薛 銀

（浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江 杭州 310002）

奶牛乳房炎（Mastitis）是奶牛場(chǎng)危害最大，投入費(fèi)用最多，防治工作最難的疾病之一。隱性乳房炎在奶牛乳房炎中所占比例最大，由于乳汁無(wú)肉眼可見(jiàn)明顯的變化加上臨床癥狀不明顯，所以很容易被忽視。由于患病奶牛乳汁理化性質(zhì)發(fā)生改變，體細(xì)胞含量升高，乳腺組織發(fā)生明顯的病理學(xué)變化，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)和乳品加工業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。而且由于牛奶品質(zhì)發(fā)生變化，給乳品食品安全問(wèn)題帶來(lái)一定的隱患。

奶牛乳汁中的酶類，體細(xì)胞數(shù)量、各種成分的含量、乳汁的pH等在正常的乳腺細(xì)胞中是大體上不變的，但在患有乳房炎的奶牛中各項(xiàng)指標(biāo)有明顯變化。目前診斷隱性乳房炎方法主要有分子生物學(xué)方法、乳中酶類檢驗(yàn)法、乳汁細(xì)胞學(xué)檢查、乳汁病原微生物檢查、乳汁pH檢查、乳汁導(dǎo)電性檢查、乳清電泳診斷法等。本文介紹幾種常用以及仍處在研究中的幾種隱性乳房炎的診斷方法，供養(yǎng)殖場(chǎng)戶和科研工作者參考。

1 分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)的檢測(cè)方法主要是PCR的方法?？梢愿鶕?jù)感染隱性乳房炎的相關(guān)的各種主要的致病微生物，比如金黃色葡萄球菌等設(shè)計(jì)相關(guān)的引物，從而建立一種多重PCR的方法來(lái)檢測(cè)這些致病原，進(jìn)而檢測(cè)隱性乳房炎。這種分子生物學(xué)的檢測(cè)方法需要有專門的獸醫(yī)科技人員來(lái)完成。養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）可以通過(guò)第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)。

2 乳中酶檢測(cè)方法

乳汁中的各種酶類在發(fā)生乳房炎時(shí)會(huì)有一個(gè)明顯的變化，這些指標(biāo)的變化可以作為診斷奶牛隱性乳房炎的指標(biāo)。結(jié)合珠蛋白 (haptoglobin，HP)是奶牛的一種主要急性期蛋白（acute phase protein，APP），牛乳中HP含量的變化能準(zhǔn)確地反映乳房炎的炎癥程度并可以評(píng)價(jià)治療的效果。曹隨忠等利用乳汁中結(jié)合珠蛋白作為奶牛隱性乳房炎診斷指標(biāo)，其陽(yáng)性值達(dá)94.7%。

乳汁中的炎性細(xì)胞比如單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等在奶牛患乳房炎之后會(huì)釋放一種嗜天青顆粒，髓過(guò)氧化物酶（MPO）作為這種嗜天青顆粒的主要成分，在炎癥過(guò)程中會(huì)大量釋放，參與殺死病原微生物的過(guò)程中。所以髓過(guò)氧化物酶的大量升高可以作為監(jiān)測(cè)奶牛隱性乳房炎的重要指標(biāo)。

在奶?；茧[性乳房炎之后，損傷的乳房組織細(xì)胞和乳汁中的大量白細(xì)胞還會(huì)釋放一種叫乳酸脫氫酶的酶，黃利權(quán)等通過(guò)選擇奶牛正常乳區(qū)和患有隱性乳房炎的奶牛乳區(qū)，通過(guò)檢測(cè)此酶發(fā)現(xiàn)在患有隱性乳房炎的奶牛的乳汁中乳酸脫氫酶的含量有顯著升高。所以這個(gè)酶可以作為診斷奶牛隱性乳房炎的一個(gè)指標(biāo)。

乳中的 N-乙?；?-D-氨基葡萄糖苷酶（N-acety1-β-D-glucosaminidase）也是損傷的乳腺細(xì)胞和乳汁中的白細(xì)胞產(chǎn)生的。在患病的奶牛中，由于致病的微生物對(duì)乳腺組織的破壞，大量的N-乙?；?D-氨基葡萄糖苷酶會(huì)釋放到乳腺組織中。因此檢驗(yàn)乳汁中的N-乙酰基-D-氨基葡萄糖苷酶便能檢測(cè)出奶?；加须[性乳房炎。

3 乳汁中體細(xì)胞檢查方法

在正常的牛奶中，通常每毫升體細(xì)胞數(shù)在20萬(wàn)以下我們認(rèn)為是合格的牛奶。體細(xì)胞數(shù)越低，說(shuō)明奶牛越健康，牛奶品質(zhì)越好。牛奶中的體細(xì)胞主要包括一些炎性細(xì)胞，比如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，還有一部分是被破壞的乳腺細(xì)胞。奶?；茧[性乳房炎后，這些細(xì)胞的含量會(huì)有明顯的提高。所以通過(guò)檢測(cè)牛奶中的體細(xì)胞數(shù)就可以來(lái)判斷奶牛是否患有隱性乳房炎。通常的方法是將牛奶混合后取一定的量制作涂片，通過(guò)人工計(jì)數(shù)的方法來(lái)判斷。但是這項(xiàng)工作耗時(shí)耗力，得不償失?，F(xiàn)在已經(jīng)有專門的自動(dòng)體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀產(chǎn)生，比如瑞典的福斯體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)，取2mL左右的牛奶樣品，通過(guò)染色等自動(dòng)工序，可以準(zhǔn)確的檢測(cè)出牛奶中的體細(xì)胞數(shù)，方便快捷，但是設(shè)備成本很高。根據(jù)乳汁中的體細(xì)胞在表面活性劑等的破壞下，會(huì)釋放出DNA，再經(jīng)過(guò)一些反應(yīng)乳汁會(huì)出現(xiàn)凝集結(jié)塊等，可以據(jù)此來(lái)判斷乳房炎的嚴(yán)重程度，輕微凝集設(shè)為“+”，中度凝集“++”，重度凝集“+++”，據(jù)此可以直觀的監(jiān)測(cè)奶牛隱性乳房炎。比如浙江大學(xué)奶業(yè)科學(xué)研究所研制的奶牛乳房炎快速診斷方法，就是基于這個(gè)原理。但是這個(gè)方法也存在一定的問(wèn)題，檢測(cè)過(guò)程中有假陽(yáng)性的存在。

4 乳中病原微生物學(xué)檢查

引起奶牛患隱性乳房炎的主要因素是致病的微生物。細(xì)菌、真菌、支原體等都會(huì)引起疾病的發(fā)生。臨床上檢測(cè)出的致病菌主要包括金黃色葡萄球菌、嗜熱鏈球菌、埃希大腸桿菌等，這些病菌占了發(fā)生乳房炎的絕大部分。但是，雖然有些致病菌存在于乳汁中，但是奶牛的抵抗力比較強(qiáng)，并不一定會(huì)發(fā)病。另外還有樣品污染的問(wèn)題，養(yǎng)殖場(chǎng)戶可以通過(guò)細(xì)菌、真菌培養(yǎng)做出一個(gè)初步診斷。

5 牛奶中pH檢查方法

相關(guān)研究證明，奶?；加须[性乳房炎時(shí)，乳汁中pH會(huì)有一個(gè)明顯的上升。正常乳汁的pH大約在6.5左右上下浮動(dòng)。當(dāng)乳腺發(fā)生炎癥時(shí)，乳汁的pH會(huì)升高至6.9以上，常接近血漿的pH 7.4，牛奶pH的變化與體細(xì)胞和炎性細(xì)胞的含量呈正相關(guān)。但是此項(xiàng)檢查pH與多種因素有關(guān)，存在一定不確定性。

6 其他檢測(cè)方法

6.1 乳清電泳診斷法

根據(jù)研究表明：健康、可疑和隱性乳房炎乳清蛋白的變化規(guī)律與電泳圖譜的結(jié)果相一致，由此可根據(jù)乳清電泳圖譜的變化來(lái)判斷奶牛是否換有隱性乳房炎，西南農(nóng)業(yè)大學(xué)宋宣明、北京農(nóng)業(yè)大學(xué)艾曉杰等利用牛乳清進(jìn)行電泳的手段來(lái)檢測(cè)奶牛是否患有隱性乳房炎，能直觀地反映隱性乳房炎的程度。

6.2 乳汁電導(dǎo)率檢測(cè)法

健康奶牛乳汁滲透壓大約75%，由氯化鈉和乳糖形成，正常情況下奶牛乳汁中無(wú)機(jī)鹽濃度是相對(duì)恒定的。奶?；加须[性乳房炎后，由于乳汁成分的變化，無(wú)機(jī)鹽、酪蛋白膠體濃度會(huì)發(fā)生明顯變化。由此導(dǎo)致乳汁導(dǎo)電率的上升，因此可以通過(guò)檢測(cè)牛奶的導(dǎo)電率來(lái)檢測(cè)奶牛隱性乳房炎。

奶牛隱性乳房炎檢測(cè)方法雖然有多種，但養(yǎng)殖場(chǎng)戶應(yīng)根據(jù)養(yǎng)殖場(chǎng)戶自身經(jīng)濟(jì)條件和監(jiān)測(cè)目的，選擇適合本場(chǎng)的檢測(cè)方法，可以適當(dāng)多選幾種檢測(cè)方法，提高診斷正確率，從而準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)出患病奶牛，并針對(duì)性的開展用藥。提高乳品的產(chǎn)量和質(zhì)量，提高養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。