韓文祺， 畢楊輝， 王蕓姣， 李若菲， 江 瑛

(首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 北京 100069)

原發(fā)性肝癌惡性度高，預(yù)后差，位居惡性腫瘤死亡率的第2位，嚴(yán)重威脅人類健康[1]。關(guān)于肝癌發(fā)生的細(xì)胞學(xué)機(jī)制至今仍不十分明確，肝癌的干細(xì)胞起源學(xué)說(shuō)認(rèn)為肝癌源于肝干細(xì)胞(liver stem cells)的“成熟受阻”異常分化[2]。肝前體細(xì)胞(hepatic progenitor cells)是一類具有分裂增殖能力和多向分化潛能的肝臟原始細(xì)胞，主要包括肝卵圓細(xì)胞、小肝細(xì)胞、膽管前體細(xì)胞及膽管周的肝前體細(xì)胞等，屬于肝臟的成體干細(xì)胞。越來(lái)越多的研究表明，肝前體細(xì)胞分化過(guò)程的異?？赡苁歉伟┌l(fā)生中的重要事件[2-5]。肝卵圓細(xì)胞是存在于大鼠成體肝臟的一類肝前體細(xì)胞群, 位于終末膽管樹Hering管附近，具有分裂增殖和向肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞的雙向分化潛能等干細(xì)胞特性，被認(rèn)為是存在于大鼠肝臟的一類成體肝前體細(xì)胞/干細(xì)胞群[5-6]。

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)是STAT家族中的重要成員，是多個(gè)致癌性酪氨酸激酶信號(hào)通路的匯聚點(diǎn)，在多種腫瘤組織中被持續(xù)激活，并參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移[7]。研究表明STAT3的激活可以促進(jìn)肝癌發(fā)生和腫瘤血管形成，與肝癌的進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)。最近的研究發(fā)現(xiàn)，STAT3可能通過(guò)調(diào)控葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(glucose transporter，GLUT)1、丙酮酸脫氫酶和己糖激酶2的表達(dá)促進(jìn)乳腺癌等腫瘤細(xì)胞的Warburg效應(yīng)[8-9]。然而，STAT3促進(jìn)肝癌的發(fā)生是否與Warburg效應(yīng)有關(guān)，是否與肝前體細(xì)胞有關(guān)，至今尚不清楚。為此，本研究利用N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG)和低濃度過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)誘導(dǎo)大鼠肝卵圓細(xì)胞WB-F344惡性轉(zhuǎn)化[10-11]，擬探討STAT3在大鼠肝卵圓細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中的作用和機(jī)制。

材 料 和 方 法

1細(xì)胞及主要試劑

大鼠肝卵圓細(xì)胞WB-F344系首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院尤紅教授饋贈(zèng)。兔抗鼠GLUT2多克隆抗體購(gòu)自Bioworld；兔抗鼠甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)抗體購(gòu)自Biomedicine；小鼠抗大鼠STAT3、兔抗鼠p-STAT3、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和β-actin多克隆抗體均購(gòu)自Cell Signaling Technology；Stattic購(gòu)自Selleck。

2主要方法

2.1細(xì)胞轉(zhuǎn)化 WB-F344細(xì)胞用含10%胎牛血清、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素的DMEM-F12培養(yǎng)基在37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，每2～3 d傳代。細(xì)胞依據(jù)處理方式不同分為WB-F344細(xì)胞對(duì)照(control)組、模型(model)組和模型+stattic干預(yù)(model+stattic)組。模型組細(xì)胞先用3 mg/L的MNNG刺激24 h，之后采用濃度為7×10-7mol/L的H2O2持續(xù)刺激12 h，連續(xù)21 d[10-11]。模型+stattic干預(yù)組在模型成功后加入STAT3 Y705位點(diǎn)特異抑制劑stattic(終濃度為4.5×10-6mol/L)，刺激細(xì)胞48 h。

2.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和非整倍體 各組細(xì)胞用胰酶消化為細(xì)胞懸液，密度為1×109/L。300×g離心5 min，緩慢加入200 μL 70%冰乙醇，輕輕震蕩混勻。-20 ℃過(guò)夜。300×g離心5 min。之后加入200 μL PI染液，室溫避光孵育30 min，用Muse細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)(Merck)。以二倍體細(xì)胞DNA含量做內(nèi)標(biāo), 確定DNA指數(shù)(DNA index，DI)值，以DI>2.04計(jì)為非整倍體細(xì)胞[11-12]。細(xì)胞增殖活性以S期細(xì)胞比率(S-phase fraction, SPF)評(píng)價(jià)，SPF (%)=S/(G0/G1+S+G2/M) ×100%；細(xì)胞增殖指數(shù)(proliferation index, PI) (%)=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100%。

2.3軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn) 按照軟瓊脂集落形成試劑盒(Cell Biolabs)說(shuō)明書配制基礎(chǔ)瓊脂基質(zhì)液和瓊脂基質(zhì)液。先將基礎(chǔ)瓊脂基質(zhì)液鋪到96孔板中，置于4 ℃ 30 min待其凝固。將細(xì)胞密度調(diào)整為1×109/L，與瓊脂基質(zhì)液混合，每孔75 μL接種于凝固的基礎(chǔ)瓊脂基質(zhì)層上，置于4 ℃ 20 min待其凝固。每孔加入50 μL完全培養(yǎng)基，置于孵箱內(nèi)培養(yǎng)10 d，在顯微鏡下觀察集落形成情況。之后每孔加入125 μL基質(zhì)溶解液和10 μL MTT溶液，吹打混勻，置于孵箱孵育4 h。每孔加入100 μL 清洗液，室溫輕輕搖動(dòng)24 h，吹打混勻，在570 nm處檢測(cè)吸光度(A)。

2.4檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基葡糖濃度 按照葡萄糖測(cè)定試劑盒(普利萊)說(shuō)明書配制工作液及制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。將細(xì)胞培養(yǎng)液5 μL和195 μL工作液混合，室溫孵育30 min，測(cè)定570 nm吸光度值。

2.5檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基乳酸濃度 按照乳酸測(cè)試盒(南京建成)說(shuō)明書配制工作液及制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。將細(xì)胞培養(yǎng)液與工作液按說(shuō)明書比例混合，37 ℃水浴10 min，加入終止液。在530 nm處檢測(cè)吸光度值。

2.6WST-1法檢測(cè)細(xì)胞活力 將各組細(xì)胞密度調(diào)整為5×107/L，接種于96孔板中，培養(yǎng)48 h。加入WST-1試劑孵育4 h，在450 nm處檢測(cè)吸光度。

2.7活細(xì)胞計(jì)數(shù) 將細(xì)胞密度調(diào)整為7×107/L，接種于6孔板中，培養(yǎng)24 h。無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓12 h，再以完全培養(yǎng)基培養(yǎng)72 h。干預(yù)組加入濃度為4.5×10-6mol/L的stattic，培養(yǎng)72 h。胰酶消化，臺(tái)盼藍(lán)染色，滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，在顯微鏡下進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.8Western blot實(shí)驗(yàn) 用含蛋白酶抑制劑的裂解液裂解細(xì)胞蛋白，按 30～50 μg 的蛋白量加樣，經(jīng)SDS-PAGE后，低溫恒壓電轉(zhuǎn)至 PVDF 膜上，5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))脫脂奶粉封閉 1 h，I 抗 4 ℃孵育過(guò)夜, 加入山羊抗兔 HRP標(biāo)記的 II 抗(ZSGB-Bio), 室溫下孵育1 h，ECL化學(xué)發(fā)光，ImageJ軟件進(jìn)行定量分析。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。組間均數(shù)比較采用 Student’st檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1復(fù)制肝卵圓細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化模型

誘癌劑MNNG和小劑量的促癌劑H2O2持續(xù)作用于大鼠肝卵圓細(xì)胞21 d后，軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞克隆形成率增加(P<0.05)，見圖1A。這表明轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞擁有了非停泊依賴性生長(zhǎng)的特性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果可見，模型組肝卵圓細(xì)胞S期比例顯著增加(P<0.01)，非整倍體細(xì)胞顯著增多(P<0.01)，見圖1B～D。Western blot結(jié)果可見，與對(duì)照組比較，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞AFP表達(dá)水平升高(P<0.05)，見圖1E。上述結(jié)果表明轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞已具備惡性表型。

Figure 1. The colony formation (A), cell cycle distribution (B, C)， aneuploidy (D) and AFP expression (E) in transformed WB-F344 cells. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖1惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞克隆形成、細(xì)胞周期、非整倍體和AFP表達(dá)水平的變化

2惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞糖代謝的變化

利用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)肝卵圓細(xì)胞培養(yǎng)基中的葡萄糖水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞消耗更多的葡萄糖(P<0.05)，見圖2A。利用比色法對(duì)肝卵圓細(xì)胞培養(yǎng)基中的乳酸水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞產(chǎn)生的乳酸顯著增多(P<0.01)，見圖2B。這些結(jié)果提示惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞Warburg效應(yīng)的增強(qiáng)。

Figure 2. Warburg effect in transformed WB-F344 cells. A: glucose comsumption; B: lactate production. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖2惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞Warburg效應(yīng)

3GLUT2在惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞中表達(dá)水平

Western blot結(jié)果可見，與對(duì)照組比較，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞中GLUT2蛋白表達(dá)顯著增高(P<0.01)，見圖3。

Figure 3. GLUT2 level in transformed WB-F344 cells. Mean±SD.n=3.**P<0.01vscontrol group.

圖3惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞GLUT2的表達(dá)水平

4STAT3在惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞中活化水平

Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞Y705位點(diǎn)磷酸化的STAT3蛋白水平明顯升高，表明惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞STAT3活化顯著增強(qiáng)(P<0.01)，見圖4。

Figure 4. The activation of STAT3 in transformed WB-F344 cells. Mean±SD.n=3.**P<0.01vscontrol group.

圖4惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞STAT3活化水平

5惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞增殖能力的變化

細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞S期細(xì)胞比例和細(xì)胞增殖指數(shù)均顯著增高(P<0.01)，見表1。WST-1實(shí)驗(yàn)表明，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞活力明顯增強(qiáng)(P<0.01)，見圖5A；活細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞數(shù)量明顯增多(P<0.01)，見圖5B；Western blot結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞的PCNA表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)，見圖5C。這些結(jié)果表明惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞增殖能力的增強(qiáng)。

表1各組細(xì)胞S期細(xì)胞比例和增殖指數(shù)

Table 1. S-phase fraction (SPF) and proliferation index (PI) in different groups (%. Mean±SD.n=3)

IndexControlModelModel+statticSPF13．82±0．8926．59±1．82??16．75±1．94##PI35．96±0．5152．24±1．42??33．33±2．27##

**P<0.01vscontrol group；##P<0.01vsmodel group.

Figure 5. The viability and proliferation of transformed WB-F344 cells. A: WST-1 assay; B: viable cell counting; C: PCNA expression detected by Western blot. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsgroup.

圖5惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞活力和增殖能力

6STAT3上調(diào)GLUT2表達(dá)，增強(qiáng)Warburg效應(yīng)和細(xì)胞增殖能力，并促進(jìn)肝卵圓細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化

與模型組比較，STAT3的抑制劑stattic可明顯抑制惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞克隆形成(P<0.01)，促使G0/G1期細(xì)胞增多(P<0.01)，S期細(xì)胞減少(P<0.01)，非整倍體細(xì)胞減少(P<0.01)，AFP表達(dá)降低(P<0.05)，見圖6。這表明STAT3可促進(jìn)MNNG和H2O2誘導(dǎo)的WB-F344肝卵圓細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

與模型組比較，stattic減少惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞葡萄糖的消耗(P<0.05)及乳酸的產(chǎn)生(P<0.01)，抑制GLUT2的表達(dá)水平(P<0.01)，見圖7。這提示STAT3可能通過(guò)上調(diào)GLUT2促進(jìn)MNNG和H2O2誘導(dǎo)的WB-F344肝卵圓細(xì)胞的Warburg效應(yīng)。

Figure 6. Effects of stattic， an inhibitor of STAT3, on the activation of STAT3 (A), the colony formation (B), the cell cycle distribution (C), the DNA aneuploidy (D) and the AFP expression (E) in transformed WB-F344 cells. Mean±SD.n=3.#P<0.05,##P<0.01vsmodel group.

圖6STAT3促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞克隆形成和非整倍體細(xì)胞增多

Figure 7. The change of Warburg effect (A: glucose comsumption； B: lactate production) and GLUT2 level (C) in transformed WB-F344 cells following stattic treatment. Mean±SD.n=3.#P<0.05,##P<0.01vsmodel group.

圖7STAT3促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞Warburg效應(yīng)和GLUT2蛋白的表達(dá)

與模型組比較，Stattic抑制惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞S期細(xì)胞比率和細(xì)胞增殖指數(shù)(P<0.01)，見表1；抑制PCNA蛋白的表達(dá)(P<0.05)和細(xì)胞活力(P<0.05)，見圖8。這表明STAT3促進(jìn)MNNG和H2O2誘導(dǎo)的WB-F344肝卵圓細(xì)胞的增殖。

討 論

肝癌的發(fā)生與肝干細(xì)胞發(fā)生基因突變、分化受阻形成腫瘤起始細(xì)胞有關(guān)[2, 4-6]。肝前體細(xì)胞/卵圓細(xì)胞是一個(gè)異質(zhì)性的細(xì)胞群體，具有分裂增殖及多向分化潛能等干細(xì)胞特性。研究表明，致癌因素可導(dǎo)致肝卵圓細(xì)胞活化增殖和分化成熟障礙，形成無(wú)限克隆增殖的“癌細(xì)胞樣”特征，導(dǎo)致肝癌發(fā)生[2,4-6]。WB-F344細(xì)胞株是從成年雄性Fisher大鼠肝臟分離出的一類肝上皮細(xì)胞，其表型特征和分子標(biāo)記與卵圓細(xì)胞類似，具有分化為肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞的潛能，被認(rèn)為是具有肝上皮細(xì)胞特征的肝源性干細(xì)胞，常作為體外實(shí)驗(yàn)研究中大鼠卵圓細(xì)胞的代表，也作為肝癌和肝臟損傷修復(fù)研究中肝干細(xì)胞/肝前體細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚13-14]。

Figure 8. STAT3 promoted the viability and proliferation of transformed WB-F344 cells. A: WST-1 assay; B: viable cell counting; C: PCNA expression detected by Western blot. Mean±SD.n=3.#P<0.05,##P<0.01vsmodel group.

圖8STAT3促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞活力和增殖能力

MNNG是一種在環(huán)境中廣泛存在的化學(xué)誘變劑和致癌劑，是誘導(dǎo)細(xì)胞惡變的常用化合物，其主要通過(guò)與DNA和蛋白形成加合物，導(dǎo)致基因組的不穩(wěn)定和DNA鏈上的堿基發(fā)生烷化突變，發(fā)揮其致癌作用?；钚匝醮?reactive oxygen species，ROS)作為腫瘤微環(huán)境的重要外源性影響因素之一，參與了腫瘤發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段，在決定細(xì)胞分化方向上發(fā)揮了一定的作用，ROS的持續(xù)存在可誘導(dǎo)肝前體細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。本研究首先用MNNG對(duì)WB-F344細(xì)胞DNA造成損傷，之后以低濃度的過(guò)氧化氫連續(xù)刺激WB-F344細(xì)胞21 d，復(fù)制大鼠肝卵圓細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化模型[10-11]。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)化細(xì)胞接觸性抑制消失，表現(xiàn)為非停泊依賴性生長(zhǎng)特性、非整倍體細(xì)胞數(shù)量增多和AFP表達(dá)增高等轉(zhuǎn)化細(xì)胞的惡性表型。

腫瘤細(xì)胞能量代謝的重要特征之一就是Warburg效應(yīng)，即在氧含量充足的條件下其葡萄糖代謝仍以糖酵解為主要的供能方式[15]。通過(guò)Warburg效應(yīng)不僅產(chǎn)生ATP的速度比氧化磷酸化要快，而且可代謝更多的葡萄糖，從而促進(jìn)核酸、氨基酸和脂肪酸等生物大分子的合成，以滿足腫瘤細(xì)胞對(duì)能量、生物合成和氧化還原的需求[16]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞葡萄糖的消耗和乳酸產(chǎn)生均增多，表明Warburg效應(yīng)增強(qiáng)。

腫瘤細(xì)胞能量代謝方式的轉(zhuǎn)換要求腫瘤細(xì)胞攝取更多的葡萄糖以滿足生物合成的需求，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白作為糖跨過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞的載體，在惡性腫瘤細(xì)胞糖酵解增強(qiáng)的過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用[17]。目前發(fā)現(xiàn)人類GLUT家族共有14個(gè)成員，其分布具有組織特異性[18]。新近的研究發(fā)現(xiàn)肝癌組織GLUT2的mRNA表達(dá)水平與酒精相關(guān)性肝癌和丙型肝炎相關(guān)性肝癌的生存期呈明顯正相關(guān)[19]。而GLUT2在肝癌組織的表達(dá)異常，可能與氟18-脫氧葡萄糖(fluorine-18 fluorodeoxyglucose，18FDG)-正電子發(fā)射斷層顯像/X線計(jì)算機(jī)體層成像(positron emission tomography/computed tomography，PET/CT) 檢測(cè)在肝癌診斷的敏感性降低有關(guān)[20-21]。18FDG 是一種葡萄糖類似物，主要由GLUT1和GLUT3轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤細(xì)胞內(nèi)，通常將18FDG的高低作為判斷局部代謝活性的因素[22]。然而，肝臟腫瘤對(duì)于18FDG的敏感性低于其它腫瘤，提示在肝癌中GLUT家族成員的表達(dá)與其它腫瘤存在差異性[19,23]。Kim等[19]分析372名肝癌患者18FDG和GLUTs mRNA表達(dá)水平及其與腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在肝癌中GLUT2 mRNA的表達(dá)升高，并且要高于GLUT1和GLUT3，認(rèn)為GLUT2可作為肝癌潛在的診斷標(biāo)志物和預(yù)后標(biāo)志物。Paudyal 等[20]通過(guò)對(duì)31位肝癌病人的18FDG-PET/CT檢測(cè)，也發(fā)現(xiàn)肝癌中18FDG的攝取與GLUT2的表達(dá)顯著相關(guān)。但是在肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中GLUT2的作用和機(jī)制至今還不清楚。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞不僅Warburg效應(yīng)增強(qiáng)還伴隨著GLUT2蛋白的表達(dá)升高，提示GLUT2可能與轉(zhuǎn)化細(xì)胞的糖代謝異常有關(guān)。

STAT3是一種膜受體介導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄因子，STAT3的異常激活在腫瘤細(xì)胞增殖、代謝、侵襲和抗凋亡等方面具有重要作用[7，24-25]。STAT3抑制劑stattic可通過(guò)靶向作用于STAT3的SH2區(qū)，阻止其與上游激酶的結(jié)合，從而抑制STAT3的激活和核轉(zhuǎn)位[26]。研究證實(shí)STAT3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，抑制肝癌細(xì)胞的凋亡；STAT3異?；罨母伟┗颊哳A(yù)后不良[24]。最近有研究報(bào)道STAT3的活化可上調(diào)乳腺癌細(xì)胞糖酵解通路中的關(guān)鍵酶己糖激酶2的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)Warburg效應(yīng)[8]。STAT3的活化還可通過(guò)HIF1α調(diào)節(jié)GLUT1的表達(dá)以滿足腫瘤細(xì)胞消耗大量葡萄糖的需要[17]。本研究結(jié)果則發(fā)現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化的肝卵圓細(xì)胞p-STAT3表達(dá)增高，STAT3活化，STAT3可上調(diào)GLUT2的表達(dá)，增強(qiáng)Warburg效應(yīng)和促進(jìn)細(xì)胞增殖，促進(jìn)肝卵圓細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

綜上所述，STAT3的異常激活可能通過(guò)上調(diào)GLUT2的表達(dá)，增強(qiáng)Warburg效應(yīng)和促進(jìn)細(xì)胞增殖，而促進(jìn)肝卵圓細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

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