宋光同，何吉祥，吳本麗，陳 靜，黃 龍，汪 翔，武 松

克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）隸屬于節(jié)肢動物門（Arthropada）、甲殼綱（Crustacea）、十足目（Decapoda）、爬行亞目（Reptantia）、螯蝦科（cambaridae）、原螯蝦屬（Procambarus），俗稱淡水小龍蝦?？耸显r原產(chǎn)于北美洲，在1929年由日本引入我國江蘇南京地區(qū)。該蝦具有適應(yīng)性廣、繁殖力強(qiáng)、生長快、肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富、抗病力強(qiáng)、適于稻田養(yǎng)殖等特點，廣受國內(nèi)外養(yǎng)殖者和消費者青睞，為我國主要經(jīng)濟(jì)蝦類之一。

2016年，全國小龍蝦養(yǎng)殖總規(guī)模超60萬hm2，總產(chǎn)量達(dá)85.23萬t，且發(fā)展勢頭不減，養(yǎng)殖戶擴(kuò)展養(yǎng)殖熱情依然高漲?，F(xiàn)在對克氏原螯蝦優(yōu)質(zhì)蝦苗需求量與日俱增，而我國至今尚無規(guī)模化苗種繁育場，苗種主要來自野外捕撈、商販?zhǔn)占妥苑弊责B(yǎng)等，優(yōu)質(zhì)苗種生產(chǎn)嚴(yán)重滯后于養(yǎng)殖需求，弱苗、次苗、傷苗充斥市場，直接導(dǎo)致50%以上的養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖失敗，嚴(yán)重影響了龍蝦產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

國內(nèi)外關(guān)于克氏原螯蝦繁殖生物學(xué)的研究報道較多，該蝦性腺發(fā)育、交配、產(chǎn)卵皆不同步［1－8］。 多數(shù)學(xué)者研究認(rèn)為：克氏原螯蝦的交配期為5～9月份，7、8月為交配高峰期，交配后，精子儲存在納精囊中，等待排卵受精；一年產(chǎn)卵1次，存在4、5月和9、10月兩個產(chǎn)卵高峰期，以 9、10 月份為主［6－8］。 也有學(xué)者認(rèn)為極少數(shù)克氏原螯蝦個體在產(chǎn)卵后經(jīng)3～4個月恢復(fù)后再次成熟產(chǎn)卵［9］。關(guān)于克氏原螯蝦生殖系統(tǒng)發(fā)育的分期，主要根據(jù)其卵巢外部特征的周年變化，結(jié)合卵子發(fā)生過程特征，將克氏原螯蝦卵巢發(fā)育分為5～6期［9－13］。但是對克氏原螯蝦性腺發(fā)育過程中卵巢、輸卵管的顯微及超微結(jié)構(gòu)缺乏詳細(xì)研究和介紹。我們采用雌性生殖系統(tǒng)外部特征、組織顯微、超微結(jié)構(gòu)相結(jié)合的方法，對克氏原螯蝦的卵巢顏色和大小、卵子發(fā)生、卵巢壁、輸卵管以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等結(jié)構(gòu)的變化特征進(jìn)行了系統(tǒng)的觀察研究，以期更好地掌握克氏原螯蝦雌性生殖系統(tǒng)發(fā)育的內(nèi)在客觀規(guī)律，為該蝦人工繁育提供理論基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

實驗用克氏原螯蝦均從東至縣大聯(lián)圩農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司養(yǎng)殖池塘采集，自2015年8月至2016年7月采用投放地籠的方式隨機(jī)捕獲樣本蝦，每月采集1～2次，其中繁殖盛期（8～10月份）每月采集2次，其他月份每月采集1次。選取活力強(qiáng)、附肢完整、體質(zhì)量17.52～44.68 g的雌性克氏原螯蝦樣本，每次采集18～25尾，選擇3尾用于石蠟組織切片實驗；并對剩下的樣本蝦（15～22尾）進(jìn)行稱重和解剖觀察，觀察不同季節(jié)克氏原螯蝦卵巢、輸卵管的形態(tài)、大小和顏色，并對解剖出的卵巢稱重，計算卵巢的性腺指數(shù)，性腺指數(shù)（GI）＝100%×卵巢濕重／活體體質(zhì)量。分別于2015年9月26日、2016年1月16日和2016年6月29日，采集雌性樣本蝦各1尾，用于卵巢及左右輸卵管超微結(jié)構(gòu)的觀察實驗。

1.2 實驗方法

1.2.1 石蠟切片 將雌蝦頭胸甲從背面撥開，迅速取出卵巢及左、右輸卵管組織，使用波恩試液固定20 min；再將卵巢、左輸卵管、右輸卵管分開，分別固定于波恩試液中24 h以上；利用脫水機(jī)（JJ－12J），按照75%（4 h）、85%（2 h）、90%（2 h）、95%（1 h）、100%（30 min）、100%（30 min）的酒精梯度做梯度脫水；用體積比為 1∶1的 100%酒精＋二甲苯（5～10 min）和二甲苯Ⅰ（5～10 min）、二甲苯Ⅱ（5～10 min）給樣品做透明；用石蠟Ⅰ（1 h）、石蠟Ⅱ（1 h）、石蠟Ⅲ（1 h）做浸蠟，用包埋機(jī)（JBP5）做石蠟包埋，用切片機(jī)（RM2016）切片，切片厚度為4μm；最后用 H.E染色，用中性樹脂封片；用科研級顯微鏡（Olympus bx53）觀察拍照。

1.2.2 透視電鏡超薄切片 將采集的活體克氏原螯蝦雌蝦帶回實驗室，在4℃左右的低溫環(huán)境中迅速解剖其生殖系統(tǒng)組織，置入預(yù)冷的4%戊二醛固定液中；在4℃下預(yù)固定20 min后，將卵巢、左輸卵管、右輸卵管分開，移入盛有預(yù)冷的4%戊二醛固定液的2 mL離心管中，在4℃下固定過夜。將固定的樣品用緩沖液沖洗數(shù)次，再用1%鋨酸再次固定，脫水，用環(huán)氧樹脂包埋，用超薄切片機(jī)切片，用醋酸鈾檸檬酸鉛進(jìn)行雙重染色，用日立HT－7700型透射電鏡觀察拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 克氏原螯蝦卵巢成熟系數(shù)的周年變化

從圖1～圖2可以看出：在4～6月，克氏原螯蝦的性腺指數(shù)為0.10%～0.13%，為較低水平期；在7～9月，其性腺指數(shù)為0.53%～4.71%，為增長期；在10、11月份，隨著部分蝦產(chǎn)卵，性腺指數(shù)急速下降，僅為0.81%～0.83%；之后，性腺指數(shù)又逐步升高，至次年2月份，形成另一個峰值，達(dá)3.97%；在3～4月份，性腺指數(shù)又急速下降?？耸显r性腺指數(shù)分別在9月份和2月份出現(xiàn)峰值。

圖1 克氏原螯蝦性腺指數(shù)在4～11月的變化

圖2 克氏原螯蝦性腺指數(shù)在10月～翌年5月的變化

2.2 解剖結(jié)構(gòu)及生殖腺組織結(jié)構(gòu)

2.2.1 解剖結(jié)構(gòu) 克氏原螯蝦雌性生殖系統(tǒng)由卵巢和輸卵管組成，卵巢呈“Y”型結(jié)構(gòu)（圖3），位于頭胸甲背側(cè)中央，其前端為胃，上端為心臟，下端為肝胰臟。成熟的卵巢后端伸向頭胸甲與腹節(jié)交界處，前端伸至額劍后緣。在卵巢發(fā)育早期，卵巢呈白色透明狀，體積較小，卵粒小而不易分離；隨著卵巢的發(fā)育，卵巢體積逐漸變大，卵巢不斷向前、后、左右延伸膨脹，卵粒大而易分離；卵巢顏色變化依次為白色透明、白色、黃色、咖啡色、深棕色、黑色。輸卵管分為左右輸卵管，從卵巢兩側(cè)發(fā)出，沿圍心腔外壁向腹側(cè)延伸，最后開口于第3對胸足基部，形成雌性產(chǎn)卵孔。

圖3 克氏原螯蝦雌性生殖系統(tǒng)的解剖結(jié)構(gòu)

2.2.2 卵巢壁 卵巢壁為卵巢外膜，為疏松結(jié)締組織。在卵巢發(fā)育早期，疏松結(jié)締組織較厚，內(nèi)含血管、血竇，分化濾泡細(xì)胞；隨著卵巢發(fā)育，疏松結(jié)締組織逐漸變薄，到卵巢成熟期，僅為薄薄一層；卵巢排卵后，疏松結(jié)締組織又開始增厚（圖4－1～圖4－7）。

2.2.3 卵室 在卵巢發(fā)育早期，在卵巢中央布滿卵室，卵室由外膜和內(nèi)生殖上皮組成，外膜主要由肌層組織組成，內(nèi)生殖上皮分化增殖卵原細(xì)胞。隨著卵原細(xì)胞生長發(fā)育成卵母細(xì)胞，卵室消失，卵母細(xì)胞被濾泡細(xì)胞包圍；排卵后，卵室再次逐漸增多（圖4－1、圖4－7）。

2.2.4 輸卵管 左右輸卵管的外觀解剖結(jié)構(gòu)基本一致，在生殖腺發(fā)育初期，輸卵管管徑小，呈灰白色；隨著生殖腺發(fā)育，管徑逐漸增大，進(jìn)入成熟期，管徑達(dá)到最大，呈乳白色。切片顯示，輸卵管由外膜、基膜和管壁上皮組成。外膜為一層疏松結(jié)締組織，內(nèi)含血管；基膜緊貼管壁上皮外面；管壁上皮為單層柱狀上皮，在發(fā)育初期，外膜較厚，隨著性腺發(fā)育，逐漸變薄。輸卵管內(nèi)含物從無到有，逐漸增多，在發(fā)育中期內(nèi)含物嗜堿性，在發(fā)育后期轉(zhuǎn)為嗜酸性物質(zhì)，同時輸卵管中出現(xiàn)豐富的白色液泡狀物質(zhì)（圖5－8～圖5－14）。

2.3 卵子發(fā)生

根據(jù)克氏原螯蝦卵母細(xì)胞的大小、形狀、染色、核仁數(shù)目、卵黃積累情況，以及卵母細(xì)胞與濾泡細(xì)胞的關(guān)系，將克氏原螯蝦卵子的發(fā)生劃分為卵原細(xì)胞、卵黃合成前卵母細(xì)胞、卵黃合成期卵母細(xì)胞及成熟期卵母細(xì)胞4個時相。

2.3.1 卵原細(xì)胞（增殖期） 卵原細(xì)胞附著于卵室內(nèi)邊緣，多數(shù)近圓形或卵圓形，長徑2.89～6.47μm，短徑1.54～4.06μm；細(xì)胞核大，核質(zhì)著色淺，染色質(zhì)呈絮狀聚集，長徑1.99～4.80μm，短徑 0.88～3.06 μm；核仁較多，多數(shù)沿核膜邊緣分布；少量卵原細(xì)胞較大，染色質(zhì)呈細(xì)線狀。細(xì)胞質(zhì)少，圍繞在細(xì)胞核周圍形成很薄的一層，嗜堿性。卵巢壁疏松結(jié)締組織內(nèi)分化增殖濾泡細(xì)胞（圖4－1）。

2.3.2 卵黃合成前卵母細(xì)胞（小生長期） 卵母細(xì)胞迅速增大，細(xì)胞質(zhì)增多，卵母細(xì)胞近圓形或不規(guī)則形，長徑 59.85～134.32μm，短徑 35.05～93.74μm。細(xì)胞核圓形或卵圓形，長徑20.75～37.22μm，短徑17.42～25.66μm，核質(zhì)內(nèi)充滿絮狀顆粒；核仁8～10個，呈顆粒狀，染色較深，沿核膜邊緣分布。細(xì)胞質(zhì)呈嗜堿性，布滿藍(lán)色顆粒，無卵黃積累。濾泡細(xì)胞開始分割包圍卵母細(xì)胞，濾泡細(xì)胞多呈扁平、卵圓形（圖 4－2）。

2.3.3 卵黃合成期卵母細(xì)胞（大生長期） 根據(jù)卵黃積累、大小、分布情況，將此發(fā)育期分為初期、中期、后期。

初期（大生長期1）：卵母細(xì)胞繼續(xù)增大，卵母細(xì)胞呈不規(guī)則圓形，長徑 115.73～261.88μm，短徑90.02～178.44μm；核卵圓形，長徑22.05～35.27μm，短徑20.54～28.63μm，核質(zhì)內(nèi)充滿絮狀顆粒，核仁8～10個，沿核膜邊緣分布。細(xì)胞膜邊緣開始聚集細(xì)小顆粒狀卵黃，呈嗜酸性，被染成淺紅色，中央出現(xiàn)少量大顆粒卵黃顆粒；細(xì)胞質(zhì)充滿白色空泡；卵母細(xì)胞四周的濾泡細(xì)胞增多，濾泡細(xì)胞呈扁平形、卵圓形、圓形（圖 4－3）。

中期（大生長期2）：卵母細(xì)胞呈不規(guī)則圓形，長徑 187.20～196.22μm，短徑 149.18～183.27 μm；核卵圓形，被染成藍(lán)色，長徑19.48～42.74μm，短徑16.75～35.38μm，核仁6～8個，沿核膜邊緣分布。細(xì)胞質(zhì)嗜酸性，被染成紅色，胞質(zhì)中卵黃顆粒由細(xì)胞膜邊緣向中央擴(kuò)散，粒徑逐漸增大，最大達(dá)2.80μm；細(xì)胞質(zhì)充滿白色空泡，在細(xì)胞核膜周邊可見藍(lán)色核物質(zhì)；濾泡細(xì)胞呈近圓形（圖4－4）。

后期（大生長期3）：卵母細(xì)胞呈卵圓形，長徑287.54μm，短徑207.9μm，細(xì)胞核開始皺縮，細(xì)胞質(zhì)嗜酸性，在細(xì)胞質(zhì)中充滿大顆粒狀卵黃顆粒，粒徑最大達(dá)3.5μm；細(xì)胞核外圍周邊染色較淺，細(xì)胞質(zhì)充滿白色空泡。濾泡細(xì)胞呈圓形（圖4－5）。

圖4 克氏原螯蝦卵巢、卵巢壁和卵室的組織結(jié)構(gòu)

圖5 克氏原螯蝦輸卵管的組織結(jié)構(gòu)

2.3.4 成熟期卵母細(xì)胞 卵細(xì)胞近圓形，直徑252.6 μm。細(xì)胞核消失，細(xì)胞質(zhì)嗜酸性，細(xì)胞質(zhì)中充滿大量大顆粒卵黃，粒徑最大達(dá)6.70μm。卵母細(xì)胞與濾泡細(xì)胞已發(fā)生分離（圖4－6）。

2.4 卵巢發(fā)育分期

根據(jù)克氏原螯蝦卵巢的外形、大小與顏色，卵子發(fā)生時相及卵巢壁、輸卵管的結(jié)構(gòu)特征，可將克氏原螯蝦卵巢發(fā)育期分為5個發(fā)育期。

2.4.1 Ⅰ期 以卵原細(xì)胞為主要時相。解剖結(jié)構(gòu)觀察，卵巢呈白色透明狀，卵粒細(xì)小，隱約可見，不可分離，附著在卵巢膜上。切片觀察，卵巢內(nèi)布滿卵室，邊緣上分化增殖眾多卵原細(xì)胞，為卵原細(xì)胞增殖中心；卵巢壁厚度10.62～31.2μm；輸卵管的外膜疏松結(jié)締組織較厚，內(nèi)含血管；管壁上皮為單層柱狀上皮，上皮細(xì)胞呈卵圓形，較粗壯，向輸卵管內(nèi)陷彎曲（圖4－1、圖4－8）。 每年12月至翌年3月份，以Ⅰ期卵巢為主，部分小規(guī)格紅殼蝦卵巢處于Ⅳ期、Ⅴ期。

2.4.2 Ⅱ期 以卵黃合成前卵母細(xì)胞為主要時相。解剖結(jié)構(gòu)觀察，卵巢呈白色，卵巢明顯變大，卵粒細(xì)小可見，不可分離，平均卵徑0.18～0.48 mm。切片觀察，卵巢內(nèi)布滿卵黃合成前卵母細(xì)胞，濾泡細(xì)胞開始分割包圍卵母細(xì)胞；卵巢中有少量卵原細(xì)胞；存在退化的卵母細(xì)胞。卵巢壁厚8.20～25.52μm；輸卵管管壁單層柱狀上皮變細(xì)，彎曲度變?。▓D4－2、圖4－9）。每年4、5月以Ⅱ期卵巢為主，部分小規(guī)格個體卵巢處于Ⅰ、Ⅴ期。

2.4.3 Ⅲ期 為卵黃合成期（大生長期）。根據(jù)卵巢的顏色、大小及卵黃顆粒的積累、大小、分布等情況，將該發(fā)育期分為3個時期。

Ⅲ期早期：解剖結(jié)構(gòu)觀察，卵巢呈黃色，卵巢卵?？煞直妫圆豢煞蛛x；卵徑0.5～1.2 mm。切片觀察，卵巢內(nèi)以大生長期1卵母細(xì)胞為主，存在1～2個小生長期卵母細(xì)胞；卵巢壁厚4.36～19.36μm；輸卵管管壁單層柱狀上皮進(jìn)一步變細(xì)，彎曲度進(jìn)一步變小，輸卵管內(nèi)開始分泌少量嗜堿性物質(zhì)（圖4－3、圖4－10）。每年6、7月以Ⅲ期早期卵巢為主，部分個體卵巢處于Ⅱ期。

Ⅲ期中期：解剖結(jié)構(gòu)觀察，卵巢呈咖啡色，卵巢卵粒可分辨，可分離，卵徑1.2～1.5 mm。卵巢內(nèi)以大生長期2卵母細(xì)胞為主，卵母細(xì)胞周圍濾泡細(xì)胞增多，濾泡細(xì)胞核由扁平狀變?yōu)槁褕A形，存在1～2個大生長期1卵母細(xì)胞；卵巢壁厚4.17～13.77μm；輸卵管外膜變薄，管壁單層柱狀上皮粗壯，彎曲度增大，輸卵管內(nèi)分泌嗜堿性物質(zhì)（圖4－4、圖4－11）。每年8月以Ⅲ期中期卵巢為主，部分規(guī)格較小的個體卵巢處于Ⅱ期、Ⅲ期早期。

Ⅲ期晚期：解剖結(jié)構(gòu)觀察，卵巢呈深褐色，卵?？煞直妫煞蛛x，卵徑1.5～1.8 mm。卵巢內(nèi)以大生長期3卵母細(xì)胞為主。卵巢壁厚4.92～27.83μm；輸卵管的外膜疏松結(jié)締組織進(jìn)一步變薄，管壁單層柱狀上皮粗壯，輸卵管內(nèi)開始分泌少量嗜酸性物質(zhì)（圖4－5、圖4－12）。該發(fā)育期主要出現(xiàn)在9月上中旬，但在9月上中旬部分規(guī)格較小的個體卵巢處于Ⅲ期早、中期，也有部分較大個體卵巢發(fā)育達(dá)Ⅳ期。

2.4.4 Ⅳ期 以成熟期卵母細(xì)胞為時相。卵巢幾乎充滿整個頭胸甲，呈黑色，卵粒飽滿均勻，挑破卵膜后卵粒即可分離，卵徑1.8～2.0 mm。切片觀察，以成熟期卵母細(xì)胞為主，濾泡細(xì)胞和卵母細(xì)胞已分離。卵巢壁極薄，為2.57μm；輸卵管內(nèi)分泌大量嗜酸性物質(zhì)，出現(xiàn)大量液泡狀物質(zhì)，準(zhǔn)備排卵（圖4－7、圖4－13）；9月下旬～10月上中旬以Ⅳ期卵巢為主，也有部分個體處于Ⅲ期、Ⅴ期卵巢。

2.4.5 Ⅴ期 為產(chǎn)后恢復(fù)期。此期卵巢呈血紅色，卵巢體積縮小，卵巢內(nèi)只有殘存的少量黃色退化卵粒。切片觀察，卵巢僅剩排空的濾泡腔空泡和正在退化的卵母細(xì)胞，卵巢壁厚度5.18～10.45μm；輸卵管內(nèi)分泌的酸性物質(zhì)開始分解擴(kuò)散（圖4－8、圖4－14）。在11月份以Ⅴ期卵巢為主，部分規(guī)格較小個體處于Ⅳ期卵巢。

2.5 克氏原螯蝦雌性生殖系統(tǒng)的超微結(jié)構(gòu)

2016年1月26日：樣本卵巢呈渾白色，超微結(jié)構(gòu)觀察，卵質(zhì)中含有豐富的塊狀肌層組織（圖6－15），還含有少量管狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、環(huán)狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，內(nèi)含線粒體（圖6－16、圖6－17）。左輸卵管含有豐富的管狀、環(huán)形滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，少量線粒體和環(huán)狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，發(fā)現(xiàn)部分退化的線粒體（圖 6－18、圖 6－19）。右輸卵管含有環(huán)狀、管狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，也發(fā)現(xiàn)退化的線粒體（圖 6－20）。

2016年6月26日：樣本卵巢呈咖啡色，超微結(jié)構(gòu)觀察，卵質(zhì)中積累了大量呈囊泡狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，分布較多致密小顆粒物質(zhì)，并逐漸向囊泡狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)積聚，并越積越多，使整個滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)演變成均勻致密、近球形的具膜大卵黃粒，卵質(zhì)充滿卵黃顆粒（圖6－21）；卵質(zhì)中多數(shù)線粒體脊斷裂、脫落，部分線粒體與囊泡狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相互融合（圖6－22）。濾泡細(xì)胞質(zhì)中含有豐富的線粒體和少量囊泡狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，在靠近卵母細(xì)胞一邊，可見排列整齊的長泡狀結(jié)構(gòu)（圖6－23）。左輸卵管含有豐富的紋理狀結(jié)構(gòu)、不規(guī)則泡狀結(jié)構(gòu)及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖6－24、圖6－25）；右輸卵管中含有軟管結(jié)構(gòu)，軟管間含有豐富的線粒體、短管狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖6－26）。

2015年9月26日：樣本卵巢呈黑色，超微結(jié)構(gòu)觀察，卵質(zhì)中含量豐富的線粒體、管狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、空泡狀脂滴以及大的卵黃顆粒，可見高爾基體（圖6－27～圖6－29）；左輸卵管含有豐富的肌層組織（圖6－30）；右輸卵管含有豐富的管狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（圖6－31）。

3 討論

3.1 關(guān)于卵巢、輸卵管的結(jié)構(gòu)特點

多數(shù)蝦類卵巢分為左右兩葉，如日本新糠蝦卵巢呈“H” 型［14］；羅氏沼蝦卵巢左右兩葉呈桑椹狀［15］；哈氏仿對蝦卵巢分為左右兩葉，在前端第一腹節(jié)處愈合［16］；脊尾對蝦卵巢呈菱形［17］；粗糙對蝦卵巢分成對稱的左右兩葉，相互貼近，部分愈合［18］；黑斑口蝦蛄卵巢分為兩葉，左右對稱，基本愈合［19］。克氏原螯蝦卵巢分為3葉，呈“Y”型結(jié)構(gòu)?？耸显r卵巢壁疏松結(jié)締組織內(nèi)含血管、血竇，與營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣運輸有關(guān)，與中華絨螯蟹［20］、Penaeus setiferus［21］等相同；而粗糙對蝦［19］、羅氏沼蝦［15］的疏松結(jié)締組織中不含血管、血竇。克氏原螯蝦的疏松結(jié)締組織分化濾泡細(xì)胞，卵室內(nèi)生殖上皮分化增殖卵原細(xì)胞；而中華絨螯蟹［20］、Penaeus setiferus［21］、南美白對蝦［22］等卵巢壁上的內(nèi)生殖上皮同時分化生殖卵原細(xì)胞和濾泡細(xì)胞。

在克氏原螯蝦卵巢成熟期，輸卵管內(nèi)分泌物逐漸由嗜堿性變?yōu)槭人嵝?，并在輸卵管?nèi)含有大量白色液泡狀物質(zhì)。其嗜酸性物質(zhì)和白色液泡狀物質(zhì)是否與排卵有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。 鄧道貴［18］、King［21］皆提到輸卵管中分泌一種物質(zhì)，有利于卵子排出。

圖6 克氏原螯蝦卵巢和輸卵管的超微結(jié)構(gòu)

3.2 關(guān)于卵子發(fā)生問題

目前，多數(shù)學(xué)者根據(jù)蝦類卵細(xì)胞的大小、生長、遷移以及染色、卵黃積累等情況，進(jìn)行卵子發(fā)生期劃分，例如栗志國等［17］將脊尾白蝦卵子的發(fā)生劃分為卵原細(xì)胞、卵黃合成前期卵母細(xì)胞、內(nèi)源性卵黃合成期卵母細(xì)胞、外源性卵黃合成期卵母細(xì)胞及成熟期卵母細(xì)胞5個時期；王春琳等［19］將黑斑口蝦蛄的卵細(xì)胞的發(fā)育分為卵原細(xì)胞期、卵黃形成前期卵母細(xì)胞、卵黃形成期卵母細(xì)胞、成熟期卵細(xì)胞四個時期；上官步敏等［23］將鋸緣青蟹的卵子發(fā)生分為卵原細(xì)胞、卵黃發(fā)生前期卵母細(xì)胞、卵黃發(fā)生期卵母細(xì)胞三個時期；洪水根等［24］將長毛對蝦的卵子發(fā)生劃分為卵原細(xì)胞、卵黃發(fā)生前卵母細(xì)胞和卵黃發(fā)生期卵母細(xì)胞三個時期；薛魯征等［25］將中華絨螯蟹的卵子發(fā)生分為卵原細(xì)胞期、初級卵母細(xì)胞期、成熟前期和成熟期。本文結(jié)合上述的卵子發(fā)生劃分方法，根據(jù)克氏原螯蝦卵母細(xì)胞大小、形狀、染色、核仁數(shù)目、卵黃的積累情況，以及卵母細(xì)胞與濾泡細(xì)胞的關(guān)系，將克氏原螯蝦卵子的發(fā)生劃分為卵原細(xì)胞、卵黃合成前卵母細(xì)胞、卵黃合成期卵母細(xì)胞及成熟期卵母細(xì)胞4個時相。其中，根據(jù)卵黃積累、大小、分布情況，將卵黃合成期卵母細(xì)胞分為初期、中期、后期。

3.3 關(guān)于卵巢發(fā)育分期問題

蝦類卵巢分期，主要依據(jù)卵巢大小、顏色、成熟系數(shù)以及內(nèi)部組織學(xué)特征。如鄭忠明等［16］將哈氏仿對蝦的卵巢發(fā)育分為形成期、小生長期、大生長期前期、大生長期后期、成熟期和恢復(fù)期6個時期；栗志國等［17］將脊尾白蝦的卵巢發(fā)育分為增殖期、小生長期、大生長期、成熟期及產(chǎn)后恢復(fù)期；上官步敏等［23］將鋸緣青蟹的卵巢發(fā)育分為未發(fā)育期、發(fā)育早期、發(fā)育期、將成熟期、成熟期和排卵后期6個時期；顏素芬等［22］將南美白對蝦的卵巢發(fā)育分為增殖期、小生長期、大生長期早期、將成熟期、成熟期和恢復(fù)期6個時期；薛魯征［25］將中華絨螯蟹的卵巢發(fā)育分為5期。本文根據(jù)克氏原螯蝦卵巢的外形、大小與顏色，卵子發(fā)生時相以及卵巢壁、輸卵管的結(jié)構(gòu)特征，將克氏原螯蝦的卵巢發(fā)育期分為5個時期：Ⅰ期、Ⅱ期（小生長期）、Ⅲ期（大生長期）、Ⅳ期（成熟期）和Ⅴ期（產(chǎn)后恢復(fù)期），其中根據(jù)卵黃的積累情況，將Ⅲ期（大生長期）又分為早期（大生長期1）、中期（大生長期2）、后期（大生長期3）。在7～9月份，隨著克氏原螯蝦交配，性腺發(fā)育加快，卵巢內(nèi)卵黃合成旺盛，卵黃逐漸增多，交配行為是否是促進(jìn)性腺加速發(fā)育的一個刺激因素，需要進(jìn)一步研究。結(jié)合卵巢的顏色及卵母細(xì)胞的特征，本研究認(rèn)為，卵巢呈黑色，卵黃粒徑大，細(xì)胞核消失，卵母細(xì)胞與濾泡細(xì)胞分離可作為克氏原螯蝦成熟的標(biāo)志。

3.4 關(guān)于克氏原螯蝦雌性生殖系統(tǒng)的超微結(jié)構(gòu)

本文對克氏原螯蝦雌性生殖系統(tǒng)的超微結(jié)構(gòu)觀察研究表明：在1月份，卵質(zhì)布滿肌層組織結(jié)構(gòu)，含有少量滑面、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體，屬于卵巢發(fā)育緩慢期；在6月份，克氏原螯蝦卵巢含有大量囊泡狀滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和致密小顆粒物質(zhì)，線粒體正在相互融合、結(jié)合，合成大量小顆粒卵黃，屬于卵巢快速發(fā)育階段；在9月底，卵質(zhì)中含量豐富的線粒體、管狀粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、空泡狀脂滴以及大的卵黃顆粒，可見高爾基體，卵巢發(fā)育接近成熟，卵黃合成基本完成。6月份，在濾泡細(xì)胞周邊可見排列整齊的長泡狀結(jié)構(gòu)，可能與濾泡細(xì)胞向卵母細(xì)胞輸送營養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)；在1月份、9月份沒有觀察到此結(jié)構(gòu)。

3.5 關(guān)于克氏原螯蝦的產(chǎn)卵問題

克氏原螯蝦卵巢成熟系數(shù)周年變化表明，克氏原螯蝦的性腺指數(shù)最高出現(xiàn)在9月份和2月份，這與安徽地區(qū)克氏原螯蝦分別在10月和4月大量抱卵、抱仔蝦基本相符。10月份克氏原螯蝦產(chǎn)卵后，進(jìn)入冬季低溫期，卵巢性腺發(fā)育緩慢，至4、5月份個體再次產(chǎn)卵的可能性不大。而克氏原螯蝦的性腺指數(shù)在2月份再次出現(xiàn)峰值，可能與采集樣本體質(zhì)量較小，性腺發(fā)育延后，又恰逢低溫期，性腺發(fā)育緩慢有關(guān)。對卵子發(fā)生時相的研究表明，每個個體卵巢中卵子的卵母細(xì)胞的發(fā)育基本一致，沒有發(fā)現(xiàn)大量處于不同發(fā)育階段的卵母細(xì)胞，僅有少量發(fā)育之后的卵母細(xì)胞，也在卵巢發(fā)育過程中逐漸退化。因此，本研究認(rèn)為，克氏原螯蝦個體一年僅產(chǎn)卵1次，一年形成2個產(chǎn)卵高峰，主要由個體性腺發(fā)育不同步導(dǎo)致。這與河蟹［20］、南美白對蝦［22］、青蝦［26］等多次產(chǎn)卵類型不同。

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