楊艷明，李登峰

（1.云南省曲靖市羅平縣畜禽改良工作站，云南 羅平 655800；2.云南省曲靖市羅平縣動物疫病預(yù)防控制中心，云南 羅平 655800）

布魯氏菌?。˙rucellosis，簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鷮偌?xì)菌引起的人畜共患的常見傳染病，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。布魯氏菌是一種細(xì)胞內(nèi)寄生的病原菌，主要侵害動物的淋巴系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)，人主要是通過皮膚、粘膜、消化道和呼吸道感染，人感染布病主要表現(xiàn)為發(fā)熱，全身無力及盜汗，四肢關(guān)節(jié)疼痛。轉(zhuǎn)為慢性者伴有關(guān)節(jié)炎、腦膜炎，可能喪失勞動能力和生育能力，治療很困難。感染牲畜平時(shí)無明顯癥狀，只是在懷孕以后易流產(chǎn)，首次感染的群體常發(fā)生大量流產(chǎn)，流產(chǎn)前陰門排出黏液或帶血的黏性分泌物。流產(chǎn)后常伴有結(jié)膜炎 、乳腺炎和跛行。以后個別母羊可能不孕 ，公羊表現(xiàn)為睪丸炎、附睪炎或關(guān)節(jié)炎。羅平縣地處滇、黔、桂三省結(jié)合部，是全國著名的旅游勝地，為此，開展對羅平布病的調(diào)查具有重要的公共衛(wèi)生意義。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

10274份被檢血清由全縣各鄉(xiāng)、鎮(zhèn)（街道）畜牧獸醫(yī)站采集于13個鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）122個行政村434個自然村2749（場）戶。采集分離的血清，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 檢測試劑及儀器

布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原（批號：2017/08/10），布病陽性標(biāo)準(zhǔn)血清、布病陰性標(biāo)準(zhǔn)血清；布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)抗原（批號：2017/06/20），勻由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，于2～8℃冷藏保存?zhèn)溆谩崈舻囊淮涡苑磻?yīng)板，其上已有劃好的4cm的圓圈，20～200μL單道移液器、500μL單道移液器、1000μL單道移液、200μL、500μL、1000μL吸頭，試管、試管架、二級生物安全柜，恒溫培養(yǎng)箱等。

2 檢測方法

2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前，將血清和抗原在室溫放置30～60min。在一次性反應(yīng)板上各格標(biāo)記好被檢血清號，然后加相應(yīng)被檢血清30mL。在被檢血清旁滴加虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原30μL。用吸頭攪動血清和抗原，換吸頭，使之充分混合，在4min內(nèi)觀察結(jié)果，設(shè)陰性血清、陽性血清對照。

2.2 試管凝集試驗(yàn)

每份被檢血清用4支試管，標(biāo)記檢驗(yàn)編號后第1管加1.15mL稀釋液，第2～4管各加入0.5mL稀釋液。取被檢血清0.1mL，加入第1管，充分混勻后吸棄0.25mL棄去。從第1管中吸取0.5mL加入到第2管，混合均勻后，再從第2管吸取0.5mL，至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去0.5mL，稀釋完畢。然后將0.5mL的20倍稀釋的抗原加入各管中。山羊的血清稀釋度 1:25、1:50、1：100、1：200。所有試管充分震蕩混勻后，置37℃溫箱培養(yǎng)24h。

3 結(jié)果判定

3.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)

在陰、陽性血清對照成立的條件下，方可對被檢血清進(jìn)行判定。受檢血清在4min內(nèi)，出現(xiàn)肉眼可見不同成度顆粒狀或絮狀凝集現(xiàn)象者判為陽性(+)，無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性(-)。出現(xiàn)陽性的再用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)一步檢測。

3.2 試管凝集試驗(yàn)

當(dāng)陰性血清對照和抗原對照不出現(xiàn)凝集(-)，陽性血清的凝集價(jià)達(dá)到其標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)±1個滴度，則試驗(yàn)成立，可以判定。否則試驗(yàn)應(yīng)重做。山羊血清樣品于1:50血清稀釋度出現(xiàn)“++”以上的凝集現(xiàn)象時(shí)，被檢血清判定為陽性反應(yīng)。

4 結(jié)果

10274份山羊血清樣品，檢出陽性羊185只，全縣平均陽性率為1.8%，羊布病血清學(xué)陽性分布范圍涉及7個鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）12個行政村16個自然村，其中羅雄為6.45%，馬街為2.39%，阿崗為1.54%，富樂為1.48%，舊屋基為0.23%，老廠為0.13%，大水井0.08%。本次試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果表明，羅平山羊布病血清陽性率較高，

5 綜合防控措施

5.1 進(jìn)一步加強(qiáng)山羊布病流行病學(xué)調(diào)查，了解山羊養(yǎng)殖基本情況，存欄、布病防控、發(fā)病情況，有無癥狀，是否用過布病疫苗等。

5.2 每年進(jìn)行2～4次的集中采樣和布病清血學(xué)監(jiān)測，應(yīng)用虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)做初篩，然后進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)(SAT)定性。

5.3 對檢出的陽性山羊100%進(jìn)行撲殺，并對撲殺山羊給予補(bǔ)助，每只補(bǔ)助標(biāo)準(zhǔn)小羊500元/只，大羊補(bǔ)1000元/只。

5.4 消毒滅源，對檢出陽性羊的場、戶廄舍、村社道路環(huán)境進(jìn)行全面消毒，對污染場地及運(yùn)輸車輛進(jìn)行消毒滅源，對撲殺的陽性山羊作深埋及無害化處理。

5.5 建立健全檢疫制度 ，把好檢疫關(guān)，加強(qiáng)縣級邊檢站的驗(yàn)證檢疫工作，嚴(yán)格檢疫執(zhí)法制度，嚴(yán)禁無證可疑畜及畜產(chǎn)品流入我縣。