粒徑的影響Fig.2 The performance parameters of the three SBRs:MLSS of the granular sludge, SVI of the granular sludge, sedimentation and particle size of sludge

2.2 曝氣量對(duì)顆粒污泥制備生物柴油產(chǎn)量及組分的影響

在曝氣量分別為42,167和667L/(min·m3)的條件下運(yùn)行20d后,顆粒污泥制備生物柴油的產(chǎn)量有了不同程度的提高,分別為(38.39±1.26),(48.62±1.36)和(27.28±2.94)mg/g SS,初始接種污泥的生物柴油產(chǎn)量為(22.71±2.24)mg/g SS,其中曝氣量為167L/(min·m3)條件下單位生物量的油脂含量最高.在667L/(min·m3)條件下,顆粒污泥的生長(zhǎng)量最高,降低了污泥負(fù)荷,使得相應(yīng)的生物柴油產(chǎn)量的增幅較低.

另一方面,不同曝氣量對(duì)顆粒污泥制備生物柴油各組分的影響極為明顯(圖3).如圖a所示,曝氣量為42,167和667L/(min·m3)時(shí),棕櫚油酸甲酯(C16:1)的產(chǎn)量隨曝氣量的降低而升高,分別為(10.98 ± 0.22),(4.13 ± 0.46)和(1.70 ± 0.17) mg/g SS.曝氣量為667L/(min·m3)時(shí),棕櫚酸甲脂(C16:0)的產(chǎn)量也明顯低于曝氣量為42和167L/(min·m3)的情況.但油酸甲酯(C18:1)的產(chǎn)量隨曝氣量的變化表現(xiàn)出相反的趨勢(shì),隨著曝氣量的提高,其產(chǎn)量分別為(9.72±0.34),(12.16±0.36)和(14.79±1.35)mg/g SS.此外,亞油酸甲酯(C18:2)也受曝氣量影響很大,在曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),產(chǎn)量高達(dá)(20.85±0.09) mg/g SS.但曝氣量在42和667L/(min·m3)時(shí),其產(chǎn)量明顯偏低,分別為(4.05±0.38)和(0.82±0.04)mg/g SS.上述結(jié)果表明適當(dāng)?shù)钠貧庥欣谀承┨囟ㄖ舅岬睦鄯e.比較生物柴油的組分分布發(fā)現(xiàn),在曝氣量為667L/(min·m3)的條件下,顆粒污泥制備生物柴油的組分分布與接種污泥極其相近.這是由于接種污泥是在曝氣量為833L/(min·m3)的條件下培養(yǎng)而得的,本次實(shí)驗(yàn)所設(shè)的667L/(min·m3)與之非常接近.而曝氣量為42和167L/(min·m3)時(shí),生物柴油的組分分布卻差異很大.王怡等[10]采用某污水處理廠的二沉池污泥制備生物柴油,產(chǎn)量為19.3mg/g SS,主要包括棕櫚油酸甲酯,棕櫚酸甲酯,油酸甲酯,硬脂酸甲酯和亞油酸甲酯.其生物柴油產(chǎn)量與本實(shí)驗(yàn)初始接種污泥的產(chǎn)量相近,遠(yuǎn)低于在曝氣量167L/ (min·m3)下培養(yǎng)的顆粒污泥,說明適當(dāng)?shù)钠貧鈼l件確實(shí)能夠提高生物柴油產(chǎn)量且影響生物柴油組分.

2.3 曝氣量對(duì)顆粒污泥菌群結(jié)構(gòu)的影響

在不同曝氣量條件下運(yùn)行一段時(shí)間后,顆粒污泥的菌群結(jié)構(gòu)變化明顯.通過熒光定量PCR確定了顆粒污泥中細(xì)菌和真菌的比例(表1).3個(gè)反應(yīng)器中細(xì)菌均占據(jù)著絕對(duì)優(yōu)勢(shì),比例在91%以上.曝氣量為42和667L/(min·m3)時(shí),真菌的比例分別是0.01% 和0.18%;曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),真菌比例最高(8.57%).曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),顆粒污泥發(fā)生膨脹,部分生物量流失,使得污泥負(fù)荷增加(約1kg COD/kg MLSS?d).本實(shí)驗(yàn)室之前的研究表明,初始污泥負(fù)荷較高時(shí),真菌更容易成為顆粒污泥中的優(yōu)勢(shì)菌群.類似地,本研究后期污泥負(fù)荷的提高,也可能促進(jìn)真菌的繁殖.顆粒污泥在曝氣量為42L/(min·m3)條件下運(yùn)行時(shí),雖然污泥負(fù)荷有所提高,但過低的曝氣量可能影響微生物的活性,進(jìn)而抑制了真菌的生長(zhǎng).真菌的產(chǎn)油能力一般高于細(xì)菌[11],因此曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),單位污泥的生物柴油產(chǎn)量最高(圖4).

圖3 不同曝氣量下SBR反應(yīng)器中的顆粒污泥形態(tài)Fig.3 The morphology of the granular sludge in the three SBRs with different aeration rates

表1 顆粒污泥中細(xì)菌和真菌的比例Table 1 The distribution of bacteria and fungi in the three types of granular sludge

圖4 SBR反應(yīng)器顆粒污泥制備生物柴油的產(chǎn)量和組分分布Fig.4 The yield of each FAME from the granular sludge based on the weight of dry sludge and the percentage of each FAME

對(duì)顆粒污泥中的細(xì)菌進(jìn)行門水平上的分析(圖5a),發(fā)現(xiàn)變形菌門Proteobacteria和擬桿菌門Bacteroidetes占優(yōu)勢(shì),其中Proteobacteria的比例大于70%.隨著曝氣量的增加,Proteobacteria的比例略有下降,但Bacteroidetes的比例卻明顯提高.曝氣量為42L/(min·m3)時(shí),厚壁菌門Firmicutes比其余情況更高,約占9%.此外,Gracilibacteria的比例在曝氣量為167L/(min·m3)時(shí)明顯增高.如圖5b所示,曝氣量過低時(shí),叢毛單胞菌Comamonadaceaeunclassified在細(xì)菌中占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)(占46%).此外,Tolumonas,Photobacterium和Lactococcus也是含量較高的菌種,各占7～9%.許多研究表明Comamonadaceae含有C16:0,C16:1和C18:1等脂肪酸[12-14].十六烷酸(C16:0)是Tolumonas osonensis sp.最主要的脂肪酸[15],碳數(shù)為16的飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸則是Photobacterium中最主要的脂肪酸[16]. Lactococcus lactis細(xì)胞膜上主要的脂肪酸為十六烷酸(C16:0)和十八烯酸(C18:1)[17].這些細(xì)菌均含有碳數(shù)為16的脂肪酸,因此曝氣量為42L/(min·m3)時(shí),生物柴油中碳數(shù)為16的脂肪酸酸甲酯(C16:0,C16:1)的產(chǎn)量最高.曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),Comamonadaceae的比例下降到9%,但Tolumonas和Photobacterium的含量大幅上升,分別占31%和21%.因此,曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),生物柴油中仍有較高的棕櫚酸甲酯(C16:0)和棕櫚油酸甲酯(C16:1).曝氣量為667L/(min·m3)時(shí),最主要的四類細(xì)菌分別是Comamonadaceae(12%),Photobacterium(18%),Flavobacterium(9%)和Hydrogenophaga(10%),而Tolumonas的比例有明顯的下降,僅為1%.Hydrogenophaga含有較多的十八烯酸[18],有助于提高生物柴油中油酸甲酯(C18:1)的含量.

對(duì)顆粒污泥中的真菌進(jìn)一步鑒定(圖6a),結(jié)果表明曝氣量為42和167L/(min·m3)時(shí),顆粒污泥的真菌部分幾乎完全由子囊菌門Ascomycota構(gòu)成,其比例大于99%.當(dāng)曝氣量為667L/(min·m3)時(shí),顆粒污泥的真菌多樣性更為豐富,Ascomycota的比例下降到82%,另外還有褐藻門Ochrophyta(12%),Ciliophora(3%)等.圖6b給出了真菌在屬水平上的分析結(jié)果,Dipodascus和Hypocreales都屬于子囊菌門Ascomycota,但Hypocreales只出現(xiàn)在曝氣量為667L/(min·m3)的情況下.褐藻門Ochrophyta被進(jìn)一步鑒定為Spumella. Dipodascus是一種酵母菌,屬于Dipodascaceae科,Botha和Kock1[19]在Dipodascaceae中提取出亞油酸(C18:2).Dipodascu在顆粒污泥中的出現(xiàn),大大提高了生物柴油中亞油酸甲酯(C18:2)的含量(圖6).

圖5 顆粒污泥細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)Fig.5 The bacterial population structure of granular sludge in the three SBRs

圖6 顆粒污泥真菌菌群結(jié)構(gòu)Fig.6 The fungal population structure of granular sludge in the three SBRs

3 結(jié)論

3.1 曝氣量需控制在一個(gè)適中的水平才有利于微生物累積油脂.當(dāng)曝氣量太高時(shí),微生物生長(zhǎng)速率太快,降低了微生物的油脂量.曝氣量太低時(shí),微生物油脂產(chǎn)量也會(huì)減少.當(dāng)曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),單位污泥的生物柴油產(chǎn)量較高,為(48.62 ± 1.36) mg/g SS.

3.2 不同曝氣條件下的菌群結(jié)構(gòu)有顯著差別,曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),真菌比例最高,達(dá)到8.57%,而細(xì)菌中的Tolumonas和Photobacterium含量也大幅上升,分別占31%和21%,菌群結(jié)構(gòu)的差異可能是導(dǎo)致油脂產(chǎn)量不同的主要原因.

3.3 曝氣量較低時(shí),顆粒污泥傾向于累積更多棕櫚酸 (C16:0)和棕櫚油酸(C16:1);曝氣量為167L/(min·m3)時(shí),油酸甲酯(C18:2)大幅增加,該油脂組分的變化可能與顆粒污泥中出現(xiàn)的酵母Dipodascus有很大的關(guān)系.

[1] Mondala A, Liang K, Toghiani H, et al. Biodiesel production by in situ transesterification of municipal primary and secondary sludges [J]. Bioresource Technology, 2009,100(3):1203-1210.

[2] 劉 琳,葉嘉琦,劉玉洪,等.好氧污泥-微藻耦合顆粒的培養(yǎng)及特性研究 [J]. 2017,37(7):2536-2541.

[3] Pastore C, Lopez A, Lotito V, et al. Biodiesel from dewatered wastewater sludge: a two-step process for a more advantageous production [J]. Chemosphere, 2013,92(6):667-673.

[4] 楊岸明.城市污水處理廠曝氣節(jié)能方法與技術(shù) [D]. 北京工業(yè)大學(xué), 2012.

[5] Ahmed S U, Singh S K, Pandey A, et al. Fatty acid profiling during microbial lipid production under varying pO2and impeller tip speeds [J]. Applied Biochemistry and Biotechnology, 2008,151(2):599-609.

[6] Philipp Gerhardt, Murray R G E, et al. Methods for general and molecular bacteriology [M]. American Society for Microbiology, 1994.

[7] HJ535-2009 《水質(zhì) 氨氮的測(cè)定-納氏試劑分光光度法》[S].

[8] APHA, 2005. Standard methods for the examination of water and wastewater, twenty first ed [J]. American Public Health Administration, Washington, 2005.

[9] Sun Q, Li A J, Li M X, et al. Effect of pH on biodiesel production and the microbial structure of glucose-fed activated sludge [J]. Int Biodeter Biodegr, 2015,104:224-230.

[10] 王 怡,白小娟,艾怡霏,等.城市污水處理廠污泥制取生物柴油的試驗(yàn)研究 [J]. 中國給水排水, 2014,(1):14-17.

[11] 李元森.產(chǎn)油脂絲狀真菌的篩選及其產(chǎn)油脂條件的優(yōu)化 [D].濟(jì)南:山東輕工業(yè)學(xué)院, 2009.

[12] Bruland N, Bathe S, Willems A, et al. Pseudorhodoferax soli gen.nov., sp. nov. and Pseudorhodoferax caeni sp. nov., two members of the class Betaproteobacteria belonging to the family Comamonadaceae [J]. International Journal of Systematic &Evolutionary Microbiology, 2009,59(11):2702-2709.

[13] Dong L, Ming H, Liu L, et al. Zhizhongheella caldifontis gen.nov., sp. nov., a novel member of the family Comamonadaceae [J].Antonie van Leeuwenhoek, 2014,105(4):755-761.

[14] Fang W, Li Y, Xue H, et al. Corticibacter populi gen. nov., sp.nov., a new member of the Comamonadaceae, from the bark of Populus euramericana [J]. International Journal of Systematic &Evolutionary Microbiology, 2015,65(10):3333-3338.

[15] Caldwell M E, Allen T D, Lawson P A, et al. Tolumonas osonensis sp. nov., isolated from anoxic freshwater sediment, and emended description of the genus Tolumonas [J]. International Journal of Systematic & Evolutionary Microbiology, 2011,61(11):2659-2663.

[16] Kuang G, Xiao A, Chen Q, et al. Characterization of PB-CS01, A novel photobacterium strain isolated from commercial pork [J].Journal of Animal & Veterinary Advances, 2012,11(23):4292-4296.

[17] Veld G I T, Driessen A J M, Kamp J A F O D, et al. Hydrophobic membrane thickness and lipid-protein interactions of the leucine transport system of Lactococcus lactis [J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 1991,1065(2):203-212.

[18] Contzen M, Moore E R, Blümel S, et al. Hydrogenophaga intermedia sp. nov., a 4-aminobenzenesulfonate degrading organism [J]. Systematic & Applied Microbiology, 2000,23(4):487-493.

[19] Botha A, Kock J L. The distribution and taxonomic value of fatty acids and eicosanoids in the Lipomycetaceae and Dipodascaceae[J]. Antonie van Leeuwenhoek, 1993,63(2):111-123.