顏 娟 鄭茂東 崔玉環(huán) 魏玉磊

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075000)

大黃酚(Chry)具有抗氧化〔1〕、抗病毒、抗菌、降壓等作用。目前，不同Chry劑型藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究報(bào)道Chry脂質(zhì)體(Chr-lip)具有靶向性，主要分布在血、腦組織中〔2〕。腦缺血時(shí)，機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化物如超氧化物歧化酶(SOD)降低、丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)升高，引起機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能紊亂。再灌注時(shí)，新生成的氧自由基和存留的氧自由基進(jìn)一步發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，從而加重細(xì)胞損傷。本文主要研究Chr-lip對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠體內(nèi)抗氧化作用，探討其是否提高機(jī)體抗氧化能力。

1 材料與方法

1.1材料 主要藥品與試劑：Chr-lip自制，血清總抗氧化能力(T-AOC)測(cè)定試劑盒，過(guò)氧化氫酶(CAT)測(cè)定試劑盒，SOD測(cè)定試劑盒，MDA 測(cè)定試劑盒，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程公司。動(dòng)物：昆明種小鼠(河北北方學(xué)院動(dòng)物中心提供)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：XCYK(冀)2010-2014，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(Ji)2004-0001。儀器：HITACHI U-3900 紫外分光光度(日本)，電子天平 BS124S(德國(guó))，酶標(biāo)儀。

1.2方法 3.5%水合氯醛(10 ml/kg)腹腔麻醉，按參考文獻(xiàn)〔3〕方法分離頸外動(dòng)脈，左側(cè)頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，解離神經(jīng)。夾閉頸總、頸內(nèi)動(dòng)脈，將制備好的栓線插入頸外動(dòng)脈，并在剪口處打一松結(jié)，將線插入頸內(nèi)動(dòng)脈的顱內(nèi)段，當(dāng)線遇阻力時(shí)，正好堵住大腦中動(dòng)脈的開(kāi)口。阻斷1 h后，拔出線栓，縫合，完成腦缺血再灌注損傷模型。假手術(shù)組不實(shí)施缺血再灌注，只進(jìn)行手術(shù)。蘇醒后觀察存活小鼠行為變化，神經(jīng)癥狀采用Clark 評(píng)分〔4〕(0～28分)，剔除不符合條件的小鼠后，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)條件統(tǒng)一補(bǔ)充、分組。建模成功后，小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、Chr-lip 10.0、5.0、0.5 mg/kg 3個(gè)劑量組。模型成功后，每日上午分別腹腔給藥，正常對(duì)照組、假手術(shù)組和模型組給予同體積的生理鹽水。Chr-lip 10.0，5.0，0.5 mg/kg，每天稱重一次，依據(jù)小鼠末次體重調(diào)整給藥劑量。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中配置3份Chr-lip溶液，其濃度分別為0.500，0.250，0.025 mg/ml；濃度根據(jù)20 ml/kg計(jì)算，使小鼠的給藥體積保持一致。給藥時(shí)間1 w。末次給藥后，每組取10只小鼠血清進(jìn)行檢測(cè)T-AOC、CAT、SOD、GSH-Px、MDA水平，方法按試劑盒說(shuō)明。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS10.0軟件進(jìn)行方差分析及LSD檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

見(jiàn)表1。與正常對(duì)照組相比，模型組T-AOC、SOD、GSH-PX、CAT活性明顯降低(P<0.01)，MDA活性明顯增加(P<0.01)；與模型組比較，Chr-lip組中T-AOC、SOD、GSH-Px(chr-lip 0.5 mg/kg除外)、CAT(Chr-lip 0.5 mg/kg除外)活性均顯著提高(P<0.05)，MDA(Chr-lip 0.5 mg/kg除外)活性顯著降低(P<0.05)。

表1 各組腦組織氧化指標(biāo)比較

與正常對(duì)照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.01,3)P<0.05

3 討 論

Chry具有多種藥理作用，包括抗感染、抗衰老、抗癌。它具有抑制人類某些癌細(xì)胞增長(zhǎng)的能力，即通過(guò)誘導(dǎo)人類肺癌A549細(xì)胞、J5細(xì)胞壞死〔5～7〕。前期研究〔8〕發(fā)現(xiàn)Chr-lip在腦缺血再灌注損傷小鼠中具有明顯的生物作用，提高小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。Chr-lip作為一種新的劑型，它在腦缺血性疾病中具有潛在的能力。在腦缺血再灌注過(guò)程中，自由基損傷，解毒系統(tǒng)失活，氧化應(yīng)激損傷，氧化劑過(guò)?！?,10〕多種環(huán)節(jié)相互影響，相互作用。上述因素變化都會(huì)使機(jī)體腦組織中抗氧化防御系統(tǒng)紊亂。因此，抗氧化藥物在腦缺血再灌注損傷治療研究引起廣泛興趣〔11〕。過(guò)量的氧自由基作用于細(xì)胞內(nèi)各種酶及細(xì)胞膜上不飽和脂肪酸，進(jìn)而細(xì)胞膜產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，致使質(zhì)膜被破壞，形成功能障礙，誘導(dǎo)蛋白質(zhì)、RNA、DNA的交聯(lián)和氧化反應(yīng)，引起生物膜裂解，酶喪失活性，神經(jīng)元凋亡或死亡〔12〕，導(dǎo)致細(xì)胞損傷引起腦功能障礙。腦缺血時(shí)，大量的自由基產(chǎn)生，但機(jī)體內(nèi)清除自由基的能力未提高，尤其是再灌注時(shí)，雖然組織重新獲得供氧可緩解腦組織的缺血缺氧狀態(tài)，但同時(shí)也產(chǎn)生大量自由基，使其大量聚集，腦組織損傷進(jìn)一步加重〔13〕。生成的自由基使生物膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，影響膜的穩(wěn)定性，最終使細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生病理性的改變。因此，在自由基作用下，MDA作為不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，其含量可直接反映脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接反映細(xì)胞損傷的程度，組織內(nèi)SOD活性的高低可部分反映機(jī)體清除自由基的能力。谷胱甘肽系統(tǒng)則是腦內(nèi)重要的防御系統(tǒng)之一，與自由基及過(guò)氧化物結(jié)合，保護(hù)細(xì)胞膜中含巰基的酶和蛋白質(zhì)。腦缺血后由于自由基生成增加，體內(nèi)抗氧化物質(zhì)被消耗，使SOD、GSH-Px等顯著下降〔14〕。GSH-Px和SOD是內(nèi)源性自由基清除劑，清除自由基，保護(hù)細(xì)胞，因此，機(jī)體清除氧自由基的能力可用GSH-Px、SOD活力的高低表示。因此，在腦缺血再灌注過(guò)程中，自由基清除酶活性降低，使細(xì)胞膜磷脂中脂肪酸的不飽和雙鍵和多聚不飽和脂肪酸更易受到攻擊，隨著防御功能減弱，進(jìn)而清除自由基酶與自由基之間的平衡失調(diào)，加重脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，更易受到自由基的攻擊，腦血管通透性增加、血腦屏障破壞，神經(jīng)元損害和腦水腫加重〔15〕。本研究結(jié)果表明Chr-lip的神經(jīng)保護(hù)作用可能通過(guò)減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。此外，Chr-lip具有增強(qiáng)T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活性的作用。上述結(jié)果顯示，Chr-lip在腦缺血再灌注損傷中具有潛在的抗氧化應(yīng)激能力。

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