溫 蕾，歐陽偉強(qiáng)，徐淦洪，袁鏡樂，陳桂霞

（1.廣東省東莞市厚街鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523960；2.東莞市萬江農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523050）

近年來，隨著現(xiàn)代獸醫(yī)學(xué)的發(fā)展，動(dòng)物產(chǎn)業(yè)化迅速擴(kuò)張，人們對(duì)食品安全要求逐漸提高，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在獸醫(yī)診斷工作中越發(fā)重要。自上世紀(jì)90年代始，我國(guó)開始重視基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)，除了提升動(dòng)物臨床診斷外，還大力推動(dòng)血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)、病源微生物的分離培養(yǎng)鑒定技術(shù)和以顯微鏡為主要設(shè)備的尿、糞、分泌物染色涂片檢查。它通過生物、微生物、血清學(xué)、物理化學(xué)等檢測(cè)以確定動(dòng)物病情、疫情，在動(dòng)物免疫效果判斷、疾病診斷治療、流行病學(xué)監(jiān)測(cè)等方面應(yīng)用廣泛。目前，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)常見的是血清學(xué)實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。

1 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)

血清學(xué)診斷是獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室用于疫病診斷和檢疫的最常見方法，它利用抗原抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)反應(yīng)原理進(jìn)行診斷。根據(jù)反應(yīng)現(xiàn)象或原理的不同，分為中和試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)(包括血凝及血凝抑制試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、協(xié)同凝集試驗(yàn)等)、沉淀試驗(yàn)、溶細(xì)胞試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光層析技術(shù)等。

1.1 血凝試驗(yàn)或血凝抑制試驗(yàn)

血凝試驗(yàn)或血凝抑制試驗(yàn)應(yīng)用廣，可檢測(cè)抗原及抗體，即能有效監(jiān)測(cè)動(dòng)物免疫效果和檢測(cè)疫病情況。血凝試驗(yàn)通常用于禽流感、新城疫、豬瘟、弓形蟲病、口蹄疫等的實(shí)驗(yàn)室初篩，雖沒有ELISA試驗(yàn)精確，卻因操作簡(jiǎn)單、成本低廉、設(shè)備簡(jiǎn)易、可測(cè)樣品廣泛、檢測(cè)出結(jié)果迅速等優(yōu)點(diǎn)受到基層實(shí)驗(yàn)室的親睞。它的缺點(diǎn)是試驗(yàn)判讀都依賴人肉眼主觀，受試劑、環(huán)境、人員因素影響大。

1.2 ELISA試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA試驗(yàn)）是國(guó)內(nèi)外常用的抗原抗體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，操作快速簡(jiǎn)便，適用于大批量樣品時(shí)的初篩定性，但是試劑盒較貴，對(duì)環(huán)境要求高，操作不當(dāng)易出現(xiàn)假陽性和假陰性，是介于傳統(tǒng)的血凝或血凝抑制試驗(yàn)和熒光PCR定量之間的性價(jià)比較高的一種方法，在養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫情況調(diào)查、病原體檢測(cè)中運(yùn)用較廣。

2 分子生物學(xué)檢測(cè)

分子生物學(xué)檢測(cè)方法在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室主要是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），是通過設(shè)計(jì)引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增放大特定的遺傳物質(zhì)片段，以確定微量病原體種類的技術(shù)。PCR根據(jù)功能不同分為鑒定PCR和定量PCR，根據(jù)擴(kuò)增模版、引物和方向等要素不同分為普通PCR、反轉(zhuǎn)錄PCR，反向PCR，不對(duì)稱PCR，重組PCR等。現(xiàn)用得最多的是實(shí)時(shí)熒光定量PCR，通過在反應(yīng)中加入探針或染料，擴(kuò)增時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化對(duì)核酸進(jìn)行定量。其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性和重現(xiàn)性好，特異性強(qiáng)，靈敏度高，有利于疾病的早發(fā)現(xiàn)。此外，PCR技術(shù)檢測(cè)樣品很廣，能夠?qū)崿F(xiàn)絕大部分的DNA和RNA樣本的定性和定量分析；還能通過復(fù)合PCR技術(shù)檢測(cè)同一病原體的分型或同時(shí)檢測(cè)多種病原體、多個(gè)點(diǎn)的基因突變。

在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室，PCR技術(shù)已經(jīng)用于獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)督的各個(gè)方面：如監(jiān)測(cè)各種疫病源頭，檢測(cè)各種動(dòng)物疾病或流感病毒、鑒定分析病毒突變亞型、鑒定致病性大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌等微生物菌株，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，協(xié)助免疫缺陷性相關(guān)疾病診斷。例如，東莞市疫病防治中心采用熒光PCR技術(shù)監(jiān)測(cè)禽流感、新城疫、豬瘟、弓形蟲等疫病，從核酸提取到出結(jié)果僅需3h，且自動(dòng)化儀器收集熒光信號(hào)避免了肉眼判斷的主觀性，檢測(cè)高效客觀、靈敏準(zhǔn)確，同時(shí)熒光PCR技術(shù)全封閉反應(yīng)無須PCR后處理,減少污染，保證了結(jié)果的可靠性和重復(fù)性，適合大規(guī)模的動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)。

目前，隨著生物芯片與熒光PCR定量技術(shù)的結(jié)合及大力發(fā)展，實(shí)時(shí)熒光定量PCR在疾病和基因診斷中的優(yōu)勢(shì)明顯，得到各個(gè)領(lǐng)域廣泛推廣。但同時(shí)它也需注意以下問題：（1）地區(qū)實(shí)驗(yàn)室間標(biāo)準(zhǔn)品、參照物的選擇統(tǒng)一性問題；（2）探針、染料試劑、儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室基建成本高的問題。（3）基層機(jī)構(gòu)人員技術(shù)培訓(xùn)問題等。

總之，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在疫病防控中的地位日益突出?？贵w檢測(cè)可以評(píng)估種群健康狀況、預(yù)防發(fā)病，幫助選擇合適的疫苗，確定疫苗首免時(shí)間，同時(shí)對(duì)疫病的監(jiān)控作用，確定混合感染中病毒病的范圍；而病源的檢測(cè)、細(xì)菌分離、鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)可有效治療和防控疫病。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)還需結(jié)合一線臨床分析得出結(jié)論，綜合考慮，充分解決現(xiàn)實(shí)問題，發(fā)揮出實(shí)驗(yàn)室最大效用。