朱 奕，郭 犖，王勝資

1.復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院放療科，上海 200031；

2.復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心，上海 200031

喉癌的發(fā)生率占全身惡性腫瘤的1%～5%［1］。2012年全球喉癌發(fā)病約138 102例，因喉癌死亡約73 261例［2］。流行病學(xué)調(diào)查顯示，吸煙是促進(jìn)喉癌發(fā)生的最為重要的外在因素［3］。然而腫瘤的發(fā)生除了外在因素的促進(jìn)作用，還存在內(nèi)在的遺傳易感性。不同的遺傳背景對(duì)腫瘤的易感存在一定差異。英國(guó)研究者Doll等［4］在20世紀(jì)50年代就通過(guò)大樣本的調(diào)查和隨訪工作發(fā)現(xiàn)，肺癌最重要的危險(xiǎn)因素是吸煙，但在隨訪中發(fā)現(xiàn)，同樣的吸煙量和吸煙年限，卻只有不到20%的調(diào)查者最終會(huì)發(fā)展為肺癌。這一研究結(jié)果提示，盡管暴露在同樣的危險(xiǎn)因素之下，不同的個(gè)體或種系對(duì)腫瘤的易感性存在著差異，即易感性是由遺傳基因的差異決定個(gè)體患腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)是目前人類遺傳變異中最常見(jiàn)的一種多態(tài)性，是指由單個(gè)核苷酸的變化引起的DNA序列多態(tài)性的改變，90%以上的遺傳變異來(lái)自于此，平均每500～1 000個(gè)堿基對(duì)中就有1個(gè)。因此，目前對(duì)腫瘤等疾病遺傳易感基因的研究重點(diǎn)為SNP的研究［5］，包括癌基因與抑癌基因SNP、DNA修復(fù)基因SNP、代謝酶SNP及免疫相關(guān)基因SNP方面與腫瘤遺傳易感性的探討。本研究基于單堿基延伸反應(yīng)和酶放大系統(tǒng)原理，根據(jù)待檢測(cè)樣品的SNP位點(diǎn)5’端序列，設(shè)計(jì)帶有雙重功能的SBE引物序列，并將其直接固定于生物傳感器上，加入與突變堿基互補(bǔ)的、有生物學(xué)標(biāo)記的ddNTP，在DNA多聚酶的催化下直接進(jìn)行固相單堿基延伸反應(yīng)，最后對(duì)其生物學(xué)信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)。為了確保檢測(cè)技術(shù)的準(zhǔn)確性及操作的可重復(fù)性，我們對(duì)該次檢測(cè)的22個(gè)位點(diǎn)中的rs1047768、rs17655、rs4771436、rs1048943、rs1052133、rs1801320、rs2298881、rs3212961和rs9928731位點(diǎn)進(jìn)行了再次檢測(cè)，結(jié)果顯示，兩次檢測(cè)結(jié)果完全一致，確保了該實(shí)驗(yàn)技術(shù)的準(zhǔn)確性。

目前關(guān)于喉癌的遺傳易感基因的研究不十分全面細(xì)致，即使有報(bào)道也是單個(gè)基因或單個(gè)核苷酸片段的研究，故對(duì)于指導(dǎo)喉癌的早期預(yù)防檢測(cè)等作用方面可用的信息較少。本研究根據(jù)文獻(xiàn)將之前學(xué)者報(bào)道的與煙草相關(guān)的頭頸部腫瘤的遺傳易感基因進(jìn)行總結(jié)，包括ERCC5、CYP1A1、OGG1、RAD51、ERCC1、MMP2和MMP3。對(duì)這些高?；蚣癝NP片段進(jìn)行集中檢測(cè)，希望發(fā)現(xiàn)與吸煙相關(guān)性喉癌密切關(guān)聯(lián)的多個(gè)基因及片段。此外，由于煙草焦油中的苯比芘等有害物質(zhì)能夠促進(jìn)DNA的改變，煙草本身具有改變基因活性及表型的能力，且大多數(shù)喉癌患者具有長(zhǎng)期嚴(yán)重的吸煙史，因此，在進(jìn)行喉癌遺傳易感基因的研究設(shè)計(jì)中，必須考慮吸煙情況這一重要因素的影響。本研究要求試驗(yàn)組與對(duì)照組的觀察對(duì)象的吸煙指數(shù)均大于400/年支，在控制了外在促進(jìn)因素的前提下對(duì)內(nèi)在易感基因進(jìn)行研究，更全面和客觀的了解喉癌的遺傳易感基因，為喉癌的預(yù)防及早期干預(yù)提供客觀可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 入組情況

所有入組者均具有長(zhǎng)期吸煙史(其吸煙指數(shù)大于等于400/年支)，排除了復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者以及有其他嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者。試驗(yàn)組為經(jīng)復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院治療的男性喉癌患者94例，分別采集年齡、吸煙史、吸煙量、腫瘤分期、治療方式和發(fā)病部位等資料。對(duì)照組為高危吸煙人群148例，均無(wú)腫瘤病史。

1.2 血樣及DNA采集

所有參與者在研究開(kāi)始之前均簽署了知情同意書并采集5 mL的外周血，將樣品儲(chǔ)存在-20 ℃條件下備用。使用酚-氯仿提取法(QIAGEN DNA Mini和Blood Mini Kits)從全血中提取基因組DNA。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的前期研究結(jié)果選取與吸煙相關(guān)性腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的候選基因，分別為ERCC5、CYP1A1、OGG1、RAD51、ERCC1、MMP2和MMP3；進(jìn)一步在基因庫(kù)選取SNP片段，采用Sequenom SNP檢測(cè)技術(shù)完成SNP基因片段檢測(cè)。使用Sequenom?Assay Design 3.1版軟件［購(gòu)自生工生物工程(上海)股份有限公司］設(shè)計(jì)引物序列(表1)。PCR反應(yīng)條件如下：95 ℃初始變性2 min，95 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s；最后在72 ℃延伸5 min，45個(gè)循環(huán)。使用Sequenom MassARRAY Assay Design 3.0軟件設(shè)計(jì)了多重SNP MassEXTEND測(cè)定。使用具有標(biāo)準(zhǔn)方案的Sequenom MassARRAY RS1000平臺(tái)檢測(cè)基因型和等位基因，并使用Sequenom Typer 4.0軟件分析數(shù)據(jù)。

選取的基因及片段包括ERCC5(rs1047768、rs17655、rs4771436)、CYP1A1(rs1048943、rs382604、rs4646903)、OGG1(rs1052133、rs2072668、rs2075747、rs3219008)、RAD51(rs1107029、rs1801320、rs4924500)、ERCC1(rs11615、rs2298881、rs3212961)、MMP2(rs243865、rs7202、rs9928731)和MMP3(rs522616、rs650108、rs679620)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用獨(dú)立的雙樣本t檢驗(yàn)，Cochran-Mantel-Haenszel檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)來(lái)分析試驗(yàn)組和對(duì)照組的基線特征。采用SPSS 17.0軟件包分析一般臨床資料，以評(píng)估吸煙與疾病進(jìn)展之間的相關(guān)性。使用χ2檢驗(yàn)來(lái)檢查Hardy-Weinberg平衡(Hardy-Weinberg equilibrate，HWE)。使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析基因型或等位基因與喉癌發(fā)生之間的關(guān)系。然后根據(jù)軟件包分析的結(jié)果總結(jié)與吸煙相關(guān)的喉癌相關(guān)遺傳易感基因。條件多變量邏輯回歸模型用于計(jì)算OR和95%CI。分層分析在控制吸煙外部因素后基因型和等位基因?qū)戆╋L(fēng)險(xiǎn)的影響。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 試驗(yàn)組及對(duì)照組基本臨床資料

試驗(yàn)組及對(duì)照組基本臨床資料見(jiàn)表2，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 T分期、N分期及臨床分期與吸煙程度的相關(guān)性

T分期與吸煙程度之間沒(méi)有顯著相關(guān)性，但是N分期及臨床分期與吸煙程度有顯著相關(guān)性(表3)。

2.3 Hardy-Weinbery平衡檢驗(yàn)

平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組與對(duì)照組21個(gè)位點(diǎn)的基因型分布均未偏離HWE所示(P＞0.05)，提示試驗(yàn)組與對(duì)照組均未受到遺傳因素干擾(表4)。

2.4 SNP位點(diǎn)與喉癌發(fā)生的相關(guān)性分析情況

試驗(yàn)組94例喉癌患者中，93例檢測(cè)成功，其中1例由于DNA質(zhì)量原因檢測(cè)失??；對(duì)照組148例全部檢測(cè)成功。22個(gè)SNP片段中21個(gè)均檢測(cè)成功，其中rs4646903片段由于質(zhì)譜原因未檢測(cè)成功。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分別計(jì)算每個(gè)位點(diǎn)基因型及等位基因的表達(dá)頻率，進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后結(jié)合P值及OR值分析檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果顯示，MMP2-rs243865與MMP3-rs522616這兩個(gè)基因位點(diǎn)與喉癌發(fā)生、密切相關(guān)，可能是喉癌發(fā)生、發(fā)展的遺傳易感基因。而rs1047768、rs17655、rs4771436、rs1048943、rs382604、rs1052133、rs2072668、rs2075747、rs3219008、rs1107029、rs1801320、rs4924500、rs11615、rs2298881、rs3212961、rs7202、rs9928731、rs650108和rs679620基因位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果在試驗(yàn)組與對(duì)照組間的發(fā)生頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表 2 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組一般資料Tab. 2 Case and control characteristics［n(%)］

表 3 實(shí)驗(yàn)組臨床資料及吸煙情況Tab. 3 Clinical characteristics and smoking degree in patients［n(%)］

表 4 平衡實(shí)驗(yàn)Tab. 4 Hardy-Weinberg test

對(duì)rs243865基因型和等位基因與喉癌發(fā)生相關(guān)性分析結(jié)果顯示，該位點(diǎn)基因型(CC/TT/CT)的表達(dá)頻率在兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.04)，等位基因(C/T)的表達(dá)頻率在兩組間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)。表明在基因型方面TT表型罹患喉癌的危險(xiǎn)度發(fā)生率是CC表型的8.97倍，而CT表型罹患喉癌的危險(xiǎn)度是CC表型的1.44倍。在等位基因方面，T等位基因攜帶者罹患喉癌危險(xiǎn)度是C等位基因攜帶者的1.92倍(表5)。

對(duì)rs522616基因型和等位基因與喉癌發(fā)生相關(guān)性分析結(jié)果顯示，該位點(diǎn)基因型(AA/GG/AG)的表達(dá)頻率在兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03)，等位基因(A/G)的表達(dá)頻率在兩組間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03)。表明在基因型方面，GG表型罹患喉癌的危險(xiǎn)度發(fā)生率是AA表型的0.54倍，而AG表型罹患喉癌的危險(xiǎn)度是AA表型的0.48倍，具有保護(hù)作用。在等位基因方面，該位點(diǎn)G等位基因攜帶者罹患喉癌的危險(xiǎn)性是A等位基因攜帶者的0.66倍，具有保護(hù)作用(表6)。

2.5 吸煙情況及基因頻率與喉癌發(fā)生的相關(guān)性

按照吸煙指數(shù)將試驗(yàn)組與對(duì)照組分為輕度(400～800/年支)、中度(800～1 200/年支)及重度吸煙組(＞1 200/年支)，并將基因分型與吸煙促進(jìn)喉癌發(fā)生這個(gè)最為重要的外在因素聯(lián)合分析(表4)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，rs11047768、rs2298881兩個(gè)位點(diǎn)與吸煙及喉癌發(fā)生有顯著相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)合P值與OR值逐一分析后認(rèn)為，rs2298881位點(diǎn)GT基因型攜帶者其罹患喉癌風(fēng)險(xiǎn)顯著升高(P=0.025)，是TT基因型攜帶者的5.91倍，且其OR值在輕、中、重度吸煙人群中隨吸煙指數(shù)增加而逐漸增加，可認(rèn)為該位點(diǎn)GT基因型攜帶者隨著吸煙指數(shù)的增大，其罹患喉癌風(fēng)險(xiǎn)逐漸增加(表7)。

表 5 rs243865與喉癌發(fā)生的相關(guān)性Tab. 5 The association between rs243865 and laryngeal cancer

表 6 rs522616與喉癌發(fā)生的相關(guān)性Tab. 6 The association between rs522616 and laryngeal cancer

表 7 吸煙情況及基因頻率與喉癌發(fā)生的相關(guān)性分析Tab. 7 Analysis of gene data stratified by smoking degree

續(xù)表7

3 討 論

目前的研究對(duì)吸煙如何促進(jìn)腫瘤發(fā)生的機(jī)制尚不十分明確，但國(guó)內(nèi)外已有多項(xiàng)研究顯示，吸煙對(duì)頭頸部腫瘤的發(fā)生具有促進(jìn)作用，是頭頸部腫瘤發(fā)生的高危因素［6］。然而腫瘤的發(fā)生是多因素、多環(huán)節(jié)共同促進(jìn)的結(jié)果，20世紀(jì)80年代，研究者意識(shí)到腫瘤可能是一種遺傳學(xué)疾病，并且隨著腫瘤各個(gè)分支學(xué)科的發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)，原癌基因的激活和腫瘤抑制基因的失活在癌變過(guò)程中起重要的生物學(xué)作用，而癌相關(guān)基因的種系突變決定了該家族的腫瘤遺傳易感性，與此相關(guān)基因的遺傳多態(tài)性決定了個(gè)體對(duì)這些因素的易感性［7-9］。

在我們的臨床數(shù)據(jù)調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)與以往的流行病學(xué)研究結(jié)果一致的是喉癌患者多數(shù)為長(zhǎng)期吸煙人群。我們選擇了吸煙指數(shù)大于400/年支的患者作為調(diào)查研究對(duì)象，目的是為了進(jìn)一步了解吸煙量與喉癌分期的關(guān)系，并且在控制了吸煙這一外在因素的情況下，對(duì)內(nèi)在的遺傳易感性的探討更為精確。研究結(jié)果顯示，吸煙是促進(jìn)喉癌發(fā)生的重要因素，隨著吸煙指數(shù)的增加和對(duì)煙草依賴程度的增加，喉癌發(fā)生后的N分期及臨床分期越晚，說(shuō)明吸煙不但能夠促進(jìn)喉癌的發(fā)生，還會(huì)促進(jìn)喉癌的發(fā)展。2012年，Underwood等［10］的一項(xiàng)研究將試驗(yàn)設(shè)計(jì)為3組來(lái)討論煙草對(duì)腫瘤的作用，分別為與煙草相關(guān)的腫瘤預(yù)后人群組、其他腫瘤預(yù)后人群組及正常無(wú)病人群組，得出的結(jié)論與本研究一致，認(rèn)為煙草對(duì)于腫瘤的進(jìn)展及復(fù)發(fā)有著非常重要的作用。

本研究結(jié)果提示，MMP2-rs243865與MMP3-rs522616這兩個(gè)基因位點(diǎn)與喉癌的發(fā)生密切相關(guān)。MMPs是一組鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，由23個(gè)成員組成，幾乎能夠降解所有的細(xì)胞外基質(zhì)成份，而且與腫瘤的浸潤(rùn)、侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。目前對(duì)MMP2基因的研究主要是集中在該基因啟動(dòng)子區(qū)域的1 306 bp的C/T(rs243865)，在促癌因素的作用下促使-1306的C-T轉(zhuǎn)換，使得其中1個(gè)Sp1位點(diǎn)暴露并被破壞，進(jìn)而影響了該基因的轉(zhuǎn)錄活性，改變了正常的基因序列，擾亂了正常的生理功能，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展［11］。一項(xiàng)關(guān)于前列腺癌的研究分析了190例前列腺癌患者和200名健康人群，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1 306 bp的C/T(rs243865)位點(diǎn)的T等位基因攜帶者其罹患前列腺癌風(fēng)險(xiǎn)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［12］。該研究結(jié)果與本研究結(jié)論一致。但也有學(xué)者認(rèn)為，攜帶CC基因型的人群其肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高，是其他基因型的2倍［11］。這與本研究結(jié)果相悖，可能與腫瘤發(fā)生部位不同及病理類型不同有關(guān)，值得進(jìn)一步探討。與MMP3-rs522616的核苷酸序列結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子是C/EBP，其是CCAAT的增強(qiáng)子結(jié)合蛋白。該轉(zhuǎn)錄因子參與了全身多個(gè)組織的功能，與細(xì)胞增殖、分化及腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。轉(zhuǎn)錄因子C/EBP與rs522616的核苷酸序列相互作用促進(jìn)G-A轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)MMP3的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤的易感性和浸潤(rùn)。MMP3-rs522616中的G-A轉(zhuǎn)化可能是食管癌的易感基因，特別是在純合子載體群體中［13］。此結(jié)果與本研究的結(jié)論一致。

在頭頸部腫瘤中，與MMP2及MMP3相關(guān)性研究方面的報(bào)道較少，尤其是MMP2及MMP3在喉癌發(fā)生、發(fā)展中作用的研究并不多見(jiàn)，僅有的幾項(xiàng)研究也是集中在MMP2及MMP3的表達(dá)水平與喉癌相關(guān)性分析方面。2013年的一項(xiàng)Meta分析納入了13個(gè)頭頸部腫瘤與MMP2、MMP3及MMP9的相關(guān)性研究結(jié)果，分析結(jié)果認(rèn)為，MMP2-1306C/T及MMP3-11715A/6A位點(diǎn)改變能夠促進(jìn)頭頸部腫瘤發(fā)生、發(fā)展［14］。Lotfi等［15］研究了MMP2及MMP9與喉癌的相關(guān)性，結(jié)果顯示，與健康人群相比，喉癌患者的MMP2及MMP9水平明顯升高，并且認(rèn)為MMP2與喉癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，而MMP9則與腫瘤T分期明顯相關(guān)。2014年有學(xué)者將48例喉癌患者的病理組織與15名非腫瘤人群的喉旁組織進(jìn)行了對(duì)照研究，分析CD147、MMP2及MMP9的表達(dá)差異，結(jié)果顯示，喉癌患者的組織中CD147、MMP2及MMP9的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(87.5 % vs 26.7 %、75.0% vs 6.7%、79.2%vs 33.3%)；再根據(jù)CD147、MMP2及MMP9的表達(dá)情況將喉癌患者分層，分析5年生存率，結(jié)果顯示，高表達(dá)組5年生存率僅為25.0%，而低表達(dá)組為83.3%；并且認(rèn)為CD147、MMP2及MMP9的表達(dá)與喉癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)［16］。Mallis等［17］報(bào)道了102例喉癌患者M(jìn)MP2表達(dá)情況與其預(yù)后的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)MMP2高表達(dá)的喉癌其總生存率及無(wú)病生存率均比MMP2低表達(dá)組的患者低，因此提出在喉癌患者中，MMP2是預(yù)測(cè)預(yù)后的標(biāo)志物。

根據(jù)吸煙指數(shù)分層分析后顯示，ERCC5-rs11047768、ERCC1-rs2298881、OGG1-rs3219008及MMP2-rs9928731這4個(gè)位點(diǎn)的某個(gè)基因型會(huì)增加或降低喉癌患病風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)合P值與OR值綜合分析后認(rèn)為，僅ERCC1的rs2298881片段有較為明顯的趨勢(shì)，可以認(rèn)為在重度吸煙人群中，該位點(diǎn)GT基因型攜帶者其罹患喉癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。我們認(rèn)為吸煙數(shù)量的差異會(huì)導(dǎo)致腫瘤標(biāo)志物及基因位點(diǎn)表型的不同，這一結(jié)果與Bodnar等［18］的觀點(diǎn)一致。2009年，Bodnar等［18］曾提出吸煙是導(dǎo)致喉癌發(fā)生的最主要誘因，認(rèn)為煙草能夠使機(jī)體的內(nèi)源性化學(xué)物質(zhì)改變結(jié)構(gòu)，使其突變并具有致癌性，之后這些物質(zhì)將浸潤(rùn)細(xì)胞導(dǎo)致基因發(fā)生變化，變異的基因不斷累積將導(dǎo)致癌癥發(fā)生、腫瘤形成甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，他們根據(jù)吸煙數(shù)量的不同對(duì)11例喉癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行分析，主要的研究指標(biāo)是MMP2、PCNA及Ki-67，發(fā)現(xiàn)在重度吸煙的喉癌患者標(biāo)本中，以上基因表達(dá)是顯著上調(diào)的。2010年，Bodnar等［19］的另一項(xiàng)研究根據(jù)喉癌患者吸煙數(shù)量不同探索基因表達(dá)的差異，觀察的指標(biāo)主要有MMP2、TGF-beta1及TGF-betaR1，發(fā)現(xiàn)重度吸煙患者的腫瘤基質(zhì)中，MMP2和TGF-betaR1較吸煙量少組有更高的表達(dá)量，因此認(rèn)為，喉癌患者吸煙數(shù)量有差異，腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)也會(huì)有所不同。目前有多項(xiàng)腫瘤的研究表明，ERCC1與腫瘤遺傳易感性相關(guān)，如大腸癌、胃癌及肺癌等［20-21］。也有文獻(xiàn)報(bào)道，ERCC1 rs3212986及rs11615位點(diǎn)可能與胃癌、乳腺癌及肺癌發(fā)病密切相關(guān)［22-24］。認(rèn)為ERCC1 rs3212986位點(diǎn)基因多態(tài)性與吸煙患者大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。吸煙可以導(dǎo)致苯并芘化合物蓄積，繼而出現(xiàn)DNA損傷，如雙鏈斷裂、雙鏈交聯(lián)或重組等，最終導(dǎo)致癌變［24］。一項(xiàng)關(guān)于ERCC1與乳腺癌的研究中納入了417例乳腺癌患者及417名對(duì)照組無(wú)癌人群，結(jié)果顯示，在中國(guó)人群中，ERCC1-rs2298881、rs11615的多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生密切相關(guān)［25］，這與本研究結(jié)果一致。2014年，Lu等［26］的一項(xiàng)最新有關(guān)喉癌發(fā)生、發(fā)展分子機(jī)制的研究更加強(qiáng)調(diào)了喉癌的發(fā)生與煙草的強(qiáng)大關(guān)聯(lián)性，他們進(jìn)行了一項(xiàng)病例對(duì)照研究，以確定與喉癌風(fēng)險(xiǎn)NER通路基因常見(jiàn)的8個(gè)SNP之間的關(guān)聯(lián)，以及與遺傳多態(tài)性和環(huán)境因素的關(guān)系。采用1∶1配對(duì)病例對(duì)照研究對(duì)176例喉癌患者和176名對(duì)照人群進(jìn)行研究，特別強(qiáng)調(diào)了此項(xiàng)研究對(duì)吸煙史的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分層分析顯示：ERCC1 rs11615和ERCC5 rs17655的多態(tài)性與吸煙之間的相互作用能夠促進(jìn)喉癌的發(fā)生、發(fā)展，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ERCC1 rs1615多態(tài)性與飲酒習(xí)慣也有顯著的相互作用，最后得出ERCC 1rs11615、ERCC 5rs17655基因多態(tài)性能夠增加喉癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，并且給吸煙和飲酒者帶來(lái)更大的風(fēng)險(xiǎn)。本研究也將ERCC1 rs11615納入了檢測(cè)，但并未得到陽(yáng)性的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果，可能需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本討論。

綜上，MMP2和MMP3基因在促進(jìn)喉癌中起重要作用。這些潛在的易感基因在喉癌的早期階段具有至關(guān)重要的作用。此外，ERCC1基因監(jiān)測(cè)在重度吸煙者中很重要，值得進(jìn)一步探討，為開(kāi)展吸煙人群早期喉癌篩查及預(yù)防提供客觀數(shù)據(jù)。

［1］ 于 華, 辛玉芬, 段曉東, 等. 喉癌的流行病學(xué)病因?qū)W動(dòng)態(tài)分析［J］. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2007, 7(3): 393-395.

［2］ GLOBOCAN: Estimated cancer incidence, mortality and prevalence worldwide in 2012. http://globocan.iarc.fr/Pages/fact_sheets_population.aspx (Accessed May 05, 2015), 2012.

［3］ PANTEL M, GUNTINAS-LncHIUS O. Laryngeal carcinoma:epidemiology, risk factors and survival［J］. HNO, 2012,60(1): 32-40.

［4］ DOLL R, HILL A B,GRAY P G, et al. Lung cancer mortality and the length of cigarette ends;an international comparison［J］. Br Med J, 1959, 1(5118): 322-325.

［5］ HEMMINKI K, F A, LORENZO B J. Etiologic impact of known cancer susceptibility genes［J］. Mutat Res, 2008,658(1-2): 42-54.

［6］ WADE G S, BEVERLY R K, WUERTZ L G O. Tobacco carcinogen mediated up-regulation of AP-1dependent proangiogenic cytokines in head and neck carcinogenesis［J］.Mol Carcinogen, 2011, 50(9): 668-679.

［7］ PONDER B A. Cancer genetics［J］. Nature, 2001,411(6835): 336-371.

［8］ KNUDSON A G. Cancer genetics［J］. Ame J Med Genet,2001, 111(1): 96-102.

［9］ PETO J. Cancer epdimeology in the last century and the next decade ［J］. Nature, 2001, 411(6835): 390-395.

［10］ UNDERWOOD J M, TOWNSEND J S, TAI E, et al. Persistent cigarette smoking and other tobacco use after a tobaccorelated cancer diagnosis［J］. J Cancer Surviv, 2012, 6(3):333-344.

［11］ ZHOU Y, YU C, MIAO X, et al. Functional haplotypes in the promoter of matrix metalloproteinase-2 and lung cancer susceptibility［J］. Carcinogenesis, 2005, 26(6): 1117-1121.

［12］ SRIVASTAVA P, LONE T A, KAPOOR R, et al. Association of promoter polymorphisms in MMP2 and TIMP2 with prostate cancer susceptibility in North India［J］. Arch Med Res,2012, 43(2): 117-124.

［13］ 陳清波, 高雯琪, 鄧志芳, 等. 人類MMP3基因5’端轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)rs522616單核苷酸多態(tài)性與食管鱗癌遺傳易感性的關(guān)系［J］. 世界華人消雜, 2011, 19(30): 27-33.

［14］ ZHANG C, LI C, ZHU M, et al. Meta-analysis of MMP2,MMP3, and MMP9 promoter polymorphisms and head and neck cancer risk［J］. PLoS One, 2013, 8(4): e62023.

［15］ LOTFI A, MOHAMMADI G, SANIEE L, et al. Serum level of matrix metalloproteinase-2 and -9 in patients with laryngeal squamous cell carcinoma and clinical significance［J］.Asian Pac J Cancer Prev, 2015, 16(15): 6749-6751.

［16］ GOU X, CHEN H, JIN F, et al. Expressions of CD147, MMP-2 and MMP-9 in laryngeal carcinoma and its correlation with poor prognosis［J］. Pathol Oncol Res, 2014, 20(2): 475-481.

［17］ MALLIS A, TEYMOORTASH A, MASTRONIKOLIS N S, et al. MMP-2 expression in 102 patients with glottic laryngeal cancer［J］. Eur Arch Otorhinolaryngol, 2012, 269(2): 639-642.

［18］ BODNAR M, REKWIROWICZ H, BURDUK P, et al. Impact of tobacco smoking on biologic background of laryngeal squamous cell carcinoma［J］. Przegl Lek, 2009, 66(10):598-602.

［19］ BODNAR M, BURDUK P, KAZMIERCZAK W, et al.Expression of tumor matrix markers rebuild in laryngeal cancer depends on number of smoked cigarettes［J］. Przegl Lek, 2010, 67(10): 850-854.

［20］ YE W, KUMAR R, BACOVA G, et al. The XPD 751Gln allele is associated with an increased risk for esophageal adenocarcinoma: a population-based case-control study in Sweden［J］. Carcinogenesis, 2006, 27(9): 1835-1841.

［21］ ZHOU R M, LI Y, WANG N, et al. Correlation of XPC Ala499Val and Lys939Gln polymorphisms to risks of esophageal squamous cell carcinoma and gastric cardiac adenocarcinoma［J］. Ai Zheng, 2006, 25(9): 1113-1119.

［22］ QIU L, WANG Z, SHI X, et al. Associations between XPC polymorphisms and risk of cancers: a meta-analysis［J］.Eur J Cancer, 2008, 44(15): 2241-2253.

［23］ FRANCISCO G, MENEZES P R, ELUF-NETO J, et al. XPC polymorphisms play a role in tissue-specific carcinogenesis:a meta-analysis［J］. Eur J Hum Genet, 2008, 16(6): 724-734.

［24］ 候睿智, 趙吉生. ERCC1、XPF基因多態(tài)性與大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及吸煙相關(guān)性的臨床研究［D］. 吉林: 吉林大學(xué),2015.

［25］ PEI X H, YANG Z, LV X Q, et al. Genetic variation in ERCC1 and XPF genes and breast cancer risk［J］. Genet Mol Res,2014, 13(1): 2259-2267.

［26］ LU B, LI J, GAO Q, et al. Laryngeal cancer risk and common single nucleotide polymorphisms in nucleotide excision repair pathway genes ERCC1, ERCC2, ERCC3, ERCC4, ERCC5 and XPA［J］. Gene, 2014, 542(1): 64-68.