孟 娟

（遼寧省北票市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)站，遼寧 北票 122100）

農(nóng)藥是把“雙刃劍”，對(duì)促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)有極其重要的作用。但由于農(nóng)藥本身固有的化學(xué)屬性和對(duì)其使用不當(dāng)，導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)，嚴(yán)重危害到廣大人民群眾的健康。在我國(guó)農(nóng)藥中，70%為有機(jī)磷農(nóng)藥，而在我國(guó)生產(chǎn)使用的有機(jī)磷農(nóng)藥中，70%為劇毒、高毒類(lèi)，而且較多是禁止在蔬菜作物上使用的。

農(nóng)產(chǎn)品不按規(guī)定的用藥量、次數(shù)、方法或安全間隔期施藥，或施用不允許在蔬菜上使用劇毒、高毒類(lèi)農(nóng)藥；現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)施行的農(nóng)藥殘留測(cè)定需要通過(guò)有機(jī)溶劑提取、凈化和用大型分析儀器進(jìn)行，無(wú)法對(duì)廉價(jià)的蔬菜進(jìn)行隨時(shí)隨地或快速檢測(cè)而形成的監(jiān)管不到位。

農(nóng)藥殘留是指在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后，一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品以及土壤和水體中的現(xiàn)象。因此制定出有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的快速檢測(cè)方法，加強(qiáng)對(duì)農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)已成為十分必要的監(jiān)管措施。

1 檢測(cè)原理

有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥能抑制昆蟲(chóng)中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲(chóng)中毒致死。根據(jù)這一昆蟲(chóng)毒理學(xué)原理，用在對(duì)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)中。通過(guò)測(cè)定該酶的活性被抑制的程度即可知樣品中含有農(nóng)藥的殘留情況。目前，農(nóng)殘速測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。由于本檢測(cè)單位采用的是農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，因此我們使用的速測(cè)藥品是丁酰膽堿酯酶試劑。丁酰膽堿酯酶的抑制率范圍在〈70%為不超標(biāo)，≥70%為殘留量可能超標(biāo)。

2 合理取樣

取樣科學(xué)規(guī)范，并具有代表性。所采樣品符合農(nóng)藥安全間隔期的要求；并且是待上市樣品。根據(jù)要求所檢測(cè)的蔬菜共有六大類(lèi)：甘藍(lán)類(lèi)、白菜類(lèi)、茄果類(lèi)、豆類(lèi)、瓜類(lèi)和綠葉菜類(lèi)（除韭菜）。

3 試劑及配制

3.1 緩沖劑

用1000ml純凈水溶解，常溫下保存并使用。

3.2 丁酰膽堿酯酶

根據(jù)酶活性情況用10ml緩沖液溶解。

3.3 底物

用10ml緩沖液溶解。

3.4 顯色劑

用10ml緩沖液溶解。

4 儀器

波長(zhǎng)為 410nm±3nm專(zhuān)用農(nóng)藥殘留速測(cè)儀。

5 檢測(cè)

5.1 取樣

用不銹鋼管取樣器取來(lái)自不同植株葉片 (至少8至10片葉子)的樣本；果菜從表皮至果肉 1～1.5cm處取樣；芹菜、香菜、蘑菇及番茄液汁中含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)樣品時(shí)，可采取整株（體）浸提，避免次生物物質(zhì)干擾。

5.2 檢測(cè)過(guò)程

5.2.1 空白對(duì)照液：取緩沖液3ml，酶50ul，加入專(zhuān)用反應(yīng)瓶中，再加入顯色劑50ul，于37～38℃恒溫培養(yǎng)箱中放置30min后再加入50ul底物，倒入比色皿中，搖勻后即用農(nóng)殘速測(cè)儀器進(jìn)行檢測(cè)。空白液吸光值控制在 0.4～0.8之間（當(dāng)空白值〈0.4時(shí)，在保證酶的活性情況下適當(dāng)加大酶試劑的使用量；當(dāng)空白值〉0.8時(shí)，表明試劑可能被污染，建議更換酶試劑）。

5.2.2 待測(cè)樣品液：取2g切碎的樣本(非葉菜類(lèi)取4 g),放入提取瓶?jī)?nèi)，加入20ml緩沖液，手動(dòng)震蕩 1～2分鐘，倒出提取液，靜止3～5min；在小試管內(nèi)分別加入50ul丁酰膽堿酯酶,3ml樣本提取液，50ul顯色劑，于37～38℃恒溫培養(yǎng)箱中放置30min后再加入50ul底物，倒入比色皿中，震蕩后即用農(nóng)殘速測(cè)儀器進(jìn)行測(cè)定。

5.3 檢測(cè)結(jié)果計(jì)算

檢測(cè)結(jié)果按式(1)計(jì)算∶抑制率（%）= ×100

其中∶AC—對(duì)照組3min后與3min前吸光值之差；

AS—樣本3min后與3min前吸光值之差。

當(dāng)抑制率〈70%時(shí)，蔬菜中不含有某種有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘毒。當(dāng)抑制率≥70%時(shí)，蔬菜中可能含有某種有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘毒，此時(shí)該樣本要有2次以上的重復(fù)檢測(cè)，經(jīng)多次重復(fù)檢測(cè)，〈70%的重現(xiàn)性應(yīng)在 80%以上，則判定合格。如多次檢測(cè)其結(jié)果≥70%，則建議使用氣相色譜等儀器分析法作進(jìn)一步定量的確認(rèn)。

5.4 注意事項(xiàng)

5.4.1 加入底物后，應(yīng)迅速混勻，立即測(cè)試。

5.4.2 所有的檢測(cè)液對(duì)皮膚均具有不同程度的傷害，使用時(shí)請(qǐng)做好防護(hù),不慎沾到皮膚應(yīng)立即擦干并用大量清水沖洗。

5.4.3 檢測(cè)試劑請(qǐng)務(wù)必在2～4℃冷藏柜中保存。